腹泻犊牛大肠埃希菌分离鉴定与药敏试验

马海莲

（青海省海东市乐都区共和乡畜牧兽医站，青海 海东 810700）

0 引言

犊牛大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌感染引发的一种常见的细菌性疾病，临床上以新生犊牛的易感性最强，主要发生在冬春季节，具有极高的发病率和死亡率[1]。新生犊牛大肠杆菌病发病速度较快，短时间内能够造成犊牛死亡，根据其临床症状的不同，将其划分成肠炎型，肠毒素型以及办学症型，如果没有及时对病情做出有效的诊断并开展针对性的治疗，在短时间内犊牛就会死亡。很多患病牛在出生10～14日龄之后就会受到大肠杆菌的侵染，发病后体温升高到41 ℃，最高升高到42 ℃，并且在发病24 h内会排出胶冻状的黄色粪便，粪便中会夹杂很多血丝和黏液。如果犊牛没有死亡，随着病情的进一步延长，很可能会出现腕关节副关节肿大，炎症病变，有时还会表现为肺炎，支气管炎等呼吸道症状。针对犊牛大肠杆菌病应该做到早发现、早诊断、早治疗，否则后患无穷。

1 材料与方法

1.1 材料获取

本次研究大肠杆菌病分离鉴定的病源来源于一个牦牛养殖场的患病犊牛。犊牛在发病2～3 d后死亡，并且该类疾病在养殖场中传播速度较快，短时间内引起了大批量的犊牛发病。解剖犊牛，采集病死牛的肝脏和脾脏组织。大肠杆菌致病性试验过程中，主要选择使用10只小白鼠，按照原随机原则，将其划分成2个组别，1组为试验组，1组为对照组，每组5只小白鼠。病原分离鉴定过程中主要涉及到普通肉汤培养基、琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基、三糖铁斜面。同时按照大肠杆菌病生化鉴定的相关要求，配置了糖发酵管、MR试剂、VP试剂、明胶溶液、柠檬酸盐试剂、吲哚试验试剂。药敏试验期间共选择左氧氟沙星、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、头孢拉定、呋喃托因、环丙沙星、头孢先锋、恩诺沙星等抗生素，按照纸片扩散检测法来判定抗生素的敏感，在试验过程中配置了高速的冷冻离心机、灭菌仪器，凝胶成像分析系统，电子天平。

1.2 试验方法

在检测过程中，首先采集了患病牛的新鲜血液，分别进行了牛病毒性腹泻、牛腺病毒、冠状病毒、轮状病毒的抗体水平监测，由于没有免疫接种上述几种疫苗，血清中的抗体水平相对较低，没有达到相应的要求，因此排除了上述几种病毒感染的可能。随后进行了细菌分离鉴定，生化鉴定及药敏试验。将采集到的病料充分研磨后，划线接种到鲜血琼脂平板上，尖形成菌落之后转移到血液琼脂平板提纯，然后分别接种到普通肉汤、普通平板、鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板上，持续培养一段时间后，观察致病菌菌落的形态。将分离得到的致病菌再进行生化鉴定。将分离到的致病菌制作成悬浊液后，注射到小白鼠体内，与对照组一同养殖，观察小白鼠注射后的临床症状，然后对病死小白鼠进行解剖，检查肝脏、心脏、脾脏的病变，用纸片扩散法开展药敏试验。

2 结果

2.1 病原分离鉴定结果

从采集到的病变脏器组织中分离到一种菌株，将其染色后为格兰氏阴性染色的中等大小的菌落，两端钝圆，两端染色较为明显，成对排列或者单个存在。提纯后的致病菌能够使肉汤均匀浑浊，并且在普通琼脂培养基上良好的生长，菌落形态呈现湿润、光滑、凸起、半透明、边缘整齐，直径大小在2～4 mm。在血液琼脂平板上不存在溶血现象，能够在麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板上生长出粉红色和紫黑色的菌落并带有金属光泽。生化鉴定结果符合大肠杆菌的特征。

2.2 致病性检测

注射了悬浊液的小白鼠在6 h后出现了典型的临床症状，表现为精神萎靡不振，不能正常采食，全身肌肉震，蜷缩在角落中不愿走动，被毛杂乱，24 h后就会死亡，对照组小白鼠正常，没有出现死亡，对病死小白鼠解剖发现，肺脏出血，肝脏肿大。将病变脏器组织粉碎之后，制作成涂片，为革兰氏阴性染色的中等大小的杆菌，与上述分离得到的杆菌形态一致。

2.3 药敏试验

左氧氟沙星、庆大霉素、卡那霉素呈现高敏抑菌圈直径，分别在25、24和34 mm，其他几种抗生素呈现中敏或者低敏，如表1所示。

表1 药敏试验结果

3 结束语

大肠杆菌侵入肠道后会使肠黏膜出现严重的损伤，并且某些特别血清型的大肠杆菌繁殖还会产生很多肠毒素，这些肠毒素对幼龄阶段的犊牛具有较强的致病性。肠毒素中的某些蛋白质可以黏附在小肠的上皮细胞[2]，并在小肠中定居，避免被排出体外。并且这些肠毒素还会进一步抑制肠道对电解质尤其是钠的正常吸收，使大量的钠离子和水滞留在肠道中，进而引发机体严重的脱水和腹泻[3]。在疾病诊治过程中，通过对患病牛的临床症状进行判定，推测是产毒素的大肠杆菌引发的大肠杆菌病。通过动物致病性检测能够发现本次分离到达大肠杆菌菌株具有较强的致病性和毒力，是引起该养殖场犊牛发病的主要原因。

大肠杆菌耐药性检测能够发现该类致病原被很多抗生素已经产生了比较严重的耐药性，仅仅有3种抗生素为高敏抗生素。在筛选出敏感抗生素之后，从中筛选出1～2种的抗生素，对患病牛进行肌肉注射治疗，交替使用抗生素，连续用药5 d后犊牛的临床症状逐渐恢复，病情得到了有效控制，并没有继续出现发病情况。