共轭亚油酸对贵妃鸡生产性能、蛋品质、血清和蛋黄生化指标以及在蛋黄中富集量的影响

常强强 郭 彦 孙天原 刘晓霞 李亚莉 张 蒙 杨 玉 王旭贞 郝松华 赵雅丽 杨子森 张俊珍*

(1.山西农业大学动物科学学院，太谷 030801；2.山西农康新拓科技发展有限公司，阳曲 030100；3.山西省畜牧兽医学校，太原 030024；4.山西省生态畜牧产业工作站，太原 030008)

贵妃鸡作为优质的肉蛋兼用型禽类，具有耐粗饲、抗病力强等特点，且其生产的蛋具有高蛋白质、低胆固醇等优点。共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)具有抗癌[1]、降胆固醇[2]、抗氧化[3]、改善肉品质[4]和改善生产性能[5]等功能。刘雪兰等[6]研究发现，CLA对海兰白蛋鸡生产性能无显著影响，饲粮中添加1% CLA能使蛋壳强度显著提高。李晓轩等[7]在固始鸡的研究中表明，饲粮中添加CLA能显著降低蛋黄总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量，且添加量为2%时还可以改善蛋黄色泽。孙晓军等[8]研究表明，饲粮中添加CLA可使蛋黄中丙二醛(MDA)含量显著降低。Chamruspollert等[9]研究发现，蛋黄中CLA的富集量与饲粮中CLA的添加量有关。刘雪兰等[10]在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA发现，蛋黄中CLA的富集量随着CLA添加量的增加而增加。郑洲等[11]研究发现，CLA对家禽生产性能无显著影响，但蛋黄中有CLA富集。王生辉[12]在海兰褐蛋鸡饲粮中添加CLA发现，CLA添加量为2%时，蛋黄中CLA的富集量达到最高，合理添加可以得到富含CLA的鸡蛋。目前，人们对CLA的报道主要集中在海兰褐、海兰白等蛋鸡中，关于CLA在贵妃鸡中的应用研究尚未报道。因此，本试验旨在研究饲粮中添加CLA对贵妃鸡生产性能、蛋品质、血清和蛋黄生化指标、抗氧化能力以及蛋黄中CLA富集量的影响，为CLA在贵妃鸡生产中的应用提供理论依据，以开发强化CLA的贵妃鸡鸡蛋。

1 材料与方法

1.1 试验动物和材料

本试验所用贵妃鸡由山西省养殖技术试验基地提供。CLA购买于青岛某生物有限公司，纯度为80.6%，其中2种主要异构体c9,t11-CLA和t10,c12-CLA含量分别为38.1%和39.4%。

1.2 试验设计和饲粮

试验选取360只63周龄、健康的贵妃鸡，随机分为5个组，每组6个重复，每个重复12只。对照组饲喂基础饲粮+4%大豆油；CLA组分别饲喂在对照组饲喂基础上添加1%、2%、3%和4% CLA的饲粮，并分别以相应的CLA添加量等量替换大豆油。试验预试期7 d，正试期42 d。基础饲粮参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)[13]配制，其组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.3 饲养管理

饲养试验在山西省太原市阳曲县山西省养殖技术试验基地进行，在良好的饲养管理条件下，采用3层阶梯式笼养，每个重复3个鸡笼，每笼4只鸡，重复之间相隔1个空鸡笼。试验每天07：00和15：00各喂料1次，人工光照16 h/d，每天记录产蛋数、蛋重、给料量和剩料量。

1.4 检测指标及方法

1.4.1 生产性能

以重复为单位，每天记录产蛋数、给料量和剩料量，计算平均蛋重、平均日采食量、产蛋率和料蛋比。计算公式如下：

平均蛋重=每重复总蛋重/每重复鸡蛋数；产蛋率=100×(总产蛋个数/总蛋鸡数)；平均日采食量=(每天给料量-每天剩料量)/试验鸡数；料蛋比=日耗料量/日产蛋总重。

1.4.2 蛋品质

收集试验第42天的鸡蛋，每个重复选取3枚蛋，用多功能蛋品质分析测定仪(EA-01，以色列ORKA公司)测定蛋重、蛋白高度、蛋黄颜色和哈氏单位；用蛋壳强度仪(EFR-01，以色列ORKA公司)测定蛋壳强度；将蛋壳膜剥离后称重，记录蛋壳重量；用数显千分尺(青岛澳海源国际贸易有限公司)分别测量剥离膜的蛋壳锐端、钝端和中间的厚度，计算三者平均值，记录蛋壳厚度。

