云南省不同产地土壤有机质对山珠半夏产量和质量的影响研究

赵光国 赵玉琴 李建强 罗先平

（云南新兴职业学院，云南 昆明 650501）

0 引言

半夏在我国云南省各地均有分布，是一种适应性很强的植物，常生长于海拔1 500 ～2 300 m 的荒野山坡、路旁。但由于其经济价值极高，野生半夏药材资源遭到了严重破坏，加之人工种植的半夏生长又比较缓慢，很难满足市场需求，故云南省药材市场常以山珠半夏代半夏入药。山珠半夏为天南星科天南星属植物山珠南星（Arisaema yunnanense Buchet）的干燥块茎，常夏、秋两季采挖，去除茎叶、外皮、须根，晒干后呈类扁球形或类球形，表面白色或类白色，顶端圆平，中部向内凹陷，有明显环纹，周围有球形凸起及须根痕，下部钝圆光滑。山珠半夏质地坚硬，不易破碎，粉性，味辛，性温，有毒，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效，用于治疗痰多咳喘、呕逆晕厥、头痛胸闷等，是一味常用传统中药，不仅能供中医临床配方使用，也是藿香正气水、参苏宣肺丸等多种常用中成药的原料。

山珠半夏的相关研究很少，特别是山珠半夏的种植方面的研究等还未见有报道。山珠半夏药材已被载入《云南省中药材标准》（2005 年版）第七册（云YNZYC-0313—2010）。该标准收载的山珠半夏有效成分含量依照脂溶性浸出物测定法项下的热浸法进行测定。然而，仅凭浸出物的含量很难全面评价山珠半夏原药材的产品质量，在指导临床用药和药材质量保证上也很难做到客观评价。因此，笔者采用重铬酸钾容量法依据《土壤检测 第6 部分：土壤有机质的测定》（NY/T 1121.6—2006）测定云南省山珠半夏4 个不同产地土壤有机质的含量，并采用高效液相色谱法测定山珠半夏中代表性成分盐酸麻黄碱、琥珀酸、腺苷的含量，综合评价药材的质量，为种植户对种植基地的选择提供一定的理论依据，为制订合理的保护措施及规模化发展山珠半夏产业提供参考。

1 土壤有机质含量测定

1.1 供试材料

1.1.1 材料。土壤来源于云南省山珠半夏4 个不同产地即昭通市（巧家县）、曲靖市（宣威市）、楚雄彝族自治州（禄丰县）、昆明市（寻甸回族彝族自治县）。

1.1.2 试剂。重铬酸钾（分析纯）；硫酸（分析纯）；硫酸亚铁（分析纯）；邻菲啰啉（CHgN·HO）指示剂；《分析实验室用水规格和试验方法》（GB/T 6682—2008）中规定的三级水。

1.1.3 主要仪器设备。试验所需仪器设备主要有电炉（1 000 W）、25.0 mL 酸式滴定管、硬质试管（Φ25 mm×200 mm）、油浴锅、铁丝笼、温度计 （300 ℃）、自动调零滴定管。

1.2 方法

采用重铬酸钾容量法，依据《土壤检测 第6 部分：土壤有机质的测定》（NY/T 1121.6—2006）对土壤有机质进行检测。

1.3 检测结果

云南省山珠半夏4 个不同产地土壤有机质的含量委托昆明市农业科学研究院土壤肥料检测中心检测得到，结果如表1 所示。

表1 云南省四个不同产地土壤有机质的含量

2 山珠半夏有效成分含量测定

2.1 供试材料

2.1.1 药品。山珠半夏药材来源于昭通市（巧家县）、曲靖市（宣威市）、楚雄彝族自治州（禄丰县）、昆明市（寻甸回族彝族自治县）4 个不同产地，均为人工种植品种，经云南新兴职业学院基础教研室教师胡德美鉴定为天南星科植物山珠南星的干燥块茎。

2.1.2 试剂。甲醇（购自天津市致远化学试剂有限公司，分析纯）；乙腈（购自天津星马克科技发展有限公司，色谱纯）；娃哈哈纯净水；盐酸麻黄碱（购自中国食品药品检定研究院，批号：171241-201809）；琥珀酸（购自中国食品药品检定研究院，批号：110896-201602）；腺苷（购自中国食品药品检定研究院，批号：110879-201703）。

