茯苓多糖对鹦鹉鱼抗氧化、肝功能、非特异性免疫以及消化酶的影响

初宇轩，张 震，张凤东，方珍珍，孙学亮，陈成勋

（1.天津农学院天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2.天津东子水产科技发展有限公司，天津 301802）

茯苓又名茯菟、茯灵，属于担子菌纲非褶菌目多孔菌科，主要功能成分为茯苓多糖。分子结构多为β-（1→3）-d-葡聚糖，含有少量β-（1→6）糖苷键侧链。茯苓多糖具有抗病毒、抗炎、抗衰老和增强免疫力的作用。它在提高免疫力的同时，还间接发挥抗肿瘤作用。茯苓多糖分布于茯苓内部不同位置，且在菌体的不同部位，多糖含量也有所不同，经化学修饰后具有增强其生物学活性的能力。多糖在参与生命活动过程中，以缀合物的形态，对生理机能的平稳过程产生重要的调节作用。因此，可作为饲料添加剂用于高密度水产养殖。

鹦鹉鱼是很受大众喜爱的一种热带观赏鱼，其体色绚丽多彩，嘴巴的形状很像鹦鹉的喙，故而得名。近年来对茯苓多糖的研究主要是多糖成分提取和有效成分的作用，主要应用在畜牧业，如家畜家禽等抗炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力等，但在水产方面应用实例较少。为扩大茯苓多糖的应用，提高水产鱼类的体质，王庆奎等进行研究，结果发现，茯苓多糖能提高点带石斑鱼血清补体C3的含量并降低血清中A/G值，同时还能提高鱼体的抗病能力。本研究探究在饲料中添加不同量茯苓多糖对鹦鹉鱼肝功能、抗氧化、非特异性免疫以及肠道消化酶活力的影响，为日后茯苓多糖在鹦鹉鱼养殖中地应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验鱼450尾，选自天津市众民水产科研基地室外养殖池塘，对幼鱼进行驯化以适应车间内环境并投喂基础饲料。鹦鹉鱼的平均体长为（10.06±0.21）cm，平均体质量为（41.82±1.09）g。茯苓多糖购自四川省维克奇生物科技有限公司，多糖纯度（HPLC≥90%）。

1.2 饲料准备

试验分为5组，分别在基础饲料中添加不同含量的茯苓多糖制成配合饲料：FL0（添加茯苓多糖0%），FL05（添加茯苓多糖0.5%），FL1（添加茯苓多糖1%），FL15（添加茯苓多糖1.5%），FL2（添加茯苓多糖2%）。基础饲料配方和营养水平见表1。

表1 基础饲料配方

1.3 试验方法

1.3.1 饲养管理 鹦鹉鱼经过驯养后开始试验，在养殖车间水泥池中设置15个长方形网箱，水温控制在30℃左右，淡水，早、晚共投喂饲料2次，并保证充足的光照时间。每隔7 d采1次样，共取5次样品（0 d需采样），每个平行取5条鱼。采样方法：将鱼解剖，分离出肝脏和肠道，在-80℃条件下冷藏，用于抗氧化、肝功能、非特异性免疫、消化酶指标的测定。

1.3.2 样品的测定 本试验共测定12项指标，包括超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、白球比（A/G）、谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）、溶菌酶、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP），以及前肠的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶。检测用试剂盒均来自南京建成生物工程技术研究所。

1.4 数据分析

试验数据采用Excel 2010软件进行整理，采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析，差异显著性分析（<0.05）。结果用平均值±标准差的形式表示。

2 结果与分析

2.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏抗氧化能力的影响

2.1.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏SOD活力的影响由表2可知，7 d时，FL1、FL15、FL2组SOD活力显著高于FL0、FL05组（<0.05)；14 d时，FL1组SOD活力显著高于其他组（<0.05)；21 d时，FL1、FL15组活力显著高于其他组（<0.05)；28 d时，FL0、FL1组活力显著高于其他组（<0.05）。

表2 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏SOD活力的影响 U·（mg·prot）-1

FL05组 中，7，14 d的SOD活 力 显 著 高 于0，21，28 d（<0.05)；FL1组中，7~28 d的SOD活力显著高于0 d（<0.05)；FL15组中，7 d的SOD活力显著高于0，14，21，28 d（<0.05)；FL2组中，7，14 d的SOD活力显著高于0，21，28 d（<0.05)。

