血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3检测联合核磁共振弥散加权成像在乳腺癌诊断中的应用

杜 森，赵 森，周 青，孙亮亮，吴海滨

(河南大学第一附属医院,河南 开封 475100)

乳腺癌是全球女性癌症相关死亡的第二大原因[1]。据2018年全球癌症统计，中国乳腺癌发生率为36.1%[2]。尽管乳腺癌的诊断方法在不断优化，但乳腺癌早期无典型症状，常需要与增生、乳腺炎、乳腺囊肿等良性病变进行鉴别诊断。研究发现，磁共振成像(Magnetic resonance imaging，MRI)对乳腺癌的鉴别诊断率较高，可多方位、多序列成像，结果可靠性高，对软组织分辨率也较高[3]。MRI是一种可准确鉴别良、恶性乳腺癌的检测方法，较为便捷和可靠，克服了B超结果的主观性[4]。磁共振弥散加权成像(Diffusion-weighted imaging，DWI)是以MRI序列为基础的高级影像学，可从肿瘤形态学和病理生理学方面对乳腺癌进行定性定量，是唯一可观察组织微观动态结构变化的技术，但由于患者自主运动可能造成影响记录失误而出现错误的ADC值[5]。因此DWI需要联合其他诊断方法。李妍等[6]研究发现，抑制长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)小核仁RNA宿主基因3(Small nucleolar RNA host gene 3，SNHG3)表达可降低乳腺癌细胞增殖能力。因此，本研究分析DWI联合血清lncRNA SNHG3表达对乳腺癌的诊断价值，以期为早期诊断乳腺癌提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2019年1月至2021年11月在本院就诊的142例女性乳腺结节患者，年龄25～72岁，平均年龄(50.50±9.68)岁。将乳腺结节患者分为乳腺癌组(n=88)和良性病变组(n=54)。病例纳入标准：①X射线或超声检查显示，单发乳腺结节；②符合DWI检查适应证且接受DWI检查；③经穿刺活检明确是否为乳腺癌。排除标准：①合并其他恶性肿瘤或心、肝、肾功能障碍；②有乳腺假体填充；③接受过抗肿瘤治疗。本研究患者及家属均知情同意。

1.2 DWI检查方法 先用GE DISCOVERY750型3.0 T磁共振成像仪常规扫描研究对象乳腺部位，患者乳房自然垂置于扫描仪中。扫描范围包括双侧乳腺组织、腋窝及纵膈，进行自旋回波序列T1WI、T2WI检查及轴位DWI扫描。b值取800 s/mm2。将扫描数据导入BOLD和DTI软件进行处理，分别结合T2WI和轴位DWI序列在图像上手动选择病灶感兴趣区(ROI)，然后通过软件分析获得最小表观扩散系数(Apparent diffusion coefficient，ADC)值，测量3次并取平均值。以乳腺癌病变平均ADC值1.19作临界值，定义ADC值≤1.19×10-3mm2/s为恶性，>1.19×10-3mm2/s为良性[7]。

1.3 血清中lncRNA SNHG3表达水平检测 所有患者在入院检查时用采集静脉血6 ml装于普通采血管，离心15 min(3000 r/min)，留上清。用总RNA提取试剂盒(上海吉至生化科技有限公司)提取血清总RNA，然后用cDNA合成试剂盒(北京索莱宝生物科技有限公司)逆转录合成cDNA。用实时荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)对lncRNA SNHG3进行扩增反应，以β-actin为内参。lncRNA SNHG3，F：5’-TTCAAGCGATTCTCGTGCC3’，R：5’-AAGATTGTCAAACCCTCCCTGT-3’。β-actin，F：5’-GGGAAATCGTGCGTGACATTAAGG-3’，R：5’-CAGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。采用2-ΔΔCt算法计算lncRNA SNHG3的相对表达量。

1.4 肿瘤标志物检测 血清糖类抗原125(Carbohydrate antigen 125，CA125)和癌胚抗原(Carcino embryonic antigen，CEA)水平用DXI800全自动化学发光免疫分析仪检测。正常参考值范围：CA125为0～35 U/ml，CEA为0～5 ng/ml。

2 结 果

2.1 乳腺癌组、良性病变组血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平及ADC值比较 与良性病变组相比，乳腺癌组血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平较高(均P<0.05)，ADC值较低(P<0.05)，见表1。

表1 乳腺癌组、良性病变组血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平及ADC值比较

2.2 乳腺癌组患者血清lncRNA SNHG3水平与CA125、CEA相关性分析 Pearson分析显示，血清lncRNA SNHG3水平与CA125、CEA呈正相关(r= 0.516、0.521，P<0.05)。见图1、2。

图1 血清lncRNA SNHG3与CA125相关性

图2 血清lncRNA SNHG3与CEA相关性

2.3 良恶性乳腺病变DWI图像特征比较 乳腺癌组病灶形状不规则、血管影增多、边界模糊、毛刺征及淋巴结肿大比例高于良性病变组(均P<0.05)，见表2。

表2 良恶性乳腺病变DWI图像特征比较[例(%)]

