猕猴桃组织培养繁殖苗木

刘永利

（朝阳县台子镇林业站，辽宁 朝阳 122625）

猕猴桃的繁殖方式多种多样，有实生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖等。这3种方式比较常见且容易操作，需要的硬件条件也不高。组织培养虽然相对要复杂一些，上手难度较大，但是如果遇到不能量产的稀有品种，采用此种方法却能够取得巨大的效果，所以了解其过程以及繁殖方法十分必要。

表1 常用消毒灭菌剂及效果比较

从理论上讲，植物的每一个细胞都具有成长为一个完整植株的功能。因此，植物组织培养是一种十分重要的繁殖技术。

猕猴桃组织也同其他植物组织一样，具有无限增殖和产生不定芽及不定根的能力，在适宜的培养条件下，用一部分组织可以培养出许多植株，并能保持原有植物的种性，特别是对于数量稀少的优良品种和砧木，采用组织培养来进行工厂化育苗具有重要意义。

1 材料及材料消毒

1.1 材料

组织培养的材料可以选用猕猴桃的茎段、茎尖、腋芽、叶片、叶梗、下胚轴、胚乳、幼胚、原生质体等。在国外也有用根、果实组织（幼果果皮附近的组织）作接种材料的。常用的组织培养材料为猕猴桃茎段、茎尖和腋芽。

1.2 灭菌消毒

因各个器官组织的特性不同，需要无菌操作所用消毒药品、浓度，具体操作方法、处理时间等也有所差异。常用消毒灭菌剂有多种，效果不尽相同，在实践中应根据材料摸索试验，采用既能达到消毒灭菌目的，又不损伤材料的药剂。

2 基本培养基

基本培养基为MS培养基，但培养材料不同，其组分也有所变化。蔗糖和琼脂的用量可根据不同需要进行调整，培养基的酸碱度调至pH5.8。配好培养基，分装于玻璃容器内，在120℃高压蒸气下灭菌30分钟后备用。

图1 继代培养切茎

3 外植体接种与培养

外植体选取健壮的当年生嫩枝上的茎段、茎尖或腋芽。将外植体用自来水冲洗2小时，用75%乙醇漂30秒钟，用0.1%氯化汞溶液灭菌5～8分钟，倒净灭菌液，用无菌水冲洗3～4次。如果是茎段接种，则用消毒解剖刀刮去表皮，露出绿色皮层，再纵劈成2～4片，并剪成0.5～1.0厘米长的小段，小段不能带有节部，接种在试管中的培养基上，每管2～4小段（试管为30毫米×160毫米）。

表2 MS培养基的基本组分 毫克/升

如果是茎尖或腋芽培养，每个试管的培养基上接种一个芽。茎尖应剥去毛被及叶片，留下黄绿色带有1～2个叶原基的小叶片作培养材料。

上述外植体接种的基本培养基为MS，蔗糖浓度2%，pH5.8，添加玉米素0.1～30毫克/升、6-BA（6-苄基腺嘌呤）0.1～5毫克/升、IBA（吲哚丁酸）0.1～5毫克/升和NAA（萘乙酸）0.1～5毫克/升。接种后将试管放在培养室的培养架上，培养温度25±1℃，光强度1000勒克斯，每日照光12小时。

4 继代培养

外植体培养一周后会产生愈伤组织，一个月可见到分化出来的小植株。待茎长到1～3厘米，即可进行继代培养。采用切断法，将其剪成约1厘米长茎段，接种到新的培养基中。以后每隔约30天进行一次继代培养，每次的茎段增殖量为3～4倍。反复进行，直到所需繁殖数量。根据成都生物所的试验，待试管苗伸长到4～5厘米时进行剪切，每次切成4段，每隔60天切一次，一年可切6次，即1个芽的繁殖系数为4的6次方，即4096株。

5 诱导生根

试管内继代培养的小植株长到2厘米左右时，从基部切下，用吲哚丁酸（IBA）20～30毫克/升液浸泡2小时，再转接在生根培养基上诱导生根。生根培养基的成分为MS培养基的大量元素减半，包括激素和蔗糖也要减半，其他成分不变。转接生根培养时，要防止叶片接触培养基，以利生根。经培养10天左右，在基部切口即可产生不定根，20天左右成为真根，变成完整幼苗。待植株长到3～5厘米，则可进行锻炼、移栽。

6 锻炼与移栽

组培苗是在严格的人工操控条件下长成的，对自然生态环境条件下能否适应，还需要一个过渡阶段，这个过渡阶段就是锻炼。方法是，将试管苗转移到较大的容器中培养，使小苗生长健壮；或将有苗的试管移到自然光照下2～3天，打开试管口2～3天，使试管苗得到锻炼，然后移栽。

试管苗移栽时先用30℃左右温水，洗净苗上的琼脂等培养基，再移入温室栽植，不要直接移入露地栽植，因成活率很低。温室保持20～25℃的温度，95%的空气相对湿度，土壤为腐殖土或人工配制的营养土。温室中生长80天左右，叶可长到8片以上，株高6厘米以上，新根数量500条以上，长17厘米以上。然后再移栽到露地苗圃，成活率极高。

7 结语

猕猴桃的实生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖与组织培养繁殖等4种繁殖方法，是目前中国和其他国家普遍采用的繁殖方法。除此之外，还有其他繁殖方法，如利用枝蔓进行压条繁殖，包括地面压条和空中压条；利用根际萌蘖进行分株繁殖。这两种繁殖技术因为繁殖率低，不便操作，因此不常采用。