我国20个城市宠物犬蜱媒病血清流行病学调查

穆洪云 ， 张俭伟

[1.江苏农牧科技职业学院 ， 江苏 泰州 225300 ； 2.勃林格殷格翰动物保健(上海)有限公司 ， 上海 静安 200040]

在全球范围内，蜱媒病不断威胁着人类及犬的健康，包括我国在内，有着越来越多蜱媒病的病例。蜱虫是多种疾病的传播媒介，如巴贝斯虫病、埃里希体病、无形体病、立克次体病、莱姆病等[1-2]。这些蜱媒病不仅严重危害犬的健康，同时还威胁着人类的生命安全。随着气候变暖和环境变化，以及新发和再发蜱媒病的出现，蜱媒病在国内外均已引起广泛关注[3-4]。近几年，在我国发现了多个人粒细胞无形体病及发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)病例，并出现了死亡病例，引起了人们越来越多的关注，也让大家更加重视蜱及蜱媒病的预防，同时也需要更多关于蜱媒病的流行病学资料[5-7]。本调查以我国20个城市门诊宠物犬为对象，进行犬常见蜱媒病的检测，结合之前的蜱虫种类及分布调查，以期为我国犬的蜱及蜱媒病防治提供基础资料，为蜱媒病的正确预防提供一些思路。

1 材料与方法

1.1 血清样本采集和处理 选定20个城市，每个城市中选择3～5家宠物医院，每家采集5～10份犬血液样本，每只犬采集0.5～1.0 mL血液，分离血清，保存于-30 ℃备用，各样本信息登记编号。

1.2 试剂与仪器 SNAP-4DX Plus检测试剂盒，购自美国IDEXX公司；吉氏巴贝斯虫人工感染的犬阳性血清、田鼠巴贝斯虫人工感染的犬阳性血清和正常犬血清，均由中国农业科学院上海兽医研究所提供。血清检测酶标仪为MOLECULAR DEVIECS，SPECTRA MAX M5。

1.3 犬的蜱媒病的检测

1.3.1 犬感染莱姆病、无形体病和埃里希体病的检测 按SNAP-4DX Plus检测试剂盒说明书操作步骤进行检测。简述如下，取待测血清样本约150 μL置于反应管中，加200 μL检测试剂充分混合，混合物加入检测装置的样本孔，30～60 s后样本液到达激活孔，该孔一旦显色，立即按下激活装置，8 min后观察结果。

1.3.2 犬感染吉氏巴贝斯虫和田鼠巴贝斯虫的血清学检测 吉氏巴贝斯虫的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法参照参考文献[8]建立的方法，包被抗原为大肠埃希菌重组表达的吉氏巴贝斯虫P50抗原。

田鼠巴贝斯虫的ELISA方法参照参考文献[9-10]报道的方法，包被抗原为大肠埃希菌重组表达的田鼠巴贝斯虫截短型分泌抗原(BmSA1)。

ELISA方法简述：(1)用包被液将重组蛋白抗原稀释至1 μg/mL，100 μL/孔，每一样本做复孔，空白对照加GST 蛋白；(2)4 ℃，包被过夜；(3)倾去抗原液，用PBST洗涤3次，每次5 min，纸巾上拍干；(4)加封闭液，200 μL/孔，37 ℃，湿盒内封闭1 h；(5)倾去封闭液，用PBST洗涤，方法同上；(6)用PBST稀释待检血清(1∶100)，37 ℃，湿盒内温育1 h；(7)倾去待检血清，用PBST洗涤，方法同上；(8)用PBST将辣根过氧化物酶标记的二抗羊抗犬IgG 1∶4 000稀释，100 μL/ 孔，37 ℃，湿盒内温育1 h；(9)倾去二抗，用PBST洗涤，方法同上；(10)加入新配制的ABTS酶底物液，100 μL/孔，37 ℃，湿盒内避光反应30 min；(11)用酶标仪在波长415 nm处测OD值。选用相应的巴贝斯虫感染的阳性血清和正常犬血清(阴性血清)作试验对照，待测样本OD值为复孔平均值减去GST对照孔平均值，其大于0.25判为阳性(30个正常犬血清平均OD值加上3倍标准误)。

2 结果

2.1 样本采集和制备 本调查中从我国20个主要城市采集样本，涉及我国中东部16个省、直辖市，共采集到宠物犬血清562份，见表1。

表1 犬血清样本采集和制备Table 1 Collection and preparation of blood samples from pet dogs

2.2 犬蜱媒病检测

2.2.1 犬3种常见病的检测 应用商业化SNAP-4DX Plus检测试剂盒进行了莱姆病、无形体病和埃里希体病的检测。对526份可检测血清(562份样本中有36份血清因分离量较少，不能检测)的测定发现，莱姆病检测到2份，感染率为0.38%；埃里希体病检测到7份，感染率为1.33%；无形体病检测到14份，感染率为2.66%。表明我国犬体均存在3种常见病，感染率较高的是无形体病和埃里希体病。来自上海、杭州等几个城市的疾病种类较多、感染率较高，检测结果见表2。

