一种小体积注射液装量检查方法的探讨

魏文，王彦娜，吴明远，王建刚

康立泰药业有限公司，山东 青岛 266000

装量即净含量，是定量包装产品的基本属性。国家质量监督检验检疫总局颁布的《定量包装商品计量监督规定》（总局令第 75 号）于 2006年 1 月 1 日在各行业中施行［1］。我国早期药品标准对单剂量药品重（装）量差异、装量检查项目进行了规定，以保证药品的有效性、安全性和均一性。

目前，计算药品装量的方法有两种：重量法和容量法［2-3］。其中，重量法适用于以重量计的药品制剂，不适用于小体积注射液的装量检测；而容量法采用注射器量取体积，仅能精确到小数点后一位，且注射器读数较粗，会造成较大的误差［4］，均不适用小体积注射液的装量检测。因此，开发一种精确度高、适用于小体积注射液制剂装量检测的方法十分重要。

本实验针对上述现有技术不适用于小体积注射液制剂装量检测、误差较大等问题，参考《中国药典》三部（2020 版）中关于注射剂项下装量检查中重量／相对密度计算装量的描述（三部通则0102）［2］，进行人白介素-12（human interleukin-12，hIL-12）相对密度测定和装量检查，探讨采用一种精确度高、适用于小体积注射液制剂装量检测的方法——重量／ 相对密度计算装量［4-5］。

1 材料与方法

1.1 供试品 hIL-12 注射液（CHO 细胞表达，批号：201807002、201807004、201808006）由本公司生产。

1.2 主要仪器 万分之一分析天平（配套打印机）AUW220 购自岛津公司；电热鼓风干燥箱DHG-9246购自上海精宏实验设备有限公司；药品强光照射试验箱SHH-100GD-2 购自重庆永生实验仪器厂；生化培养箱SPX-100B-Z 购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂；1 mL 移液器购自美国Thermo fisher 公司。

1.3 相对密度测定

1.3.1 测定方法 将供试品存放于4 ℃冰箱备用，测量前平衡至室温。取1 支西林瓶作为空容器，用纯化水清洁内外壁3 次，在105 ℃电热鼓风干燥箱内干燥至恒重，取出置干燥器中放冷至室温，再精密称定西林瓶（空容器）的重量。用已计量的1 mL 移液枪准确量取1 mL 供试品，注入至上述已恒重的西林瓶中，精密称定总重量，按下式计算每1 mL 供试品的重量，即供试品的相对密度。

供试品的相对密度 = 1 mL 供试品和容器的总重量-空容器的重量

1.3.2 不同温度供试品对相对密度测定影响的检测2 名实验员分别在20、22、24 ℃条件下，按照1.3.1项方法测定201808006 批供试品的相对密度，同时测定灭菌注射用水相对密度作为内参。重复10 次，计算供试品、灭菌注射用水、供试品与灭菌注射用水比值的变异系数（CV）及不同温度间的差异。

1.3.3 不同批次供试品对相对密度测定影响的检测2 名实验员分别在22 ℃条件下，按照1.3.1 项方法测定 3 批供试品（201807002、201807004、201808006）的相对密度。重复10 次，计算供试品CV 和不同批次间的差异。

1.3.4 强制条件稳定性检测 取201807002 批供试品，分别经4 ℃避光（对照组）、40 ℃高温避光（高温组）、4 ℃ 4 500 lx 光照（光照组）条件处理各 10 瓶。分别于7、14 d 取出每种条件处理的供试品各5 瓶，平衡至20 ～24 ℃，按照1.3.1 项方法测定相对密度。计算供试品CV 和各处理条件间的差异。

1.4 装量检查法 2 名实验员分别进行独立试验：取5个西林瓶（无胶塞），用纯化水清洁内外壁3 次，在105 ℃电热鼓风干燥箱内干燥至恒重，取出置干燥器中放冷至室温；取供试品5 瓶，平衡至室温。精密称定西林瓶（空容器）重量，立即除去供试品铝盖及胶塞（开启时注意避免损失），用2.5 mL 干燥量入式注射器及注射针头抽尽供试品内容物［4-6］，注入上述西林瓶中，精密称定总重量。按下式计算每个容器内容物的装量［7-8］，并求其平均装量。

供试品装量=（总重量-空容器重量）／供试品相对密度

1.5 统计学分析 应用SPSS Statistics 17.0 软件进行统计学分析，组间比较采用方差分析，以P ＜0.05为差异有统计学意义［9-10］。

2 结 果

2.1 相对密度测定

2.1.1 不同温度供试品对相对密度测定的影响 不同温度下供试品相对密度的平均值为1.004 g ／ mL，10 次重复测定的CV 均小于2%。2 名实验员分别在不同温度下测定供试品相对密度的差异无统计学意义（F 分别为 0.362 和 1.211，P 分别为 0.700 和0.314）。见表1。表明正常室温波动对供试品的相对密度测定无影响。

表1 不同温度下供试品相对密度检测结果（g ／ mL）Tab.1 Relative density of test samples at various temperatures（g ／ mL）

