新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷含量的测定

姜君君，王 莹，兰 卫,武嘉林

(1.乌鲁木齐市第四人民医院，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830002；3.新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 830017；4.新疆华世丹药业股份有限公司，新疆 乌鲁木齐 830011)

小枝玫瑰属国家药典收载品种[1],性味平，具有芳香开窍、安神止痛、软肠通便、滋补肠胃、改善消化、驱风消炎、润肤生辉等功效[2]。研究[3]发现`，新疆小枝玫瑰精油中香茅醇、香叶醇含量分别是法国玫瑰的5.6倍、124.9倍。小枝玫瑰花是小枝玫瑰的干燥花蕾，其制剂玫瑰花口服液、玫瑰花糖膏已作为单方制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)》[4]。金丝桃苷是小枝玫瑰花的主要活性成分，具有较高的生理活性。刘兆祥等[5]研究发现，金丝桃苷对糖尿病引起的心肌损伤具有改善作用；李国栋等[6]研究发现，金丝桃苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠具有心脏保护作用；刘驰等[7]研究发现，金丝桃苷具有治疗动脉粥样硬化的作用；王成等[8]研究发现，金丝桃苷对高血压大鼠具有降血压作用；汉京霞[9]研究了金丝桃苷靶向YY1复合体的抗肿瘤作用。目前尚未见新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷含量测定的报道。鉴于此，作者采用HPLC法测定新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷的含量，为小枝玫瑰花中主要活性成分含量的分析及质量控制提供帮助。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

小枝玫瑰花(批号20181216)，新疆鸿德堂永盛药业有限公司。经新疆医科大学盛萍教授鉴定为蔷薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb.)中紫红花重瓣玫瑰(Rosarugosaf.plenaByhouwer)的小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

金丝桃苷标准品(批号20203-84-5)，宝鸡辰光生物科技有限公司；乙腈(批号67-56-1)，色谱纯，南京化学试剂股份有限公司；磷酸(批号20150209)，天津致远化学试剂有限公司。

高效液相色谱仪(LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CBM-20A控制器，SPD-M20A检测器，CTO-20AC柱温箱，LC-solution色谱工作站)，日本岛津；Agilent 1200-DAD型高效液相色谱仪；KQ-500DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；AL204型电子分析天平，Mettler-Toledo。

1.2 标准溶液的制备

精密称取金丝桃苷标准品1.47 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.147 mg·mL-1的金丝桃苷标准溶液。

1.3 供试溶液的制备

精密称取新疆小枝玫瑰花药材1.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入10 mL甲醇，称重；100 Hz下超声提取40 min，放冷，用甲醇补足质量，摇匀；用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试溶液。

1.4 色谱条件

Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，柱温35 ℃，流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸(B)，梯度洗脱程序：0～10 min，15%A-85%B；10～50 min，18%A-82%B，流速1.0 mL·min-1，检测波长360 nm，进样量20 μL。

2 结果与讨论

2.1 HPLC图谱

按色谱条件测定金丝桃苷标准溶液、供试溶液的HPLC图谱，结果如图1所示。

图1 金丝桃苷标准溶液(a)、供试溶液(b)的HPLC图谱Fig.1 HPLC spectra of hyperoside standard solution(a) and test solution(b)

2.2 标准曲线

分别精密吸取金丝桃苷标准溶液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得浓度(mg·mL-1)分别为0.014 7、0.029 4、0.044 1、0.058 8、0.073 5的金丝桃苷溶液。按色谱条件进样测定，测得峰面积分别为20.2、43.4、65.2、83.1、104.7。以金丝桃苷浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线(图2)，拟合得线性回归方程：y=1419.7x+0.71，R2=0.9991。表明，金丝桃苷浓度在0.014 7～0.073 5 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图2 金丝桃苷的标准曲线Fig.2 Standard curve of hyperoside

2.3 精密度

精密吸取0.147 mg·mL-1金丝桃苷标准溶液，按色谱条件连续进样测定6次。测得峰面积分别为178.7、179.4、180.6、182.2、183.3、179.9，平均峰面积为180.68，RSD值为0.97%。表明仪器精密度良好。

2.4 重复性

精密称取新疆小枝玫瑰花药材6份，按1.3方法制备供试溶液，按色谱条件进样测定。测得峰面积分别为55.7、56.1、56.7、55.9、54.3、55.2，平均峰面积为55.65，RSD值为1.48%。表明该方法重复性良好。

2.5 稳定性

按1.3方法制备供试溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h按色谱条件进样测定。测得峰面积分别为55.7、55.3、56.9、56.2、54.8、53.6，平均峰面积为55.42，RSD值为2.07%。表明供试溶液在10 h内稳定性良好。

2.6 加标回收率

称取新疆小枝玫瑰花药材9份，每份1 g，分为3组，分别加入1.34 mL(低浓度组)、2.67 mL(中浓度组)、2.81 mL(高浓度组)金丝桃苷标准溶液，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，按1.3方法制备供试溶液，按色谱条件进样测定，结果见表1。

表1 加标回收率结果(n=9)

由表1可知，低浓度组的加标回收率为101.18%，RSD值为2.09%；中浓度组的加标回收率为101.61%，RSD值为1.13%；高浓度组的加标回收率为100.65%，RSD值为1.96%；金丝桃苷平均加标回收率为101.15%，RSD值为1.59%。

2.7 新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷的含量

按1.3方法制备供试溶液，按色谱条件进样测定3次。测得峰面积分别为55.7、58.6、55.4，平均峰面积为56.57，计算得到新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷含量为0.393 mg·g-1。

2.8 讨论

丁姗姗等[10]采用HPLC法同时测定了宣木瓜中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量，流动相为乙腈-0.6%磷酸，梯度洗脱；作者发现该色谱条件下新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷所对应位置未出峰。郑一敏等[11]采用HPLC法测定菟丝子中金丝桃苷、槲皮苷的含量，流动相为甲醇-0.2%磷酸(45∶55，体积比)，检测波长350 nm；作者发现该色谱条件下新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷出峰，但峰形不理想，对称因子<1，且分离度<1.5。冯春燕等[12]采用HPLC法测定罗布麻叶中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷的含量，流动相为乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脱；作者发现该色谱条件下新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷的出峰时间与金丝桃苷标准品的一致，分离度>1.5，理论塔板数>3000。因此，选用乙腈-0.2%磷酸为流动相。

3 结论

采用HPLC法测定新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷的含量。结果表明，金丝桃苷浓度在0.014 7～0.073 5 mg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好；平均加标回收率为101.15%，RSD值为1.59%；新疆小枝玫瑰花中金丝桃苷含量为0.393 mg·g-1。该方法准确可靠，可为小枝玫瑰的质量控制提供依据。