仔猪流行性腹泻病毒、大肠杆菌及沙门氏菌混合感染病例的诊断

李冬光， 石艳华， 邓永进， 周思旋， 赵春萍， 朱丽莉*

(1. 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所，贵州 贵阳 550005； 2. 贵州省册亨县工业和科学技术局保障中心，贵州 册亨 552200；3. 盘州市科技事业发展中心，贵州 盘州 553500)

2021年3月28日，盘州市某猪场的3～7日龄哺乳仔猪发生呕吐、水样腹泻，严重者死亡。为确认病因，进行临床症状和剖检观察，并采集2头腹泻仔猪的病料进行实验室病原检测，现将诊断情况报道如下，供参考。

1 发病情况

该场存栏猪1 164头，猪群在每年春、秋季已接种口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病等常规疫苗。本次发病主要为3～7日龄哺乳仔猪，发病率50%，病死率55%。曾使用穿心莲、痢菌净、庆大霉素等药物治疗，但效果不佳。

2 临床症状

病猪临床表现为呕吐、水样腹泻、精神不振、消瘦、被毛粗乱等症状，粪便呈灰白色或灰绿色、恶臭，中后期严重脱水，眼窝下陷。

3 病理剖检

剖检2头典型病猪可见：腹股沟淋巴结充血严重并呈蓝紫色，肝脏和肾脏有针尖状出血点，胃内有未消化的凝乳块，肠道充气，肠壁变薄，肠系膜淋巴结充血。其他器官未见明显病变。

4 实验室检查

4.1 相关病毒核酸检测无菌条件下采集2头病猪(分别编号Ⅰ、Ⅱ)的腹股沟淋巴结、粪便各2份(共计8份)，加入适量无菌生理盐水研磨至匀浆，反复冻融3次，离心取上清液。采用宝生物RNAiso Plus试剂盒提取病料总RNA，采用PrimeScriptTMRT reagent Kit进行反转录，采用世纪元亨柱式DNA核酸提取试剂盒提取病料总DNA。按各病毒核酸PCR检测试剂盒说明方法分别检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、伪狂犬病病毒，2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后凝胶成像系统观察。结果：2份检测病猪粪样中可见猪流行性腹泻病毒目的扩增条带(见图1)，表明病猪存在猪流行性腹泻病毒感染。猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、伪狂犬病病毒均无目的扩增条带，表明无此类病毒感染(见图2、图3)。

M：DL 1 000 DNA Marker； 1：猪流行性腹泻病毒疫苗CV777株阳性对照； 2：猪流行性腹泻病毒疫苗AJ1102-R株阳性对照； 3、4：Ⅰ、Ⅱ号病猪粪样； 5、6：Ⅰ、Ⅱ号病猪腹股沟淋巴结； 7：阴性对照图1 猪流行性腹泻病毒RT-PCR扩增结果

M：DL 1 000 DNA Marker； 1～7：猪传染性胃肠炎病毒检测(1：阴性对照； 2、3：Ⅰ、Ⅱ 号病猪腹股沟淋巴结； 4、5：Ⅰ、Ⅱ号病猪粪样； 6：猪传染性胃肠炎病毒疫苗WH-1R株阳性对照； 7：猪传染性胃肠炎病毒疫苗SD/L株阳性对照)； 8～13：猪轮状病毒检测(8：阴性对照； 9、10：Ⅰ、Ⅱ号病猪腹股沟淋巴结； 11、12：Ⅰ、Ⅱ号病猪粪样； 13：阳性对照)图2 猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒RT-PCR扩增结果

M：DL 1 000 DNA Marker； 1：阴性对照； 2、3：Ⅰ、Ⅱ号病猪腹股沟淋巴结； 4、5：猪伪狂犬病病毒疫苗Bartha-K61株阳性对照图3 猪伪狂犬病病毒PCR扩增结果

4.2 细菌分离培养鉴定无菌条件下取2头病猪肛门内粪便样品各1份，接种于沙门氏菌显色培养基(HB7007-1，青岛海博生物)，36 ℃培养22～24 h，观察培养基上菌落颜色(沙门氏菌显紫色，大肠杆菌及菌群显蓝色，其他细菌显黄色或无色)。结果：2份粪便病料均检测出大肠杆菌，其中1头猪粪便检测出沙门氏菌(见图4)。挑取典型菌落分别进行革兰氏染色镜检，可见革兰氏阴性短小杆菌，符合大肠杆菌和沙门氏菌特征(见图5)。

Ⅰ号病猪粪样 Ⅱ号病猪粪样图4 培养菌落

大肠杆菌 沙门氏菌图5 分离菌革兰氏染色镜检(×100 )

5 诊断

根据发病情况、临床症状、病理变化及实验室病原检测，确诊病例存在猪流行性腹泻病毒、大肠杆菌及沙门氏菌混合感染。

6 讨论

6.1猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的1种急性、接触性肠道传染病，各日龄阶段的猪均易感染，且日龄越小，症状越重，死亡率越高[1，2]。哺乳仔猪临床症状最为明显，出现呕吐、腹泻、食欲下降和脱水，并伴有高死亡率(80%～100%)。该病一年四季均可发生，病猪和带毒猪是主要传染源，在环境密闭、湿度和温差大、卫生条件差、养殖密度大的猪舍更易传播。近年来，该病的流行区域和流行强度有不断扩大和增强的趋势，造成哺乳仔猪感染，死亡率居高不下[3，4]。大肠杆菌病是猪常见的传染病之一，可引起仔猪黄痢、白痢和水肿病等[5]。沙门氏菌是最常见且分布最广泛的食源性病原菌之一，也可引起仔猪下痢。大肠杆菌和沙门氏菌可感染任何品种、日龄的猪，对仔猪的危害尤为严重，日龄越低，发病率和病死率越高[6]。

6.2沙门氏菌和大肠杆菌感染可以选择头孢类、磺胺类或氟苯尼考等敏感药物治疗(以药敏试验结果为依据)，采取多途径、联合、交叉等合理用药方案。目前尚无治疗猪流行性腹泻的特效药，一旦发生需尽快隔离病猪，对病猪进行补液防脱水，饮水中添加电解多维和黄芪多糖，并应用上述抗菌药物避免继发感染。同时通过加强科学饲养管理、控制公共环境卫生等综合配套措施，加强猪流行性腹泻疫苗的免疫，才能收到良好的效果。