2.1.3 仪器。岛津LC-20A 高效液相色谱仪，LabSolutions 工作站；多功能粉碎机（永康市铂欧五金制品有限公司）；超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司，型号：SB-4200DT）；电子天平（美国康州HZ 电子有限公司）。

2.2 样品的制备

2.2.1 供试品的制备。准确称取各产地山珠半夏粉末（经打粉机粉碎后过孔径0.18 mm 筛）2.0 g 置于 150 mL 锥形瓶中，再量取20 mL 甲醇置锥形瓶中，定重，放入超声清洗机超声处理45 min，取出，放冷，补重，摇匀，静置后用0.45 μm 滤膜过滤，取续滤液。

2.2.2 混合对照品溶液的制备。精密称取琥珀酸（含量为100%）0.006 9 g，置于50 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至50 mL，摇匀，待用；精密称取腺苷（含量为98%）0.009 5 g，置于50 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至50 mL，摇匀，待用。精密称取盐酸麻黄碱（含量为100%）0.021 0 g，置于100 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至100 mL，摇匀，待用。取50 mL 容量瓶，精密吸取14 mL上述已配制好的琥珀酸溶液于该容量瓶中，精密吸取10 mL 上述已配制好的腺苷溶液于该容量瓶中，精密吸取10 mL 上述已配制好的盐酸麻黄碱溶液于该容量瓶中，得琥珀酸38.46 μg/mL、腺苷37.24 μg/mL、盐酸麻黄碱42.00 μg/mL 的混合对照品溶液。

2.3 色谱条件

采 用SHIMADZU Shim-pack GIST C色 谱 柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱（见表2）；流速为1.0 mL/min；检测波长为265 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。

表2 流动相梯度洗脱条件

2.4 检测结果

图1 体现了混合对照品中腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱这3 种成分的出峰情况，图2 体现了供试品中腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱这3 种成分的出峰情况。通过保留时间的对比，可以看出图2 中腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱3 种成分的峰（已标注）的保留时间与图1 中腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱3 种成分的峰（已标注）的保留时间一致。这说明该方法对腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱这3 种成分的含量测定适用性良好，结果可靠。

2.4.1 线性关系考察。精密吸取2.2.2 混合对照品溶液10、12、14、16、18、20、22 μL，根据表2色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，得出3 种成分的回归方程、相关系数与线性范围（见表3），3 种曲线的回归曲线、线性相关系数见图3、图4、图5。

表3 腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱3 种成分的回归方程、相关系数与线性范围

图1 腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱混合对照品高效液相色谱图

2.4.2 供试品中腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱的含量测定。精密吸取2.2.1 制备的供试品溶液10 μL，平行进样2 次，根据表2 色谱条件测定峰面积，按照外标法-标准曲线法计算得出4 个产地山珠半夏中3个代表性成分的含量（见表4）。

3 云南省四个不同产地山珠半夏产量

云南省4 个不同产地山珠半夏产量检测结果见表5。

4 结论与讨论

云南省山珠半夏4 个不同产地土壤有机质含量分别为昭通市（巧家县）41.10 g/kg、曲靖市（宣威市）59.56 g/kg，楚雄彝族自治州（禄丰县）61.20 g/kg、昆明市（寻甸回族彝族自治县）66.12 g/kg；每667 m山珠半夏产量分别为昭通市（巧家县）350 kg、曲靖市（宣威市）360 kg、楚雄彝族自治州（禄丰县）370 kg、昆明市（寻甸回族彝族自治县）400 kg；山珠半夏有效成分腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱的总含量分别为昭通市（巧家县）1.93 mg/g、曲靖市（宣威市）2.22 mg/g、 楚雄彝族自治州（禄丰县）2.42 mg/g、昆明市（寻甸回族彝族自治县）2.66 mg/g。根据所测结果的数据进行分析，云南省4 个产地山珠半夏随着土壤有机质含量的升高，产量和3 种有效成分的总含量也随之相应升高。因此，土壤有机质对山珠半夏产量和3 种有效成分的总含量具有一定的影响作用。故在选取山珠半夏的种植基地时，种植户可将土壤有机质含量作为一个参考条件进行考虑。

图2 腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱供试品高效液相色谱图

图3 腺苷的回归曲线、回归方程、相关系数

图4 琥珀酸的回归曲线、回归方程、相关系数

图5 盐酸麻黄碱的回归曲线、回归方程、相关系数

表4 4 个产地山珠半夏腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱含量、平均含量及RSD 值 mg/g

表5 4 个不同产地山珠半夏产量