宫颈癌患者化疗前后宫颈上皮组织Bcl-2和MACCI蛋白表达及ROC预测效能

樊 毓， 邓 罕， 唐 斌

(贵州医科大学附属医院病理科， 贵州 贵阳 550000)

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，经流行病学调查[1]，该病占据我国女性生殖系统恶性肿瘤的首位。由于肿瘤细胞侵袭力强、恶性程度高，极易出现淋巴结转移，对预后具有较大影响，对此需尽早治疗[2]。随着临床研究和化疗基础的发展，化疗越来越受到学者重视，术前进行化疗干预能够减少宫颈癌不良预后因素，缩小肿瘤，提高手术疗效[3]。然而，随着对肿瘤机制深入研究，学者发现肿瘤发生不仅涉及肿瘤细胞失控性增殖，还与细胞凋亡调节失衡有关，例如细胞死亡和细胞分裂均可决定癌生长速度，故需注重细胞基因检测[4]。B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)是一种细胞凋亡的抑制基因，参与了细胞凋亡调控过程，在肿瘤组织中存在异常表达[5]；结肠癌转移相关基因1蛋白(MACCI)具有调控HGF/c-Met信号通路功能，作为一种关键性信号传导通路调节因子，在肿瘤侵袭、增殖中具有一定作用[6]。然而，目前临床关于MACCI、Bcl-2与宫颈癌关系研究报道较少，尚未得出定论，基于此，本文进一步分析MACCI、Bcl-2在预测宫颈癌发生、预后中效能。具体如下文。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析的121例宫颈癌患者(宫颈癌组)、89例宫颈上皮内瘤变(宫颈瘤变组)均在2018年3月至2020年11月期间收集。宫颈癌组患者均为已婚女性，平均年龄(48.39±5.41)岁；中高分化83例，低分化38例；腺癌42例，鳞癌79例；FIGO分期：ⅠBI期39例、ⅠB2期44例、ⅡA期27例、ⅡB期11例。宫颈瘤变组均为已婚女性，平均年龄(48.58±5.88)岁。纳入标准：①宫颈癌组患者符合《2012宫颈癌临床实践指南》[7]中关于宫颈癌诊断标准，且出现阴道异味(腥臭味)、阴道排血性液或白色液、阴道不规则出血；②宫颈瘤变组符合《ASCCP 2019版指南》[8]中关于宫颈上皮内瘤变诊断标准，且出现阴道分泌物增多、伴或不伴有异味、性接触后出血；③均需接受MACCI、Bcl-2检测；③临床资料齐全。排除标准：①合并癫痫等神经系统疾病者；②合并其他恶性肿瘤者；③合并多脏器功能衰竭或障碍者。

1.2治疗方法:根据宫颈癌组患者全身状况、病情制定个体化治疗方案。本次均采用顺铂联合伊立替康化疗方案。第1d静脉滴注60mg/m2伊立替康、60mg/m2顺铂，持续滴注60min，7d为一疗程，每疗程第1d重复注射，连续治疗2-4个疗程。采用实体瘤疗效评价标准，完全缓解(CR)：病灶消失；部分缓解(PR)：病灶长径缩小≥30%；疾病稳定(SD)：病灶长径缩小但未达PR；疾病进展(PD)：出现新病灶或病灶长径增加≥20%。化疗无效=SD+PD；化疗有效=CR+PR。

1.3检测方法:主要试剂：Bcl-2为鼠抗人单克隆抗体，MACCI为兔抗人多克隆抗体，均由英国Abcam公司提供；DAB显色剂由上海宝曼生物公司提供；由北京中山生物公司提供SP免疫组化试剂盒。实验方法：使用免疫组化SP法检测MACCI、Bcl-2表达。将宫颈组织连续切片，保持3μm厚度，放入枸橼酸盐缓冲液(0.01M)内高压2min，冷却15min后，冲洗三次，使用PBS，再滴入生物素-亲和素(5%)系统室温下静放10min。再加入兔抗MACCI或鼠抗Bcl-2多克隆抗体一抗，在低温(4℃)环境下过夜孵育，冲洗三次，加入生物素化的山羊抗兔IgG，放置在常温环境下25min，再冲洗三遍，滴加辣根酶标记链霉卵白素(1∶100)，冲洗四次，每次5min，再加入DAB显色剂，放于室温状态下。最后用苏木素复染2min、脱水、封片、观察。结果判定：MACCI、Bcl-2表达采用北京航空学院图像分析管理软件对切片进行分析，在×100的低倍镜下摄取bmp图像，每张切片锁定5个视野，得出光密度值和每张切片的平均值。细胞凋亡结果分析：每张切片计算5个高倍视野下细胞总数和凋亡细胞数，计算凋亡指数。

