血清学检验联合细菌学检验应用于布鲁氏菌感染临床诊断的效果分析

何丽萍

（河西学院附属张掖人民医院，甘肃 张掖 734000）

布鲁氏菌感染所致的布氏菌病是一种于世界范围内流行的人畜共患病，亦是包括中国在内的众多国家面临的重大公共卫生难题。近年来，随着人们生活方式，尤其是饮食习惯的改变，此病在人类中的发生率不断攀升，且有从内蒙古等牧区蔓延至非牧区的趋势[1]。布鲁氏菌为一种革兰氏阴性的短小杆菌，可于牛、羊等诸多家畜体内存活。当人类受到此菌感染后急性期可出现发热、关节痛等症状，导致全身器官组织发炎、肉芽肿形成，随病情发展，其可演化成慢性，进而会增加治疗难度，并显著损害患者躯体健康[2]。因此，应及早对此病做出诊断，以便使患者及时接受规范治疗，控制病情发展，从而使其获得理想预后。目前，临床用于布鲁氏菌感染检验的方法颇多，其中以血清学检验、细菌学检验较为常用。但研究发现，上述检验方法单一应用于布鲁氏菌感染诊断中，漏误诊率较高[3]。为此，本研究选取2018年3月—2020年7月本院接收的疑似布鲁氏菌感染患者104例，分析了血清学、细菌学检验单一应用及联合应用于此病诊断中的效能，以期为此病今后诊断工作的开展提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 资料

研究对象为河西学院附属张掖人民医院2018年3月—2020年7月接收的高度怀疑为布鲁氏菌感染的104例患者，纳入标准：（1）不明原因发热，夜间症状加重，疑似布鲁氏菌感染；（2）均行血清学及细菌学检验；（3）患者对本研究均知情同意。排除标准：（1）存在其他严重疾患；（2）感冒、血液病等其他原因引起的发热；（3）患有精神疾病；（4）临床资料缺失。患者中男55例，女49例；年龄最小21岁，最大65岁，平均（43.06±6.94）岁；病程最短1 d，最长19 d，平均（9.74±2.57）d；从事行业：家畜饲养员41例，兽医14例，屠夫22例，皮毛加工工人27例。

1.2 方法

取受检者晨起空腹肘静脉血3 mL进行检验。血清学检验方法：将静脉血在离心机下进行离心处理（3 000 r/min，10 min），取上清液。于事先备好的6支试管内均滴入0.5 mL生理盐水，随后将0.5 mL抗体滴入第1支试管内，并混合均匀。从第1支试管内吸取0.5 mL液体滴入第2支试管内，混均后从中吸取0.5 mL液体滴入第3支试管内，如法炮制，直至第5支试管。然后从第5支试管内吸取0.5 mL并去除，于1～5支试管内均加入0.5 mL布鲁氏菌抗体，第6支试管作为对照组，不滴加抗体。将6支试管放入37℃环境中，培养12 h，观察有无抗原凝集情况出现。细菌学检验：将血液标本接种于干琼脂培养基上，置于35℃孵育箱内培育18～24 h，培养基内见到菌落时，做分离鉴定。

此次检验需由2名或以上工作人员进行操作，操作过程需严格依照相应规程，如检验结果存在出入，应继续检验，以确保检验真实可信。

1.3 观察指标

参照《布鲁氏菌病诊断标准》（WS269-2007）[4]对疑似患者做最后确诊。当在试管内发现1∶100 的抗原滴度、凝集现象等级在（+）（+）以上即可确定为阳性。了解血清学、细菌学检验及二者联合对阳性检出情况，然后以最后确诊结果为依据，计算各自的诊断灵敏度、特异度及准确度，并分析其和最终诊断结果是否具有一致性。

1.4 统计学方法

应用SPSS22.0软件处理数据，用“百分比”描述计数资料，采用χ2检验，当P＜0.05时，差异具有统计学意义。一致性检验采用Kappa，Kappa≥0.75、0.4＜Kappa＜0.75、Kappa≤0.4分别表示一致性较好、中等、较差。