1.4.3 血清和蛋黄生化指标

在试验结束时，每个重复随机选取3只鸡，由翅下静脉采血5 mL，静置后，以3 000 r/min、离心10 min，取上清液置于-80 ℃冰箱保存备用[14]，用于测定血清生化指标。蛋黄使用冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)冻干成蛋黄冻干粉，准确称取蛋黄冻干粉，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例，加入9倍体积的匀浆介质(无水乙醇)，冰水浴条件下机械匀浆，2 500 r/min、离心10 min，取上清液用于测定蛋黄生化指标。用酶标仪(ELx808，美国伯腾仪器有限公司)测定总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量，试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，并严格按照试剂盒说明书操作。

1.4.4 血清和蛋黄抗氧化指标

取血清和蛋黄待测液测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量，试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，并严格按照试剂盒说明书操作。

1.4.5 蛋黄CLA富集量

首先进行脂肪酸的提取：称取0.1～0.2 g蛋黄冻干粉，加入25 mL带盖玻璃试管中。将8 mL氯仿-甲醇溶液和1 mL浓度为2 μg/mL内标溶液(C17∶0)加入到玻璃试管振荡后静置1～2 h后，用不含脂肪的滤纸过滤。用氯仿-甲醇溶液冲洗2次，转移到20 mL带盖玻璃试管中。加入4 mL 0.04% MgCl2溶液混匀静置，直至分层。弃上清液，加入氯仿-甲醇-0.04% MgCl2溶液混匀，分层后，弃上清液并用氮气吹干。再经甲酯化后用气相色谱仪(GC-8960，山东瑞津仪器有限公司)测定蛋黄中CLA含量。蛋黄中CLA含量委托青岛拜恩检测技术服务有限公司测定。

1.5 数据统计分析

采用Excel 2019记录试验数据，使用SPSS 22.0进行单因素方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较。以P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。试验数据均以“平均值(mean)±标准差(SD)”表示。

2 结 果

2.1 CLA对贵妃鸡生产性能的影响

由表2可知，与对照组相比，1% CLA组和4% CLA组贵妃鸡平均日采食量极显著降低(P<0.01)，4% CLA组产蛋率显著降低(P<0.05)，1% CLA组、2% CLA组和3% CLA组料蛋比显著提高(P<0.05)，饲粮添加CLA对平均蛋重无显著影响(P>0.05)。

表2 CLA对贵妃鸡生产性能的影响

2.2 CLA对贵妃鸡蛋品质的影响

由表3可知，与对照组相比，饲粮添加CLA有提高贵妃鸡蛋壳强度的趋势(P=0.060)，4% CLA组蛋黄重量极显著降低(P<0.01)，4%CLA组蛋黄颜色显著低于1% CLA组(P<0.05)；饲粮添加CLA对蛋壳重量、蛋重、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位无显著影响(P>0.05)。

表3 CLA对贵妃鸡蛋品质的影响

2.3 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄生化指标的影响

由表4可知，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡血清TG含量极显著降低(P<0.01)；各CLA组血清LDL-C含量极显著降低(P<0.01)，且2% CLA组和4% CLA组最低；2% CLA组血清HDL-C含量极显著提高(P<0.01)；饲粮添加CLA对血清T-CHO含量无显著影响(P>0.05)。

表4 CLA对贵妃鸡血清生化指标的影响

由表5可知，与对照组相比，各CLA组贵妃鸡蛋黄T-CHO含量极显著降低(P<0.01)，且4% CLA组最低；饲粮添加CLA对蛋黄TG含量无显著影响(P>0.05)。

表5 CLA对贵妃鸡蛋黄生化指标的影响

2.4 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄抗氧化指标的影响

由表6可知，与对照组相比，3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡血清T-AOC极显著降低(P<0.01)，且3% CLA组最低；1% CLA组血清SOD活性极显著提高(P<0.01)，3% CLA组和4% CLA组血清SOD活性极显著降低(P<0.01)；4% CLA组血清GSH-Px活性极显著提高(P<0.01)；各CLA组血清MDA含量极显著降低(P<0.01)；2% CLA组和3% CLA组血清CAT活性极显著提高(P<0.01)，且2% CLA组最高。