2 结 果

2.1对比两组MACCI、Bcl-2表达:宫颈癌患者的MACCI、Bcl-2表达含量高于宫颈瘤变组(P<0.05)。见表1。

表1 对比两组MACCI Bcl-2表达情况

2.2分析各项指标诊断宫颈癌价值：ROC曲线分析显示，MACCI、Bcl-2表达分别诊断宫颈癌的AUC值为0.924、0.968。具体见表2。ROC曲线见图1。

图1 MACCI、Bcl-2诊断宫颈癌的ROC曲线

表2 分析MACCI Bcl-2诊断价值

2.3比较不同疗效的MACCI、Bcl-2表达：宫颈癌患者化疗后MACCI、Bcl-2表达含量低于化疗前(P<0.05)。见表3。

表3 对比化疗前后MACCI Bcl-2表达

2.4分析相关性：Spearman法分析，疗效与MACCI、Bcl-2呈正相关性(P<0.05)。见表4。

表4 分析疗效与MACCI Bcl-2相关性

2.5分析各项指标预测疗效价值：ROC曲线分析显示，MACCI、Bcl-2预测疗效的AUC值分别为0.765、0.937。具体见表5。ROC预测曲线见图2。

表5 分析MACCI Bcl-2预测宫颈癌疗效价值

图2 MACCI、Bcl-2预测疗效的ROC曲线

3 讨 论

宫颈癌是因人乳头瘤病毒感染引起的病变，据统计，全球约有40万新发病例，位居妇科恶性肿瘤之首[9]。宫颈癌早期可出现下身肿痛、阴道排液、接触性出血，对日常生活造成一定影响，因此需尽早诊疗。化疗作为癌症术前常用方案，能够通过缩小肿块，为手术成功打下良好基础，但随着相关研究增多，学者发现即便接受化疗、手术干预后，宫颈癌复发率仍较高，因此寻找可靠的监测指标已迫在眉睫。有研究显示[10]，细胞凋亡在肿瘤发生、发展、转归中均具有一定价值，其中MACCI、Bcl-2均参与了肿瘤抗凋亡过程。

Bcl-2属于抗凋亡基因，广泛存在于卵巢、宫颈、膀胱、乳腺、胃等组织内，能够通过多种途径抑制细胞凋亡，在肿瘤发生、发展中具有紧密关系，是近年来备受关注的基因之一。目前认为Bcl-2抗凋亡的机制在于：①维持细胞钙稳态；②防止激活凋亡蛋白酶；③抑制Bak、Bax细胞毒作用；④抗氧化。Bax基因是Bcl-2的拮抗因子，与Bcl-2呈相反作用，当Bax蛋白占据优势时，代表癌细胞趋于凋亡，反之当Bcl-2蛋白占据优势时，代表癌细胞区域存活[11]。本次结果显示，宫颈癌患者的Bcl-2表达含量高于宫颈瘤变组，说明Bcl-2表达含量与宫颈癌发生存在一定关联，尤其是受到癌变因子活性影响，导致Bcl-2表达升高。而化疗后患者Bcl-2表达有所降低，是因化疗药物能够通过遏制肿瘤发展势头，促使凋亡细胞增多，抑制癌细胞活跃，从而降低Bcl-2表达，减少癌症转移和复发，提高治愈率，反向说明Bcl-2与宫颈癌患者预后存在一定关联[12]。

MACCI基因定位于染色体7p21.1，是一种结肠癌转移相关基因，主要生理功能是参与信号通路传导调节，可调控肿瘤生长及转移，促进肿瘤侵袭和增殖。有研究表明[13]，当MACCI与c-Met启动子相结合后，可激活促分裂原活化蛋白激酶和HGF/c-Met传导通路，驱动MACCI正反馈循环，一旦传导信号被激活，可导致c-Met基因发生磷酸化，引发各种生物学反应，尤其在肿瘤细胞增殖、侵袭以及上皮间质转化、血管生成中均具有一定作用。本次结果显示，宫颈癌相比于宫颈上皮内瘤变患者MACCI蛋白表达更高，提示MACCI蛋白表达异常与肿瘤发生存在一定关系，且较良性肿瘤患者更高，说明在癌细胞早期发生中具有重要作用。同时宫颈癌患者化疗后MACCI蛋白表达有所降低，是因通过化疗药能够抑制肿瘤增殖及转移，从而降低MACCI蛋白表达。为了进一步佐证MACCI、Bcl-2与宫颈癌发生、发展的关系，本次建立了ROC曲线模型分析，结果显示，MACCI、Bcl-2分别诊断宫颈癌的AUC值为0.924、0.968，预测宫颈癌疗效的AUC值为0.765、0.937，说明MACCI、Bcl-2在评估宫颈癌发生、发展、预后转归中均具有较高效能。然而，在分析指标相互影响关系时，通过Pearson模型分析，结果显示，MACCI与Bcl-2呈正相关性，说明两者存在相互影响关系，可起到一定协同作用，且在分析疗效与两者关系时，结果显示，疗效与MACCI与Bcl-2表达均呈正相关性，说明MACCI与Bcl-2共同参与了宫颈癌发生、发展。

综上所述，MACCI、Bcl-2在宫颈癌患者中，存在高表达，且与宫颈癌发生、转归存在一定关联，通过连续监测，能够对预后评估起到重要作用。但本研究也存在一定局限性，首先取材局限可能带来误差，其次化疗药选择、取量是否会影响MACCI、Bcl-2表达未深入探索，对此关于MACCI、Bcl-2预测效能还有待进一步探索。