在低流行区应用胶体金法检测2019-nCoV 抗体的诊断效果评价及抗体筛查策略探讨

狄嘉嘉，杨画

(1.东海县中医院检验科，江苏 东海 222300；2. 佛山科学技术学院，广东 佛山 528225)

0 引言

自2019年12月出现由新型冠状病毒（2019-novel coronavirus，2019-nCOV）感染引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）之后,2019-nCOV 更是不断发生变异，最新的变种病毒德尔塔(Delta)和奥密克戎(Omicron)已在全球肆虐[1-2]。COVID-19的具有一定的潜伏期，症状也并不明显，多以发热、乏力、干咳为主要表现，但有少量病患伴有鼻塞、腹泻、流鼻涕等症状[3]。国家卫健委在短期内连续8次对诊疗方案进行了修订,这足以说明该病的诊治难度之大[4]。早日接种疫苗，产生足量中和抗体已成为有效防控COVID-2019 疫情，减少危重症病患和死亡率的关键。基于此，国家对全民实施免费的新冠疫苗接种，先后进行了1 针剂初次接种、2针剂全程接种及现在的3 针剂加强接种。随着全面疫苗接种的开展，来院就医患者的2019-nCOV抗体的胶体金检测法的阳性率在不断增加，但各个医院所用的胶体金试剂盒的厂商并不完全相同，检测结果的灵敏度具有一定差异，故给临床医生和患者带来一定困扰。本研究通过评价本地区内居民接种不同针剂次数的国产新型冠状病毒（2019-nCOV）灭活疫苗后，不同厂家的胶体金法检测试剂盒检测2019-nCOV 免疫球蛋白M 抗体和免疫球蛋白G 抗体的性能指标之间所存在差异，对其在低流行区的应用与诊断效果进行探讨，从而为临床医生合理解读检验结果提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院在2020年6月至2021年12月收集的8000例血液标本，其中男性4009例，女性3991例，年龄区间18-75 周岁成人，均值（32.21±4.08）岁。这些病例中，有2000例标本为未接种筛查人群血液标本（0 针剂组），2000例标本为接种1 针剂初次接种人群的血液标本（1 针剂组），2000例标本为2 针剂全程接种人群的血液标本（2 针剂组），剩下2000例标本则为3 针剂加强接种人群的血液标本（3 针剂组），本次研究得到了医院伦理委员会的批准，患者对研究的目的、方法和意义等均知情同意并签字。

1.2 方法

本研究分别采用两种国产2019-nCOV 抗体胶体金法检测试剂盒：珠海丽珠公司（以下简称丽珠）生产的2019-nCOV 抗体配套试剂盒和英诺特（唐山）公司（以下简称英诺特）生产的2019-nCOV 抗体配套试剂盒，采集EDTA-K2抗凝全血（紫色管）或分离胶促凝血血清样本（黄色管），测定指标包含新冠IgM 和IgG 两种抗体，两种试剂盒均可进行随机阴阳性筛查。考虑到本地区在本实验进行期间是低流行区域，当2019-nCOV 抗体中出现阳性或弱阳性结果时，应用另一种2019-nCOV 试剂盒进行复测，若两种试剂盒同时显示阳性，则报给临床2019-nCOV 抗体阳性结果。本实验使用的（规格0-20uL）加样枪和仪器由北京力辰科技有限公司提供；使用的MK450 离心机为迈克尔公司提供。所有样本均是在清晨患者空腹情况下采集于黄色分离胶促凝管中，充分颠倒、混匀8 次，经3500r/min 离心8min 获得的血清。

1.3 统计学分析

本次研究所有患者的临床资料均采用Graphpad Prism.v6.0 统计软件处理，计数资料采用卡方检验，P<0.05 为差异有统计学意义。评价指标：敏感度(%)=100×[真阳性/(真阳性+假阴性)]；特异度(%)=100×[ 真阴性/( 真阴性+ 假阳性)]；错检率=100%- 特异度；漏检率=100%- 敏感度；正确率(%)=100×[( 真阳性+ 真阴性)/ 检验总样本量]。

2 结果

2.1 2019-nCOV 抗体胶体金法检测状况

筛 选2020年6月 至2021年12月 收 集 的2019-nCOV 抗体有效检测样本8000例，使用丽珠试剂和英诺特试剂检测各挑选8000例。其中男性4009例，女性3991例，年龄区间18-75 周岁成人，均值（32.21±4.08）岁。（见表1，2）丽珠试剂盒检出阳性2170例，男性1019例占比46.96%，女性1019例占比53.04%；英诺特试剂盒检出阳性2393例，男性1107例占比46.26%，女性1286例占比53.74%；统计结果显示，女性血清样本较男性血清样本的2019-nCOV 抗体的检出率更高，这可能与抗体滴度或女性机体某些特意蛋白引发的交叉反应有关。具体属于哪一情况所致，尚需进一步研究。此外，由表1 可以看出，在接种1 针剂时，英诺特试剂组阳性标本占比明显高于丽珠试剂组，而在其他针剂组中标本阳性占比差别并不显著。