表2 莱姆病、埃里希体病和无形体病的血清学检测Table 2 Serological tests for Lyme disease,ehrlichiosis and anaplasmosis

2.2.2 犬田鼠巴贝斯虫和吉氏巴贝斯虫病的检测 对本次采集的全部血清样本(562份)进行了检测，结果如表3所示，宠物犬的田鼠巴贝斯虫感染率为19.57%，吉氏巴贝斯虫感染率为3.91%；20个城市中，除青岛外，均有田鼠巴贝斯虫感染，且感染率介于5.71%～60.00%，显示了很高的感染程度；石家庄等8个城市样本中未发现吉氏巴贝斯虫阳性，其他12个城市感染率介于1.75%～16.67%，也显示了普遍感染的特征。

表3 宠物犬田鼠巴贝斯虫和吉氏巴贝斯虫感染的ELISA检测Table 3 ELISA detection of Babesia microti and Babesia gibsoni in pet dogs

3 讨论

本项工作调查了我国20个主要城市宠物犬蜱媒病感染情况，采集了具有较多数量和地域代表性的样本，是国内关于犬蜱媒病的一次系统调查，检测了多种蜱媒病的流行情况，试验结果可为国内宠物犬蜱虫及蜱媒病的防控提供研究基础，进而找到适合国内情况的蜱媒病的防控措施。

本调查中发现，我国宠物犬的常见蜱媒病中，犬埃里希体病、吉氏巴贝斯虫病和无形体病阳性率较高，这与其他地方犬的情况相似。本调查中发现了2例莱姆病的病例，阳性率为0.38%，这与墨西哥的一项宠物犬莱姆病流行病学调查结果相近(阳性率为0.2%)，略低于韩国的一项针对于军犬的流行病学调查(阳性率为1.1%)，但阳性率比英国(阳性率为4.5%～11.0%)和美国(阳性率为1.4%～11.6%)的几项流行病学调查低很多[11-15]。我国自1986年首次发现东北林区人群中存在莱姆病的发生和流行以来[16],现已证实29个省(市、区)的人群中存在莱姆病的感染,并从病原学上证实了其中至少有19个省(市、区)存在该病的自然疫源地,人群中有莱姆病的发生和流行。目前国内有宠物犬的家庭越来越多，需要进一步研究并重视莱姆病等这些人兽共患病在宠物犬的流行病学情况。

本调查中，ELISA试验结果表明宠物犬吉氏巴贝斯虫的阳性率为3.91%，这与在华东地区的另一项调查结果基本一致(阳性率为3.47%)。犬巴贝斯虫病是犬的一种重要的以蜱虫为媒介的血液寄生虫病，它的诊断和治疗目前仍然是宠物临床医生面临的巨大挑战。由于蜱虫分布范围的扩大以及宠物犬在全球范围的流动，导致犬巴贝斯虫病不断扩散。吉氏巴贝斯虫一般是由血红扇头蜱、长角血蜱等蜱虫传播的。吉氏巴贝斯虫是国内宠物临床常见的血液寄生虫病例，特别是在蜱虫多发的区域，它可导致溶血性贫血和全身炎症反应综合征所导致的多器官功能障碍综合征，严重时可导致患犬死亡[17-18]。ELISA调查结果显示，20个城市中的12个发现了吉氏巴贝斯虫阳性病例，其中福州、郑州、广州、深圳、西安和成都均发现2例及以上病例，结合临床情况，这些地区应特别重视对吉氏巴贝斯虫病的防控，特别需要宠物行业人员加强对宠主的教育，做好蜱虫的防控。

本调查发现，宠物犬的田鼠巴贝斯虫感染率为19.57%，分布于本调查的19个城市中。田鼠巴贝斯虫病是一种人兽共患的寄生虫病，1969年美国加利福尼亚州检测到首例人感染田鼠巴贝斯虫病例，至今已有数千例人感染巴贝斯虫感染病例的报道，且有逐年递增的趋势，根据美国疾病控制与预防中心(CDC)调查数据显示，仅在2011年，美国确诊的人感染田鼠巴贝斯虫病例就高达847例。其临床症状范围较广，大部分患者为无症状感染，但一些特殊人群(如切除脾脏的人群、免疫低下患者和老年患者)则有致命危险[19]。一般情况下，田鼠巴贝斯虫的储存宿主是啮齿类动物，本调查中虽然发现了大量的阳性病例，但关于犬是否是田鼠巴贝斯虫的储存宿主及对犬的危害还需要进一步研究来确认。

本调查发现，上海和杭州均检测到了犬莱姆病、埃里希体病、无形体病、田鼠巴贝斯虫病和吉氏巴贝斯虫病这5种蜱媒病的阳性病例，可能与这2个城市蜱虫的分布及宠物数量有关系，因此做好蜱虫及蜱媒病的防控非常重要。宠物医院是蜱虫及蜱媒病防控的关键环节，需要宠物医生及宠物行业的从业者重视蜱媒病的诊断及预防，进而去教育宠物主人，让宠主意识到蜱虫及蜱媒病的危害，只要宠主能够按照宠物医生的预防方案，每月进行驱虫，就可最大程度预防某些蜱媒病的发生。