超高效液相色谱法测定枸杞中枸杞酸的含量

枸杞是我国传统的名贵中药材，其果实为枸杞子，属于茄科枸杞属。枸杞子作为药食同源的可食用品种，具有很高的综合价值

。《中国药典》中记载，枸杞子功能主治为滋补肝肾、益精明目

。近年来，随着国内外大量科学的研究，枸杞子的多种功效也被进一步挖掘，例如，服用枸杞子多糖的糖尿病患者，红细胞异形率与溶血脆性均基本恢复正常，同时还能有效保护四氧嘧啶损伤的胰岛细胞，并且能抑制由四氧嘧啶造成的MDA生成量上升

；枸杞子能增强机体呼吸系统的免疫功能，从而提高呼吸系统的免疫能力

；枸杞提取物通过诱导SKN-1介导的抗氧化系统来抑制过量活性氧的产生，从而抑制Aβ的产生并抑制线粒体损伤，提示其具有神经保护作用，可用于阿尔茨海默病的预防和治疗

。动物实验显示，枸杞子提取液还能增强小鼠皮肤内SOD活性，增加皮肤中胶原蛋白量，并减少脂质过氧化物丙二醛的含量

。枸杞子提取物还可以通过激活PKA-CREB信号通路，增加IIa型氧化肌纤维和有氧呼吸的比例来提高小鼠的平均跑步距离，增强小鼠肌肉耐力

。在临床上，枸杞子的用法非常多，可单味煮服，也可以制作成药酒应用，或者与其他药物配伍同服。枸杞子还可以做成丸子、药膏、药散服用，而且枸杞子具有丰富的营养成分，保健价值受到人们的高度关注，其作为膳食补充剂可以通过调节肠道微生物组的组成变化预防炎症性肠病

。

根据《社会救助暂行办法》，有些应该纳入扶贫兜底的对象不符合现行农村低保评定标准，应与中央《打赢脱贫攻坚战的决定》保障兜底要求有效衔接，扶贫与低保“两线合一”有待明确，另外在脱贫时间上省市县区不一致，有些市区县甚至提出提前两三年建成小康社会，这意味着脱贫攻坚任务也要提前，兜底工作如果严格按照中央脱贫时间节点实现“两线合一”，极易引发新的社会矛盾。

以宁夏枸杞来说，平均每100 g枸杞中含有粗蛋白4.5 g、粗脂肪2.3 g、碳水化合物9.1 g、类胡萝卜素0.096 g等，同时还含有多种氨基酸，微生物，钙、钾等微量元素

。枸杞酸也是唯一一种从天然资源提取的稳定维生素C前体

。2004年，日本学者Toyoda-Ono等从宁夏枸杞和北方枸杞的干果中分离纯化得到枸杞酸，即2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸。枸杞酸是枸杞特有的天然成分，是从天然资源中发现的一种新型、稳定、纯天然L-抗坏血酸(维生素C)前体物质。研究表明，枸杞中的枸杞酸含量可以和新鲜柠檬中的维生素C含量相媲美，且抗氧化能力相比抗坏血酸更持久，能够长时间存在于体内发挥抗氧化活性，具有更高效的清除自由基能力，有效抑制黑色素的生成

。枸杞酸在抗衰老、抗肿瘤和改善结肠炎等方面也发挥了药理作用

，其显著增强了秀丽隐杆线虫中SOD和CAT等抗氧化酶的活性，同时显著降低了脂褐质水平并减轻了蛋白质毒性

。目前，枸杞中枸杞酸测定方法研究较少，对枸杞酸在枸杞子中含量分布也研究不多。因此，本研究通过分析枸杞子中枸杞酸的检测方法，并检测不同批次中枸杞酸的含量，为枸杞子的质量评价提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

枸杞，均为市售品；枸杞酸对照品(含量按99.7%计)，上海诗丹德标准技术服务有限公司；乙腈(色谱纯)，上海安谱实验科技有限公司；乙酸铵(分析纯)，国药试剂；水为本实验室自制超纯水。

