TTF-1在子宫内膜癌中的表达与临床意义

徐春红，戴保秀，潘 云

（1.大理护理职业学院，云南大理 671006；2.玉溪市人民医院，云南玉溪 653100；3.大理大学第一附属医院，云南大理 671000）

子宫内膜癌（endometrial carcinoma，EC）为女性生殖系统常见的恶性肿瘤，在全球范围内发病率有逐年上升的趋势。据报道在每10 000例国外女性中，约有10～19例子宫内膜癌患者〔1〕。研究〔2〕表明我国子宫内膜癌的发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中排列第二，近年来其病死率也呈现上升趋势。国际妇产科联盟（FIGO）分期的Ⅰ期及Ⅱ期子宫内膜癌患者5年存活率一般在90%以上，Ⅲ期患者5年存活率为57%~66%，而Ⅳ期患者5年存活率仅为20%~26%〔3〕，目前子宫内膜癌的预后并不理想。因此，阐明子宫内膜癌的病因、发病机制，对改善子宫内膜癌的预后尤为关键。甲状腺转录因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是肺癌、甲状腺癌病理诊断中常用的免疫组化指标。TTF-1的基因定位于人类染色体14q13，具有器官特异性〔4〕。在相关器官组织的形态发生发育、分化过程中，TTF-1都扮演着关键的角色。此外，部分基因的表达调节与TTF-1有关，保持维护器官组织的功能也与TTF-1有关。研究报道在泌尿系统部分小细胞癌、乳腺癌等病变中，均出现不同程度的TTF-1表达〔5〕，说明TTF-1的表达谱比较宽泛。因此，临床工作中，有必要重新认识TTF-1在子宫内膜癌中的诊断意义。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 实验标本 标本采集自2010年1月至2015年6月在大理大学第一附属医院就诊的患者，其中，子宫内膜正常者11例（以下称“正常组”）、子宫内膜增生者17例（以下称“增生组”）、子宫内膜癌者45例（以下称“内膜癌组”），共计73例。依据世界卫生组织的分级标准，将内膜癌组又分为：高分化组（25例）和中、低分化组（20例）。临床中一般将子宫内膜癌分为Ⅰ型子宫内膜样腺癌和Ⅱ型子宫内膜癌。按此标准对研究标本进行分期，Ⅰ型33例，Ⅱ型12例。纳入实验的标本，手术前没有实施相关的诊疗方案，如放疗、诊断性手术等。

1.1.2 主要试剂TTF-1一抗，即用型鼠抗人TTF-1单克隆抗体（Dako公司，型号：8G7G3/1）；TTF-1二抗（羊抗，Dako公司）；DAB显色剂（Dako公司），按说明书以DAB原液与DAB稀释液1∶50的比例混合，避光保存；磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）；柠檬酸盐缓冲液（0.01 mol/L，pH 6.0）。

1.2方法

1.2.1 免疫组化SP法检测TTF-1表达 选取蜡块切片，厚度4 μm。切片脱蜡及水化，0.5% H2O2封闭内源性过氧化物酶，柠檬酸盐缓冲液高温修复组织抗原（220 s），冷却后用PBS冲洗。5%羊血清室温孵育30 min；加入TTF-1一抗，4℃冰箱过夜。第2天取出复温1 h，PBS冲洗，加入TTF-1二抗，室温孵育60 min。DAB试剂显色，苏木素复染细胞核、脱水、透明，中性树胶封片。PBS代替一抗，作阴性对照；已知TTF-1阳性的肺腺癌，作阳性对照。

1.2.2 判断标准TTF-1阳性结果定位在目标细胞核。表现为相应细胞的细胞核中有棕黄色颗粒呈现，阳性率＞5%判断为阳性。

1.2.3 统计分析 实验数据使用SPSS 17.0软件进行统计分析，运用χ2检验进行计数分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种不同内膜组织标本中TTF-1的表达 免疫组化染色结果显示，TTF-1表达于子宫内膜腺体腺上皮细胞核，细胞核中出现棕褐色的颗粒。在正常增生期，可见部分增生子宫内膜腺体腺上皮细胞核TTF-1阳性表达；在正常分泌期，可见较多分泌期子宫内膜腺体腺上皮细胞核TTF-1阳性表达；在复杂性增生子宫内膜中，可见部分子宫内膜腺体腺上皮细胞核TTF-1阳性表达。中、高分化子宫内膜癌中，可见部分癌细胞核TTF-1阳性表达；低分化子宫内膜癌中，可见大部分癌细胞核TTF-1阳性表达。见图1~2。

图1 TTF-1在正常子宫内膜及子宫内膜增生组织中的表达（20×）

图2 TTF-1在不同分化程度子宫内膜癌中的表达（40×）

2.2 TTF-1在不同子宫内膜组织中的表达情况TTF-1在正常组、增生组、内膜癌组中的阳性率分别为45%、35%、16%。与正常组比较，内膜癌组中TTF-1阳性率较低（P=0.030），表明仅部分内膜癌表达TTF-1。见表1。33例Ⅰ型子宫内膜癌及12例Ⅱ型子宫内膜癌中，TTF-1的阳性率分别为18%、8%，两种类型子宫内膜癌中TTF-1的阳性率差异无统计学意义。见表2。

表1 不同子宫内膜组织中TTF-1的表达

表2 子宫内膜癌Ⅰ型及Ⅱ型中TTF-1的表达

2.3 TTF-1表达与临床特征的关系 在内膜癌组中，与高分化子宫内膜癌比较，TTF-1在中、低分化子宫内膜癌中的表达明显上调（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宫内膜癌中表达有差异，且随肿瘤的分化程度降低而逐渐升高。TTF-1在子宫内膜癌中的表达，与患者年龄（P=0.465）、民族（P=0.826）、手术病理分期（P=0.180）、肿瘤浸润肌层深度（P=0.660）、有无转移（P=0.290）均无相关性。见表3。