2.1.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏T-AOC活力的影响由表3可知，7 d时，FL2组T-AOC活力显著高于FL0、FL05组（<0.05)；14 d时，FL2组T-AOC活力显著高于其他组（<0.05)；28 d时，FL05、FL15、FL2组T-AOC活力显著高于FL0组（<0.05)。

表3 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏T-AOC活力的影响 mmol·mg-1

FL0、FL05组中，0 d的T-AOC活力显著高于7~28 d（<0.05)；FL1组中，0，7 d的T-AOC活力均显著高于14~28 d（<0.05)；FL15组中，0，7 d的T-AOC活力显著高于14~28 d（<0.05)；FL2组中，0，7 d的T-AOC活力显著高于14~28 d（<0.05)，14，21 d的T-AOC活力显著高于28 d（<0.05)。

2.1.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏MDA含量的影响由表4可知，14~21 d时，FL0、FL05、FL1组的MDA活力均显著低于FL15、FL2组（<0.05)；28 d时，FL0、FL05、FL1、FL15组MDA含量显著低于FL2组（<0.05)。

副中心周边的农村公路，在实际生活中已经半兼顾城市道路的功能，但道路等级依然是农村公路属性. 对于这部分农村公路规划应着眼于未来，尤其应注重提升慢行交通、景观生态、公共交通以及智能交通管理在规划中的地位，同时使其满足可以铺设市政管线的要求. 首先要进行改造升级，如道路宽度不够、交通基础设施不健全等问题要全面考虑，改造同时可将重心转移到大力发展公共交通的目标上，有条件的地区可设置交通专用道，从而为公交线路更广泛的覆盖农村地区，方便农村居民的出行提供有力条件. 对于居民出行需求强烈的地区，道路设计要求机非分离.

表4 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏MDA含量的影响 nmol·（g·prot）-1

FL0、FL05组中，0，7，28 d的MDA含量均显著低于14，21 d（<0.05)；FL1组中，0，21，28 d的MDA含量显著低于7，14 d（<0.05)；FL15组中，0，28 d的MDA含量显著低于7~21 d（<0.05)；FL2组中，0，28 d的MDA含量显著低于7~21 d（<0.05)。

2.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝功能的影响

2.2.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼A/G的影响 由表5可知，7 d时，FL0组A/G值显著高于FL05、FL15、FL2组（<0.05)；14 d时，FL0组、FL15组A/G值显著高于FL05、FL1、FL2组（<0.05)；28 d时，FL2组A/G值显著高于其他组（<0.05)。

表5 茯苓多糖对鹦鹉鱼A/G值的影响

FL0组中，0 d A/G值显著高于其他时期（<0.05)；FL05组中，0，21 d A/G值显著高于28 d（<0.05)，28 d A/G值显著高于7，14 d（<0.05)；FL15组中，0，21 d A/G值显著高于7，14 d（<0.05)，28 d A/G值显著高于其他时期（<0.05)；FL2组中，28 d A/G值显著高于其他时期（<0.05)。

2.2.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼GOT活力的影响 由表6可知，7 d时，FL0组GOT活力均显著低于FL05、FL1、FL15、FL2组（<0.05)）；14 d时，FL0、FL2组GOT活力显著低于FL05组（<0.05)；21 d时，FL0、FL1、FL2组GOT活力显著低于FL05组（<0.05)。

表6 茯苓多糖对鹦鹉鱼GOT活力的影响 U·（g·prot）-1

FL0组中，0 d GOT活力显著高于其他各个时期（<0.05)；FL15组中，0，14，28 d GOT活力显著低于7，21d（<0.05)；FL2组中，14~28 d GOT活力显著低于0，7 d（<0.05)。

2.2.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼GPT活力的影响 由表7可知，7 d时，FL0、FL05组GPT活力显著低于FL1组（<0.05)；28 d时，FL0、FL05、FL15组GPT活力显著低于FL1、FL2组（<0.05)。

表7 茯苓多糖对鹦鹉鱼GPT活力的影响 U·（g·prot）-1

FL0、FL05组中，14，21，28 d GPT活力显著低于0，7 d（<0.05)；FL1组中，7 d的GPT活力显著高于各个时期（<0.05)；FL15组中，14，21，28 d GPT活力显著低于0，7 d（<0.05)；FL2组中，7 d的GPT活力显著高于各个时期（<0.05)。