不同温度下灭菌注射用水相对密度10 次重复测定的CV 均小于2%。不同实验员、不同温度的检测结果差异均无统计学意义（F 分别为0.146 和0.071，P 分别为0.865 和0.932）。见表2。表明正常室温波动对灭菌注射用水的相对密度测定无影响。

表2 不同温度下灭菌注射用水相对密度检测结果（g ／ mL）Tab.2 Relative density of sterilized water for injection at various temperatures（g ／ mL）

实验员 1 在不同温度下（20、22、24 ℃）测定供试品与灭菌注射用水相对密度比值的差异无统计学意义（F = 0.283，P = 0.755），实验员 2 在不同温度下（20、22、24 ℃）测定供试品与灭菌注射用水相对密度比值的差异也无统计学意义（F = 1.134，P =0.337），见表3。表明正常室温波动对供试品性质无影响，供试品性质较稳定，该方法用于本供试品检测的适用性较好。

表3 不同温度下供试品与灭菌注射用水相对密度比值检测结果Tab.3 Relative density ratio of test samples to sterilized water for injection at various temperatures

2.1.2 不同批次供试品对相对密度测定的影响 不同批次供试品相对密度的平均值为1.004 g ／ mL，CV 均小于2%。2 名实验员检测3 批供试品相对密度的差异均无统计学意义（F 分别为0.036 和1.820，P 分别为0.965 和0.181）。见表4。表明不同批次供试品性质较稳定。

表4 不同批次供试品相对密度检测结果（g ／ mL）Tab.4 Relative densities of test samples of various batches（g ／ mL）

2.1.3 强制条件稳定性 各种处理条件供试品相对密度的平均值为1.004 g ／ mL，CV 均小于2%。处理7 和14 d 各组供试品相对密度差异均无统计学意义（F 分别为 0.156 和 0.219，P 分别为 0.858 和0.806）。见表5。表明供试品性质较稳定，高温、光照等可能造成供试品性质改变的强制条件对其相对密度均无影响。

表5 各种处理条件下供试品的相对密度（g ／ mL）Tab.5 Relative densities of test sample sunder various conditions for treatment（g ／ mL）

上述试验结果表明，不同环境温度间、批次间、稳定性研究不同时间取样的相对密度差异均无统计学意义（P ＞ 0.05），可将 hIL-12 相对密度确定为一个固定数值，即测定结果的平均值，不用每次测定。常规储存条件（4 ℃）存放的批生产供试品和稳定性研究供试品的相对密度平均值均为1.004 g ／ mL，最终取2 次试验结果的平均值作为hIL-12 的相对密度，为 1.004 g ／ mL。

2.2 装量检查结果 2 名实验员独立试验的3 批供试品平均装量检查结果分别为1.09、1.08、1.09、1.08、1.09 和 1.09 mL（最后一位为实测数值），均大于产品的标示装量（1.00 mL），符合规定。5 瓶检测结果的CV 均小于2%，且不同人员操作差异无统计学意义（不同批次的F 分别为2.133、0.800、3.200，P 分别为 0.182、0.397、0.111）。见表 6。表明重量／ 相对密度计算装量的方法适用于hIL-12装量检查，且重复性较好。

表6 3 批供试品不同实验员装量检查结果（mL）Tab.6 Examination results of filling quantities of three batches of test samples by different operators（mL）

3 讨 论

《中国药典》三部（2020 版）中“最低装量检查法”（通则0942）要求：灌装标示装量为1 mL 的注射剂应适当增加装量，易流动液增加0.10 mL，黏稠液增加0.15 mL，其最后一位数值是有效位（相对密度 ＞1.25g ／ mL 的溶液为黏稠液），对于以容量计的小规格标示装量剂，可改用重量法或按品种项下的规定方法检查［2］。

本公司hIL-12 为标示装量1 mL 的易流动液，采用容量法有以下缺点：用2.5 mL 注射器量取体积只能精确读取到小数点后一位，检出的每支装量与实际装量差距较大；用5 mL 量筒检查1 mL 供试品时相对误差大［11］，不能满足“量筒的大小应使待测体积至少占其额定体积的40%”的要求，而目前市场上量筒的最小额定体积为5 mL，且用肉眼估读误差大；注射器的量入式标化国内尚无标准可循，且注射器读数较粗，有造成结果误判的可能性；判断标准只有下限无上限，可能造成因注射液使用超量造成不必要的不良反应等问题［12］。因此，参考《中国药典》三部（2020 版）关于注射剂项下的规定方法，改用重量／ 相对密度计算装量的方法进行检测。

本文相对密度测定方法避免了比重瓶测定法药液用量大［13-14］（目前市场上比重瓶的最小额定体积为5 mL），且方便快捷，重复性、稳定性和适用性较好。采用本文方法计算小容量注射剂装量，无需量筒，避免了容量法误差大等缺点［15］，取3 位有效数字进行结果判断，能更快速、准确、真实地测定小容量注射剂每支的装量。采用机械分装时，装量的波动不可避免，应控制在一定范围内，采用本方法可按药典要求结合本产品安全剂量，规定规格为1 mL 注射液的装量范围，以确保临床给药量，防止使用超量。