1.2 仪器与设备

Agilent1290高效液相色谱(带Chemstation色谱工作站)，美国安捷伦科技有限公司；岛津十万分之一电子天平，日本岛津公司；ELGA纯水机，英国埃尔格公司；超声机，宁波新芝生物科技股份有限公司；Fresco-21常温离心机，美国赛默飞世尔科技公司。

1.3 方法

1.3.3 供试药材溶液的制备 取粉碎后的枸杞样品粉末约1 g，精密称定，加水25 mL，称定重量，超声处理25 min，冷却至室温，加水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密移取续滤液1 mL，至10 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，作为供试品溶液。

（1）DPPH·自由基清除能力测定参考等SLin的方法[28]。谷光甘肽作为标准品，绘制标准曲线回归方程 为 ：y=0.301x+0.203（0.301～1.81 mg/mL，R 2=0.996）；y为DPPH自由基清除率，x为谷光甘肽浓度。

取枸杞酸标准溶液，每隔0、1、2、4、8、12、24 h进样1次，每次1 μL，测得枸杞酸峰面积RSD为0.55%，表明枸杞酸对照品溶液在放置24 h内稳定。

取枸杞酸标准溶液，连续进样6次，每次1 μL，测得枸杞酸峰面积RSD为0.18%，表明仪器的精密度好。

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取枸杞酸对照品14.01 mg置于25 mL容量瓶中，加流动相液稀释至刻度，摇匀，得枸杞酸标准贮备液浓度为0.560 4 mg/mL。

1.3.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide Column 130A(2.1×150，1.7μm)。流动相：乙腈(A)，0.05 mol/L乙酸铵溶液(B)；0～10 min 78%A～65%A；10～12 min 65%A～55%A；12～15 min 55%A。体积流量为0.30 mL/min，检测波长为260 nm，柱温25 ℃。

2 结果与分析

2.1 线性范围的考察

精密量取枸杞酸对照品标准贮备液适量，用流动相分别稀释成浓度为5.6、28.0、56.0、140.1、280.2 μg/mL的5个工作液，按照上述色谱条件分别进样1 μL，测定。以峰面积值(

)为纵坐标、对照品进样量(

)为横坐标绘制标准曲线，枸杞酸的回归方程为：

=6.832 0

-0.283 7(

=1.000 0)，枸杞酸在5.6～280.2 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2 精密度试验

气缸处于收缩状态时（见图1a），扭簧作用下4杆机构处于内收状态，活动窗扇重叠与固定窗扇内侧，有效降低空气阻力对活动扇页及联动机构的冲击。此时车窗净开度不为220mm。

2.3 稳定性试验

管理者乐观情绪、研发支出与企业成长性..................................................................................................................江新峰 张敦力 汪晓飞（22）

2.4 重现性试验

精密称取同一批次枸杞样品粉末6份，按上述供试品制备方法制得供试品溶液，按色谱条件检测，进样量为1 μL，计算枸杞酸的含量，枸杞酸含量平均值为97.5 mg/g，RSD为1.32%。

2.5 加样回收率试验

取已知含量的枸杞样品粉末9份，精密称定，分别准确加入枸杞酸80%、100%、120%各3份，按上述供试品制备方法制得供试品溶液，按色谱条件检测，进样量为2 μL，测得枸杞酸加样回收率为94.5%，RSD为1.63%。

2.6 不同产地的枸杞酸的含量测定

取市售不同产地的枸杞样品，按上述供试品制备方法制得供试品溶液，按色谱条件检测，进样量为1 μL，样品进样2次，测定枸杞酸的含量，典型供试品与标准品图谱见附图，不同产地分析结果见附表。

3 结论与讨论

采用超高效液相色谱法对4个主要产地、8种不同批次枸杞中的枸杞酸含量进行测定，结果表明，枸杞中枸杞酸的含量变化差异大，这种差异在不同产地之间均存在，可能与种类及种植过程有较大的关系。整体而言，宁夏产的枸杞酸含量较其他产地高，但是批次间差异也较大。本研究通过方法学验证，证明该方法有较好的线性、精密度和回收率，与前期研究方法相比

，受枸杞中其他类物质干扰较少，分离度较好，具有很好的准确性，可作为枸杞中枸杞酸的质量控制方法。

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