2 结果

2.1 比较血清学、细菌学检验及二者联合检验对布鲁氏菌感染的阳性检出率

104例疑似患者中，最终确诊73例，血清学检验检出阳性74例，阴性30例；细菌学检验检出阳性71例，阴性33例；二者联合检验检出阳性73例，阴性31例，详见表1。

表1 血清学、细菌学检验及二者联合的阳性检出率比较 例（n）

2.2 比较血清学、细菌学检验及二者联合检验的诊断效能

以最终确诊结果为金标准，得出血清学联合细菌学检验诊断的灵敏度、特异度、准确度均明显高于单一方法检验（P均＜0.05），详见表2。

表2 血清学、细菌学检验及二者联合检验的诊断效能比较 例（%）

2.3 诊断结果一致性分析

对血清学、细菌学检验及二者联合和最终确诊结果一致性进行检验，结果显示，Kappa分别为0.559、0.549、0.908，提示两种检验方法和最终确诊结果一致性中等，而二者联合检验和最终确诊结果一致性较好。

3 讨论

布氏菌病是一种具有较大危害性的传染病，一般是由动物先感染布鲁氏菌，然后人和其直接接触，或食用此动物的乳制品及肉制品而患此病。人类受到布鲁氏菌感染患病后如未能及时治疗，可引起脑膜炎、脊髓炎等并发症，严重时可致残，故及早发现此病并做出明确诊断，有利于患者在最佳治疗时间内得到治疗，有效根治疾病，亦可避免布氏菌病区域性传播[5]。

目前，临床检验布鲁氏菌感染的方法多种多样，其中操作简便、费用相对低廉的方法有血清学、细菌学检验等两种，前者主要是通过肉眼观察布鲁氏杆菌抗体在血清中是否存在凝集情况，凝集情况产生的原因是布鲁氏杆菌被人体免疫细胞吞噬后发生聚集。随着人体内此菌数量增多，人体免疫系统将不能有效阻止其繁殖，出现逃逸现象，从而导致病症发生[6-7]。有关研究表明，血清学检验对布鲁氏菌感染的诊断准确度较高，但亦会出现漏诊的可能[8]。因为，此病由急性期向慢性期或发作间期转变后，人体内携带有病菌的免疫细胞会由血液向骨髓、内脏转移，血清内含有的病菌明显变少，患者发热症状改善。故在慢性期或发作间期对患者实施血清学检验，漏诊的可能性较高。而当病菌由骨髓、内脏转移至血液中时，发热症状再次出现，才可于血清中检测到此病菌[9]。细菌学检验是通过留取血标本，接种于培养基上进行24 h培养，对分离获得的菌株进行鉴别，以了解有无感染布鲁氏菌。有关研究表明，对布鲁氏菌感染进行诊断时，不能将血清学检验作为唯一诊断依据，当其检验结果呈阴性时，可进一步做细菌学检验，以减少漏误诊情况的发生，提高诊断准确度[10]。本研究对上述两种检验方法及二者联合检验对布鲁氏菌感染的阳性检出率及诊断效能进行统计分析，发现血清学检验阳性74例，细菌学检验阳性为71例，二者联合检验的阳性为73例。以最终确诊结果为依据，得知联合检验的诊断灵敏度、特异度、准确度与各自单一检验相比均明显较高。此外，Kappa检验显示，二者联合检验和最终确诊结果一致性较好（Kappa=0.908），而各自单一检验和最终确诊结果一致性中等（Kappa=0.559、0.549）。可见血清学联合细菌学检验可提高对布鲁氏菌感染诊断的效能。

为确保检验质量，使检验结果真实、可靠，需在检验过程中注意以下事项：受检标本采集完成后应做好标记，避免出现标本和患者信息不匹配等情况；采集的标本需及时送检，不能及时送检时应按要求进行保存，同时注意避免标本受到污染而使检验结果出现偏差；对标本进行检验时需严格遵照相应规程，避免因人为操作失误导致检验结果错误。必要时可由2名工作人员分别进行检验操作，当两者检验结果截然不同时需再次检验，以免出现误判情况[11]。

综上所述，血清学联合细菌学检验可大大提高诊断布鲁氏菌感染的效能，从而为此病的诊疗提供重要依据。