2.4 DWI联合血清lncRNA SNHG3对乳腺癌诊断价值 ROC曲线显示，血清lncRNA SNHG3诊断乳腺癌的准确度为87.32%，其敏感度、特异性分别为86.36%、88.89%，lncRNA SNHG3相对表达的截断值为1.47(图3)；ADC值诊断乳腺癌的准确度为89.44%，其敏感度、特异性分别为90.91%、87.04%；血清lncRNA SNHG3联合ADC值诊断乳腺癌的准确度为88.03%，其敏感度、特异性分别为85.23%、92.59%。见表3、4。

图3 血清lncRNA SNHG3诊断乳腺癌ROC曲线

表3 血清lncRNA SNHG3联合ADC值对乳腺癌诊断价值(例)

表4 血清lncRNA SNHG3联合ADC值对乳腺癌诊断价值(%)

3 讨 论

乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，大部分患者确诊时，已发生区域淋巴结转移，但早期乳腺癌治愈率超过90%[8-9]。因此，早期发现乳腺癌，能为患者治疗争取到黄金宝贵时间，提高治愈率。

乳腺癌是血管依赖性肿瘤，在肿瘤细胞增殖过程中需经过内皮细胞增殖、侵入阶段形成新的毛细血管网，因此，乳腺癌内部存在着复杂的血管网络，会增加血管微循环，这是影像学诊断乳腺癌的病理基础[10]。医学影像诊断是乳腺癌早期诊断的重要方法，对肿瘤位置、形态扫描出来的图像辨识率较为准确，有利于发现多灶或微小肿瘤[11]。DWI是一种新兴的乳腺癌诊断技术，可检测水分子弥散运动，并用ADC值衡量[12]。

肿瘤组织的微观改变早于形态学改变，ADC值是一种功能性指标，由于正常组织发生癌变，导致组织微观结构发生变化，DWI图像显示为高信号，ADC值降低[13]。人体中，水分子会受毛细血管、小静脉微循环血流灌注影响，而ADC值在一定程度上与组织微循环灌注有关，其能间接反映出肿瘤细胞构成，肿瘤细胞恶性程度越高，密集性高，异形性越明显，细胞外间隙较正常细胞较小，细胞增殖旺盛，水分子扩散受限，导致ADC下降，且ADC值越低，肿瘤分期越高[14-15]。有研究[16]显示，乳腺癌病灶形状不规则比例、毛刺征及淋巴结肿大比例、血管影增多比例、边界模糊比例明显高于良性病变，与本研究结果一致，表明DWI可用于乳腺癌诊断，利用机体内水分子的自由性，从形态学上可对良恶性病变进行有效鉴别。本研究ADC值诊断乳腺癌的准确度为89.44%，其敏感度、特异性分别为90.91%、87.04%，从中发现，DWI检查在乳腺癌诊断中敏感度较高，但患者自主运动可能造成影像记录失误而出现错误的ADC值，另外出血可导致肿瘤高信号和ADC值低，误诊为恶性肿瘤[17]。

lncRNAs可作为肿瘤的抑制基因或癌基因，影响肿瘤的细胞增殖、凋亡、侵袭等过程，参与肿瘤的发生过程[18]。lncRNA SNHG3是一种新型致癌lncRNA，在各种肿瘤中异常表达，包括乳腺癌[19]、肝癌[20]等，其表达水平上调有助于肿瘤细胞增殖、迁移及上皮间质转化[21]。lncRNA SNHG3是在乳腺癌组织中表达上调的lncRNA，其表达水平与乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移有关[22]。有研究报道，lncRNA SNHG3可作为高度保守的诊断生物标志物[23]。CA125、CEA是肿瘤标志物，常用于乳腺癌早期诊断，是现阶段乳腺癌诊断的重要标志物[24]。本研究显示，乳腺癌组血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平高于良性病变组，乳腺癌患者血清lncRNA SNHG3与CA125、CEA呈正相关，提示lncRNA SNHG3可影响乳腺癌的发展。本研究分析显示血清lncRNA SNHG3联合ADC值诊断乳腺癌的准确度为88.03%，其敏感度、特异性分别为85.23%、92.59%，联合诊断的特异性高于lncRNA SNHG3、ADC值单独诊断，提示血清lncRNA SNHG3联合DWI可提高对乳腺癌的诊断价值。单一的影像学指标不足以诊断乳腺癌，许多研究侧重于使用影像学指标联合血清标志物来提高诊断准确性。

综上所述，lncRNA SNHG3在乳腺癌患者血清中表达上调，DWI联合血清lncRNA SNHG3水平对乳腺癌有较好的诊断价值。本研究仍需扩大研究样本，进一步验证DWI联合血清lncRNA SNHG3水平对乳腺癌的鉴别诊断价值。