表6 CLA对贵妃鸡血清抗氧化指标的影响

由表7可知，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡蛋黄T-AOC以及SOD和CAT活性极显著提高(P<0.01)，且4% CLA组最高；各CLA组蛋黄GSH-Px活性极显著升高(P<0.01)，且3% CLA组最高；各CLA组蛋黄MDA含量极显著降低(P<0.01)，且2% CLA组最低。

表7 CLA对贵妃鸡蛋黄抗氧化指标的影响

2.5 CLA在贵妃鸡蛋黄中的富集量

由表8可知，与对照组相比，2% CLA组贵妃鸡蛋黄中CLA的富集量极显著升高(P<0.01)，4% CLA组蛋黄中CLA的富集量极显著降低(P<0.01)。

表8 CLA在贵妃鸡蛋黄中的富集量

3 讨 论

3.1 CLA对贵妃鸡生产性能的影响

CLA作为一种营养素由天然植物提取而来，具有抗癌、促进脂肪氧化分解以及降血脂等作用。Shang等[15]在褐矮母鸡饲粮中添加CLA发现，饲粮添加1% CLA可以提高平均日采食量和产蛋率。Chamruspollert等[9]研究发现，饲粮中添加5% CLA显著降低62周龄白莱航蛋鸡平均日采食量。本试验结果表明，与对照组相比，1% CLA组和4% CLA组贵妃鸡平均日采食量极显著降低，4% CLA组产蛋率显著降低，这与Chamruspollert等[9]研究62周龄白莱航蛋鸡的结果基本一致。各组饲粮能量和蛋白质水平相同，1% CLA组和4% CLA组平均日采食量极显著降低，可能是因为饲粮中CLA的添加量影响了饲粮适口性；而4% CLA组产蛋率显著降低可能与4% CLA组平均日采食量降低有关。本试验中，1% CLA组、2% CLA组和3% CLA组料蛋比显著提高，且2% CLA组最高，这与胡艳等[16]的结果一致；各组平均蛋重无显著差异，但随着饲粮CLA添加量的增加有下降趋势，这与刘雪兰等[6]的研究结果相同，这可能与周龄、品种和采食量降低有关。

3.2 CLA对贵妃鸡蛋品质的影响

刘雪兰等[6]研究发现，在海兰白蛋鸡饲粮中添加1% CLA能显著提高蛋壳厚度。Shang等[15]在褐矮母鸡饲粮中添加CLA发现，蛋黄和蛋壳重随着饲粮CLA添加量的增加而线性下降。王生辉[12]研究表明，在海兰褐蛋鸡饲粮中添加2%和4% CLA组蛋壳强度高于对照组。本试验结果表明，与对照组相比，4% CLA组蛋黄重量极显著降低，这与前人研究结果一致；2% CLA组和4% CLA组蛋壳强度有提高趋势，这与王生辉[12]研究结果一致；3% CLA组和4% CLA组蛋壳厚度有降低趋势，这可能与CLA添加量有关[16]，或者与4% CLA组贵妃鸡采食量降低，导致从饲粮中获取钙源减少有关。

3.3 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄生化指标的影响

产蛋期蛋鸡的脂质代谢更加活跃，蛋鸡脂质代谢与机体健康和产蛋性能密切相关。Nicolosi等[17]在仓鼠血清脂代谢研究中发现，CLA可以显著降低仓鼠血清T-CHO和TG含量。Yamasaki等[18]研究发现，CLA对小鼠肝脏和腹脂中TG含量有显著降低作用。李晓轩等[7]研究表明，随着固始鸡饲粮中CLA添加量的增加，血清T-CHO和TG含量显著降低。本试验结果表明，与对照组相比，各CLA组贵妃鸡血清T-CHO含量无显著差异；2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组血清TG含量均极显著降低，这与李晓轩等[7]的研究结果一致；2% CLA组血清HDL-C含量极显著提高，各CLA组血清LDL-C含量极显著降低，这与齐晓龙[3]的研究结果相同；血清T-CHO含量变化结果与前人研究结果不同，可能与CLA添加量以及试验动物品种和日龄有关。

