岭南排石口服液研制与刺桐碱含量测定的研究

刘群娣，万 颂，苏馨科，欧阳霄妮，黄俊明，李冬利，郑小吉

（1. 广东江门中医药职业学院南药学院，广东 江门 529000 ；2. 广州市花都区人民医院泌尿外科，广东 广州510800 ；3. 五邑大学生物科技与大健康学院，广东 江门 529000）

岭南排石口服液是以全国老中医药专家学术继承工作指导老师、广东省第二批名中医师承项目指导导师余伯亮主任中医师家传经验方“岭南排石汤”为原方，并由广东首届职教名师、广东江门中医药职业学院郑小吉主任中药师采用现代科学工艺研制而成，用于临床多发结石症的治疗。岭南排石口服液以牛大力、布渣叶、广东土牛膝等为原料，其中牛大力为君药。牛大力为豆科植物美丽崖豆藤Millettia speciosa Champ. 的干燥根，是岭南常用的“药食同源”药材，其味甘、性平，具有补虚润肺、补骨、强筋活络的功效。刺桐碱、高丽槐素是岭南排石口服液中主要的药效成分[1-2]，且常被用作评价牛大力质量优劣的指标[3]。本文介绍了岭南排石口服液的制备工艺，并以色谱图中的主要色谱峰、牛大力的主要药效成分刺桐碱为指标性成分，建立岭南排石口服液中刺桐碱含量测定的简便方法，用以对岭南排石口服液进行质量控制。

1 仪器与试药

ACQUITY UPLC H-Class PLUS 型高效液相色谱仪，配Empower 色谱工作站（购自上海Waters 科技有限公司）；ML204T 型电子分析天平（购自上海METTLER TOLEDO 仪器有限公司）。牛大力、布渣叶、广东土牛膝等药材均购自国药控股国大药房江门连锁有限公司，并经广东江门中医药职业学院郑小吉教授鉴定为正品。岭南排石口服液（批号：2021091701，2021091702，2021091703 ；规格：50 mL）；对照品刺桐碱（批号：P20A10U95634，含量：98%），购自上海源叶生物科技有限公司；甲酸为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的刺桐碱对照品约1 mg，精密称定后用50% 的甲醇溶解，制得质量浓度为62.50 μg/mL 的对照品溶液。精密吸取上述溶液，用50% 的甲醇进行逐级稀释，即得到不同质量浓度的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取岭南排石口服液5 m L，置于50 mL 的容量瓶中，加50% 的甲醇定容至刻度，摇匀后经微孔滤膜过滤，即制得供试品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱；检测波长：278nm；流速：0.300mL/min；进样体积：1μL；柱温：30℃。梯度洗脱流动相比例见表1。

表1 梯度洗脱流动相比例

2.3 专属性试验

取对照品溶液、供试品溶液进样分析，以50%的甲醇溶液为阴性对照溶液，结果见图1。供试品溶液（图1-C）与对照品溶液（图1-A）的色图谱中保留时间为2.8min 处有相同色谱峰，且紫外吸收光谱图一致，而阴性对照溶液（图1-B）在此处无色谱峰。表明该检测方法的专属性好。

图1 对照品溶液（A）、阴性对照溶液（B）及岭南排石口服液供试品（C）的典型色谱图

2.4 线性与范围考察

取不同质量浓度的对照品溶液，按上述色谱条件进样，记录峰面积。以峰面积积分值对对照品溶液的进样量进行回归分析，以浓度（μg/mL）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：y= 4393x+3680.7（r=0.9999）。结果表明，刺桐碱的进样浓度在0.10 ～62.5 μg/mL 之间时，与峰面积的值呈现良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液，按“2.2”项下的色谱条件连续进样6 次，记录峰面积。峰面积的相对标准偏差（RSD）均为0.07%（n=6），均小于2%，表明该检测方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，在室温下分别放置0h、2h、4h、8h、12h、24h 后，进样分析，记录峰面积。峰面积的RSD 为0.39%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批岭南排石口服液（批号：2021091701），按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，并平行分为6 份，按“2.2”项下的色谱条件进样分析，记录峰面积。结果显示RSD 为1.30%（n=6），表明该检测方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的岭南排石口服液（ 批号：2021091701）约0.05mL，平行分为6 份，分别加入上述对照品溶液适量，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，并按“2.2”项下的色谱条件进样分析，计算回收率。结果显示加样回收率为1.86%。详见表2。

表2 加样回收率试验（n=6）

2.9 样品含量测定

取岭南排石口服液3 批，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，并按“2.2”项下的色谱条件进样分析测定，计算样品中刺桐碱的含量。结果见表3。

表3 三批岭南排石口服液中刺桐碱含量（μg/mL）

3 岭南排石口服液的制备工艺

通过研究，确定岭南排石口服液的现代科学制备工艺流程。按验方配比准备药材原材料，按液料比3:1的比例加水煎煮2 次，第1 次煎煮120 min，第2 次煎煮80 min。合并两次煎煮滤液，浓缩至液料比为1:1的浓缩液体积，静置离心后取上清液，补液至液料比为1:1，即得岭南排石口服液。制备工艺经药厂试生产，通过样品测定，发现以该工艺条件制备的成品稳定性较好。

4 讨论

4.1 指标成分的选择

根据处方组成及配伍原则，并结合文献报道，对岭南排石口服液可能含有的有效成分进行预试验，综合考虑各组分在处方中的含量差异和出峰响应差异，兼顾该制剂整体质量评价操作的简便性，确定以主要色谱峰——刺桐碱（牛大力）活性成分作为质量控制的指标。

4.2 色谱条件的考察

本研究考察了多种流动相体系（包括乙腈- 水、甲醇- 水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液）。以甲醇- 水系统作为流动相时，出峰时间推迟，峰变宽；以乙腈-水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液作为流动相时，出峰时间相当，乙腈-0.1% 甲酸水溶液中各组分分离度及色谱峰峰形更好。故本研究选用乙腈-0.1% 甲酸水溶液作为流动相。本研究采用二极管阵列检测器对样品中各主要组分进行全波长扫描，刺桐碱的最大吸收波长为278nm，干扰成分在此波长也有吸收峰，故最终选择将278nm 作为检测波长。

图2 刺桐碱紫外吸收光谱图

5 小结

本研究建立了岭南排石口服液的研制方法，并采用UPLC 法快速测定岭南排石口服液中刺桐碱的含量，对3 个批次样品进行了含量测定，结果显示刺桐碱的含量范围为76.06 ～81.72 μg/mL，其含量范围波动较小，说明该生产工艺和样品质量均较为稳定。采用UPLC 法测定岭南排石口服液中刺桐碱的含量具有方便、快速、准确等优点，为建立岭南排石口服液的质量标准提供了实验依据。挖掘名老中医经验方是振兴中医药的重要途径，岭南排石口服液的研制，为中医药治疗临床多发结石症提供了一种效高价廉、服用方便、毒副作用小的中药制剂，为发掘开发名老中医经验方开辟了新途径。