液相色谱法快速测定黄瓜中克百威及3-羟基克百威残留

吴新华,卢勇国

(惠东县农业技术推广中心，广东 惠州 516300)

黄瓜营养丰富，含有大量的水分和维生素A、维生素C，有美容作用，新鲜黄瓜中的丙醇二酸能够抑制糖类转化为脂肪，具有减肥和预防冠心病的作用[1]。克百威是一种广谱内吸杀虫杀螨剂，它与胆碱酶的结合不可逆，毒性高[2]。根据《农药管理条例》及食品安全国家标准的规定，克百威禁止在蔬菜、瓜果上使用[3]，在农产品质量安全监督抽查工作中会重点监测克百威及其衍生物3-羟基克百威的残留情况。目前，液相色谱法检测蔬果中克百威及3-羟基克百威的检测多使用NY/T 761-2008标准方法[4]。该标准方法检测准确，特别适合对复杂基质蔬菜样品，对于基质简单、检测农药种类少的检测，其前处理可以进一步简单优化，以提高检测效率。当前，QuEchERS快速处理样品的方法比较常见，但其使用的吸附材料易对部分农药产生吸附，影响检测准确性，同时其研究多需色谱质谱联用[5-10]，基层检测机构较难实现。因此，结合现有设备、针对基质较简单的黄瓜样品中克百威及其衍生物3-羟基克百威的筛查，研究操作简单、溶剂损耗小、测定快速的液相色谱仪检测方法具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：液相色谱仪1260Ⅱ,美国安捷伦公司；柱后衍生仪Vector PCX,美国 Pickering 公司；高速匀浆机,德国艾卡；样品粉碎机,德国飞利浦公司；

试剂：克百威、3-羟基克百威，1000.0μg/mL, 农业部环境质量监督检验测试中心(天津)；氢氧化钠溶液、OPA试剂，美国 Pickering 公司；乙腈、甲醇，均为色谱纯；水为一级水；黄瓜,市售。

1.2 样品处理

取黄瓜，切块，充分混匀，放入样品粉碎机,制成待测样。准确称取 20.0 g 试样置于离心管中，加入一定量克百威、3-羟基克百威标样，加入氯化钠 5 g，加入 40 mL 乙腈，18200 r/min 匀浆 2 min，然后 3000 r/min 离心 6 min，使乙腈相和水相分层。吸取分层后的上层清液 4 mL，在 60 ℃ 经氮吹至近干，加入甲醇定容至 1 mL，过滤膜装瓶待测。

1.3 液相洗脱条件

色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18USP L1 Analytical, 4.6 mm×250 mm；柱温 42 ℃，进样体积 10 μL；荧光检测器，入射波长 330 nm，激发波长 465 nm；梯度洗脱条件 0 min,甲醇15%，2～8 min，甲醇25%，9 min,甲醇40%，10 min，甲醇45%，19～25 min，甲醇80%，26 min，甲醇15%、流量保持 1 mL/min。

1.4 柱后衍生条件

柱后衍生条件同NY/T 761-2008标准，0.05 mol/L 氢氧化钠溶液，流速 0.3 mL/min;OPA试剂，流速 0.3 mL/min；水解温度 100 ℃；衍生温度为室温。

2 结果分析

2.1 黄瓜提取液净化选择

黄瓜提取液经匀浆、离心后取上清液,氮吹、甲醇定容、过滤后装瓶进样，分析液相色谱图(图1)。发现杂质对目标物峰无影响，采用无农药残留黄瓜制备基质空白，配制标准曲线，避免基质效应。

图1 2种氨基甲酸酯类农药色谱图

2.2 标准曲线回归方程、相关系数、检出限

在0.02～1 μg/mL 范围内，使用黄瓜基质液配制标准溶液，克百威、3-羟基克百威浓度对应峰面积有良好的线性关系，相关系数R均大于0.999，以信噪比等于3对应的目标化合物浓度作为方法的检出限，得出方法检出限分别为 0.008 μg/mL、0.01μg/mL(表1)。

表1 标准曲线

2.3 回收率和精密度

对黄瓜样品添加3种不同浓度标准样品，做3个平行样，克百威、3-羟基克百威回收率为82.7%～98.2%，相对标准偏差RSD在1.7%～5.4%(表2)。结果表明，本方法符合检测要求。

表2 回收率、相对标准偏差

3 结论

参考NY/T761-2016蔬菜水果中氨基甲酸酯类农药残留检测方法，对黄瓜中克百威、3羟基克百威检测前处理进行了优化。结果表明，直接将提取液氮吹至近干，再用甲醇定容进样检测，液相色谱图中目标物不受杂质影响，整个过程步骤少，农药残留损失少，回收率较好，且方法简单。该方法回收率在82.7%～98.2%，相对标准偏差RSD在1.7%～5.4%，满足定量检测要求；适合基层检测单位黄瓜中克百威及3羟基克百威的批量检测工作。