王生辉[12]研究发现，2%和4% CLA能显著降低海兰褐蛋黄T-CHO含量。Yin等[19]研究表明，2.5% CLA对矮小型褐壳蛋鸡蛋黄T-CHO含量呈显著降低趋势。本试验结果显示，与对照组相比，各CLA组蛋黄T-CHO含量极显著降低，蛋黄TG含量无显著差异，这与前人研究结果一致。饲粮中添加CLA降低了蛋黄T-CHO含量可能是CLA抑制了卵母细胞卵黄生成受体(OVA)的基因表达，减少了极低密度脂蛋白(VLDL)的沉积量，降低了OVA的生成，进而降低蛋黄中胆固醇含量[20]。

3.4 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄抗氧化指标的影响

产蛋鸡的脂质代谢异常旺盛会引起脂质过氧化，对机体造成破坏，进而引发各种疾病。齐晓龙[3]研究发现，饲粮中添加CLA显著提高海兰褐蛋鸡血清SOD和GSH-Px活性，显著降低血清MDA含量。吴国玲[21]研究表明，在褐壳蛋鸡饲粮中添加2% CLA显著提高血清T-AOC和GSH-Px活性；随着CLA添加量的增加，血清SOD活性呈先上升后下降趋势；饲粮添加2% CLA显著降低血清MDA含量。本试验结果表明，随着CLA添加量的增加，贵妃鸡血清T-AOC和SOD活性呈先上升后下降趋势，在添加量为1%时最高；与对照组相比，4% CLA组血清GSH-Px活性极显著升高，血清MDA含量极显著降低；2% CLA组和3% CLA组血清CAT活性极显著升高。上述结果与前人研究结果基本一致，表明CLA能够提高贵妃鸡机体抗氧化能力，但血清中抗氧化酶活性并不是随着添加量的增加而无限升高，这可能与机体免疫机能有关[21]。

孙晓军等[8]研究表明，在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA(0.5%～2.0%)可使蛋黄中SOD活性线性提高；2.0% CLA显著降低蛋黄MDA含量，显著提高蛋黄GSH-Px活性。本试验结果表明，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡蛋黄T-AOC以及SOD和CAT活性极显著提高；各CLA组蛋黄GSH-Px活性极显著升高，蛋黄MDA含量极显著降低。这与前人研究结果具有相似性，表明CLA可增强机体清除自由基的能力，而是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活性的量效关系、作用机理和有效活性成分等还有待于进一步研究[8]。

3.5 CLA在贵妃鸡蛋黄中的富集量

CLA既是人和动物不可缺少的脂肪酸之一，又是人和动物无法合成的一种物质，必须从食物中摄取，这使得有关增加CLA在食物中含量的研究日益引起人们的关注。Chamruspollert等[9]研究发现，蛋黄中CLA的富集量随着基础饲粮中CLA添加量的增加而增加，当饲粮中添加5% CLA时，蛋黄中可富集340 mg/kg左右CLA。刘雪兰等[10]在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA表明，饲粮CLA添加量在1%～6%时，蛋黄中CLA的富集量在10 d左右达到最高，可富集692 mg/kg CLA。尚秀国[22]研究发现，矮小型褐壳蛋鸡饲粮中添加5% CLA，蛋黄中可富集630 mg/kg左右CLA。Schäfer等[24]研究发现，饲粮中添加2% CLA，蛋黄中可富集400 mg/kg左右CLA。大量研究表明，饲粮中CLA添加量越高，蛋黄中CLA的富集量就越高，但不会持续增高。本试验中，随着饲粮CLA添加量的增加，蛋黄中CLA的富集量呈先升高后降低趋势，在添加量为2%时达到最高，在蛋黄中的富集量在1 439 mg/kg左右，这与前人研究海兰白和矮小型褐壳蛋鸡蛋黄中CLA的富集量相差甚大。由此可推测，贵妃鸡可能更易富集CLA，添加量过高时可能会出现富集量降低现象。

4 结 论

① 饲粮中CLA添加量过高(3%和4%)时会影响贵妃鸡的生产性能，饲粮添加2% CLA可提高蛋壳强度，降低血清和蛋黄中胆固醇含量，提高抗氧化能力，且在蛋黄中CLA的富集量最高。

② 在不影响生产性能的前提下，饲粮中添加2% CLA能更好地在蛋黄中富集CLA，以生产CLA强化鸡蛋。