3 讨论

Niu等〔6〕研究表明，TTF-1在28例正常子宫内膜组织中的阳性率为54%。Sullivan等〔7〕报道TTF-1在216例正常子宫内膜组织中的阳性率为55%，45例单一增生内膜组织中TTF-1的阳性率为53%，25例异型增生内膜标本中TTF-1的阳性率为52%。何惠嫦等〔8〕报道了23例子宫内膜增生未恶变组中TTF-1的阳性率为60.8%，比内膜增生发生恶变组中TTF-1的阳性率高，且差异有统计学意义。陈苏琼等〔9〕研究表明在32例正常子宫内膜组织中，TTF-1的阳性率为68.75%。张越等〔10〕研究也表明，30例正常子宫内膜组织中TTF-1的阳性率为70.00%，30例非典型增生子宫内膜组织中TTF-1的阳性率为53.33%，其结果提示正常子宫内膜组织中TTF-1显著表达，而增生内膜中TTF-1的表达呈下降趋势。本研究中正常组11例，增生组17例，其TTF-1的阳性率分别为45%、35%，正常子宫内膜及子宫内膜增生病变中TTF-1的表达差异无统计学意义。本研究及上述研究均提示正常子宫内膜及子宫内膜增生症中，均出现不同程度的TTF-1表达。TTF-1可能参与了正常子宫内膜或子宫内膜增生症发生恶变的过程，但其机制不清。与上述研究相比，本研究正常子宫内膜及子宫内膜增生中TTF-1的阳性率偏低，可能与研究病例少、不同研究者采用的TTF-1阳性标准不同等因素有关。

钱萍等〔11〕检测了TTF-1在35例子宫内膜样癌、11例子宫内膜透明细胞癌中的表达，阳性率分别为5.7%、9.1%。Fujiwara等〔12〕研究了55例子宫内膜样腺癌，其TTF-1的阳性率为10%。Sullivan、何惠嫦、陈苏琼及张越等〔7-10〕分别研究了106、28、30、80例子宫内膜癌，TTF-1的阳性率分别为64%、44.4%、36.67%、33.75%。本研究TTF-1在45例子宫内膜癌中的阳性率为16%，其中I型子宫内膜癌TTF-1阳性率18%、Ⅱ型子宫内膜癌TTF-1阳性率8%，研究结果比钱萍等〔11〕、Fujiwara等〔12〕报道的阳性率稍高；比Sullivan、何惠嫦、陈苏琼及张越等〔7-10〕报道的阳性率偏低。但本研究中TTF-1在子宫内膜癌组中的阳性率明显低于正常子宫内膜组（P=0.030）。相关研究显示TTF-1在子宫内膜癌中的表达，不同试验的结果有差异；此结论与检测过程中采用的TTF-1抗体及实验标本不同、TTF-1反应体系不同等因素有关。

本研究中TTF-1在子宫内膜癌中的表达与患者民族、年龄、手术病理分期、肿瘤浸润肌层深度及有无转移等均无相关性。子宫内膜癌组织中表达TTF-1，不影响患者的手术分期，结果与Sullivan等〔7〕的报道相近。本研究中子宫内膜癌的分期、肿瘤的浸润转移，与其是否表达TTF-1均无相关性，该结论与何惠嫦等〔8〕的研究结果有差异。原因可能是：病例在3组不同内膜组织标本中分布不均匀；不同研究过程运用的TTF-1抗体克隆号不一致；其他一些生物学因素的影响。Sullivan等〔7〕初次报道子宫内膜组织标本中出现TTF-1阳性，提示TTF-1发挥肿瘤抑制因子的功能，但机制不清。有研究〔13〕也显示TTF-1在鼠肺腺癌模型中的表达，影响肿瘤细胞的浸润、转移；同时TTF-1表达下调，影响肿瘤的去分化及转移潜能的增加。研究〔10〕发现在子宫内膜癌恶性变过程中，TTF-1也发挥了肿瘤抑制因子的功能，此外，在肿瘤进展过程中，TTF-1的作用丧失及表达减少，可能影响肿瘤细胞的增殖。鲁晓东等〔14〕研究提示TTF-1及PTEN基因表达降低，会影响肿瘤的肌层浸润、FIGO分期及盆腔淋巴结的转移。低级别子宫内膜癌中TTF-1的表达较少，患者的预后不好〔15〕。本研究的子宫内膜癌组中，与高分化子宫内膜癌比较，TTF-1在中、低分化子宫内膜癌中的表达明显上调（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宫内膜癌中表达有差异，且随肿瘤的分化程度降低而逐渐升高，与Ervine等〔15〕的研究结果相近。但本研究未进行患者的随访，无生存曲线分析结果，未能阐明不同分化程度的子宫内膜癌中TTF-1的表达是否会影响患者预后。

综上所述，在子宫内膜癌发展过程中，TTF-1可能参与了肿瘤的进展。鉴于部分子宫内膜癌表达TTF-1，当女性患者其他脏器或组织出现来源部位不明转移瘤且TTF-1阳性时，要考虑有子宫内膜癌发生的可能。病理工作中需要进一步分析，不同类型的子宫内膜组织标本表达TTF-1的特点，并揭示其生物学机制，为子宫内膜癌治疗提供病因学的依据。