2.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼非特异性免疫的影响

2.3.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏溶菌酶活力的影响由表8可知，14 d时，FL05组溶菌酶活性显著高于其他各组（<0.05)；21 d时，FL05组的溶菌酶活力显著高于其他组（<0.05)；28 d时，FL05组溶菌酶活力显著高于FL0、FL1、FL2组（<0.05)。

表8 茯苓多糖对鹦鹉鱼溶菌酶活力的影响 U·（g·prot）-1

2.3.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏AKP活力的影响由表9可知，7 d时，FL2组AKP活力显著高于其他组（<0.05)；14 d时，FL2组AKP活力显著高于其他组（<0.05)；21 d时，FL15、FL2组AKP活力显著高于FL0、FL05、FL1组（<0.05)。

表9 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏中AKP活力的影响 U·（g·prot）-1

FL05组中，21 d AKP活力显著高于7，28 d（<0.05)；FL15、FL2组中，7，14，21，28 d AKP活力差异不显著（>0.05)，但均显著高于0 d（<0.05)。

2.3.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏ACP活力的影响由表10可知，14 d时，FL1、FL15、FL2组ACP活力均显著高于其他组（<0.05)；28 d时，FL2组ACP活力显著高于其他组（<0.05)。

表10 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝脏中ACP活力的影响 U·（g·prot）-1

FL05组中，14，21 d ACP活力显著高于0，7，28 d（<0.05)；FL1组中，14，21 d ACP活力显著 高 于0，7，28 d（<0.05)；FL15组中，14 d ACP活力显著高于0，7，28 d（<0.05)。

2.4 茯苓多糖对鹦鹉鱼肠道消化酶活力的影响

2.4.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼前肠蛋白酶活力的影响 由表11可知，FL05组中，7，14 d蛋白酶活力显著高于其他时期（<0.05）；FL1组中，14，21 d蛋白酶活力显著高于其他时期（<0.05）；FL15组中，14 d蛋白酶活力显著高于其他时期（<0.05）。

表11 茯苓多糖对鹦鹉鱼前肠蛋白酶活力的影响 U·（g·prot）-1

14 d时，各试验组蛋白酶活力均显著高于对照组(<0.05)；28 d时，FL1、FL2组蛋白酶活力显著高于FL0、FL05组（<0.05）。

2.4.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼前肠淀粉酶活力的影响由 表12可 知，FL2组 中，7，28 d的 淀 粉 酶 活力显著高于其他时期（<0.05）。14，21 d时试验组与对照组淀粉酶活性的差异性均不显著（>0.05）；在7 d时，FL2组的淀粉酶活力最高。

表12 茯苓多糖对鹦鹉前肠道淀粉酶活力的影响 U·（g·prot）-1

2.4.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼前肠脂肪酶活力的影响由表13可知，7，14，21 d时FL15组的脂肪酶活力显著高于其他组（<0.05)。7，14 d时FL1、FL2组的脂肪酶活力显著高于FL0、FL05组（<0.05)。FL1组中，14 d的脂肪酶活力显著高于其他时期（<0.05)。

表13 茯苓多糖对鹦鹉鱼前肠脂肪酶活力的影响 U·（g·prot）-1

3 结论与讨论

3.1 茯苓多糖对鹦鹉鱼抗氧化能力的影响

茯苓多糖具有较强的抗氧化能力，包括对DPPH自由基的清除能力、对Fe的还原能力以及对羟自由基的抑制能力，而且会随着其浓度的加大而增强。茯苓多糖能够减少机体内自由基对细胞的破损，也能够激活动物机体的抗氧化系统，从而达到保护动物本身的效果。SOD的主要功效是对超氧离子自由基催化进行歧化反应。陈林等研究结果表明，茯苓胞内多糖为优良的天然抗氧化活性多糖，可以提高生物的抗氧化水平。黄聪亮等研究表明，茯苓多糖能提高糖尿病小鼠肾组织中SOD、GSH、CAT活性，降低MDA的含量。本研究结果FL1组SOD活力14 d时最高且显著高于其他组（<0.05)，表明在饲料中添加1%的茯苓多糖可提高鱼体的SOD活力。MDA是机体脂质氧化程度的重要体现，随着投喂时间的增加，MDA含量呈先升高后降低的趋势，在28 d时，肝脏的MDA含量恢复正常水平。T-AOC是反映机体对外界胁迫的代偿能力以及机体内分解与清除氧自由基能力的综合体现，研究结果表明，长时间添加T-AOC会对鹦鹉鱼的总抗氧化能力产生抑制作用。以上数据与龚泽修等研究茯苓多糖对母猪抗氧化指标的影响结果相一致。上述研究结果证实茯苓多糖可以提高动物机体的抗氧化能力，但对脂质体内氧化反应物影响不显著。

3.2 茯苓多糖对鹦鹉鱼肝功能的影响

茯苓提取物的保肝活性研究早在20世纪90年代就已受到广泛关注。研究表明，茯苓水溶性多糖和醇溶性三萜对肝炎、肝硬化等多种肝脏病症均表现出明显的防治作用。程玥等通过研究得出，3种茯苓提取物对CCL4诱导的小鼠肝损伤均具有不同程度的保护作用，以茯苓多糖效果最为显著，其机制可能与增强肝脏抗氧化能力及减轻炎症有关。吴科锐等研究羧甲基茯苓多糖的药理作用结果表明，羧甲基茯苓多糖具有免疫调节、护肝减毒、抗氧化等作用。在试验中通常用A/G来衡量鱼类肝脏的健康状况，当肝脏受到严重损伤时白蛋白含量下降，血清中的A/G会偏低；当球蛋白含量升高时，虽然也会使A/G值降低，但因球蛋白是免疫蛋白，所以这意味着此时机体免疫力有所提升。本研究在投喂茯苓多糖的第7天和第14天，除FL0组外，鱼体出现了A/G值普遍偏低的情况。崔培等通过试验发现，投喂500，350 mg·kg的甘草甜素7 d会降低点带石斑鱼血清A/G值，这与本研究所得出的结论基本相符。GPT和GOT是反映肝损伤最敏感的指标，当肝脏受损时，GOT和GPT会被释放到血液中。GPT活力随着试验天数的递增呈现出先上升后下降的趋势，除FL0组外，其他组14，21 d活力均显著低于0，7 d，表明茯苓多糖可以降低锦鲤肝脏的受损伤程度，从而提高肝功能。

3.3 茯苓多糖对鹦鹉鱼非特异性免疫的影响

溶菌酶是鱼类重要的非特异性免疫指标，其作用机制是破坏细胞壁使细菌溶解。蒋逸凡等研究茯苓多糖及其免疫调节功能结果表明，茯苓多糖可提高机体非特异性免疫能力，这与本研究结果相一致。在饲料中添加适量的茯苓多糖能够提高鱼体内溶菌酶的活力。AKP与ACP是一种彼此联系的磷酸单脂酶，血细胞在进行吞噬的过程中会释放ACP，因此亦是重要的非特异性免疫指标。本研究结果表明，茯苓多糖可以提高鱼体肝脏中溶菌酶、AKP、ACP的活力，其中14 d时ACP提高较为显著（<0.05)，但不宜长时间添加。这与黄玉章通过试验得出，黄芪多糖可以在一定范围内提高奥尼罗非鱼血清中ACP的活力结果基本相符。

3.4 茯苓多糖对鹦鹉鱼肠道消化酶的影响

蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶是动物肠道内最常见的消化酶。多糖对于动物消化酶活性的影响国内外学者一直都有研究。邱小琮等研究表明，异育银鲫摄食添加含有中草药成分的饲料，肠道的消化酶活性明显提高（<0.05）。吉红等在泥鳅的饲料中添加不同含量的中草药添加剂，能显著提高泥鳅的消化酶活性(<0.05)。本研究结果表明，茯苓多糖对蛋白酶、脂肪酶活性都有提高，而且在茯苓多糖含量为1.0%，添加14 d时消化酶活性达到最大值。对脂肪酶有不显著的抑制作用，这与龚全研究云芝多糖对奥尼罗非鱼消化酶的影响结果相一致。此外多糖还是合成蛋白与脂肪的物质，这表明茯苓多糖对鱼体消化酶活性的影响与脂肪含量、蛋白水平等密切相关，其作用机理还需要深入研究。

综合以上结果表明，在饲料中添加1%的茯苓多糖可增强鹦鹉鱼肝功能、抗氧化、非特异性免疫以及肠道消化酶的活力，但应根据实际调整，建议添加14 d，效果最佳。