表1 两种2019-nCOV 抗体检测试剂盒临床标本检测结果

统计分析发现，两种检测试剂盒的错检率、漏检率和正确率这3 项评价指标相当，而英特诺检测试剂盒的敏感度和特异度稍高于丽珠检测试剂盒，总体看来，两种试剂盒具有较高的比对一致性。（见表2）

表2 两种2019-nCOV 抗体检测试剂盒对新冠诊断的效果评价(%)

3 讨论

自新冠疫情爆发至今，全球已累计确诊新冠肺炎病例4.3 亿人，累计死亡病例约590 万例。全球单日新增确诊病例更是高达159 万例，新增死亡病例近万例。然而，最新的突变株Omicron 毒株已在全球190 多个国家流行，部分国家的感染率以突破70%，美国目前Omicron 的感染率已经接近83%，突破免疫能力强大的Omicron 正在迅速引领全球新一波疫情[5]。尽管最新的研究显示[6]，Omicron的毒力较此前的Delta 毒株毒力显著减弱。2022年2月1 日，Nature 连续刊发了3 篇Omicron 的研究论文，均表明Omicron 病毒对肺以及部分脏器的损害明显减轻。剑桥大学著名COVID-19 和HIV专家Gupta 研究证明[7]，与Delta 相比，Omicron 具有更高的亲和力，并且抗原性发生了显著变化，从而产生了显著的免疫逃逸。但是第三剂mRNA 疫苗接种可以抵抗Omicron 的免疫逃逸；而且抗病毒药物如Remdesivir 和Molnupiravir 依然对病毒明显抑制效果。中国香港大学的研究人员得出了与Gupta 实验室研究类似的结论，他们研究发现[8]，相比其他新冠突变株，Omicron 在支气管中的复制速度更快，但在肺实质中的复制效率较低。日本北海道大学Sato 实验室则报道称[9]，Omicron 细胞融合能力低于Delta 和原始野生型，另外Omicron S 蛋白的切割效率较低。他们在仓鼠模型中，与Delta和原始野生型毒株相比，Omicron 显示出肺炎减轻，致病力降低。但诸多研究数据表明[10]，部分罹患新冠病毒的病患在康复后的很长一段时间里会持续存在着不同程度的后遗症，有47%的康复者存在胸闷症状，14%的康复者出现反射性咳嗽症状，有2%的严重并发症患者更是存在肺纤维化的现象。由此可见，尽管该病毒的变异株毒力在减弱，但传播力和破坏力并未改变。因此，严密的防疫措施和积极注射疫苗，仍是我们国家较长一段时间的主要防疫手段。

目前，中国疫苗接种总人数已达12.67 亿，其中完成全程接种（2 针剂）12.31 亿人；加强免疫接种（3 针剂）人数5.02 亿，占总人口比例35.6%，与英国已完成加强针比例55.3%相比，还有一定距离。特别是在60 岁以上人群，中国接种率较低，12 个省份接种率≤80%，目前60 岁以上人群不足30%进行了加强免疫[11]。国家相关部门对疾控接种系统进行了培训，将在目标人群中开始异源接种，即序贯接种。国家对未来新冠病毒疫苗加强免疫接种提出了新的相关要求，新冠病毒疫苗接种工作继续推进基础免疫和加强免疫。加强免疫方案有两种：一是同源加强免疫接种，一是异源加强免疫接种(也称“序贯加强免疫”)。所谓同源加强免疫，指加强免疫采用与基础免疫同一技术路线的疫苗进行接种，目前阶段国内实施灭活+灭活疫苗加强或腺病毒载体+腺病毒载体疫苗。所谓序贯加强免疫接种，是指接种与之前疫苗技术不同的疫苗，目前阶段国内可实施灭活+重组蛋白疫苗或灭活+腺病毒载体疫苗。现有数据显示，同源加强免疫接种和灭活疫苗-重组蛋白疫苗和灭活疫苗-腺病毒载体疫苗等序贯加强接种组合，均可以大幅提高受种者中和抗体水平，也具有较好的安全性。中国有必要推进不同技术路线疫苗的序贯免疫，通过异源序贯免疫策略，优化现有疫苗的组合和效力。由张文宏教授率领研究团队在《新生微生物与感染》刊发的一篇关于序贯接种对Omicron 效果的研究。该团队利用已接种两针灭活疫苗的基础，进行同源加强和异源加强(序贯接种)的第三针，结果发现，在灭活疫苗同源第3 针加强接种14天之后，其血清中对疫苗原始野生株、Delta 株以及Omicron 株的中和抗体滴度分别提升到285.6、250.8 和48.73。倘若采用重组亚单位蛋白疫苗异源第3 针进行加强接种2 周之后，血清中对原始野生株、Delta 株以及Omicron 株的中和抗体滴度分别提升到1436、1501 和95.86。这组数据提示，同源加强还是异源加强，都对变异株都有效，而且异源加强的效果更好。早在2021年8月8 日，国家药监局相关研究人员就发表过此类研究结果[12]，得出用异源疫苗加强免疫能有效提高灭活新冠疫苗的保护性免疫反应，由此可见，异源接种可以进一步提高对人体的保护。

众所周知，病毒核酸检测是诊断新冠肺炎的主要依据，但受多种因素的影响（包括机体病毒载量，实验室条件，检测试剂质量，标本类型与质量，以及检测者因素等），存在假阴性结果可能，且核酸检测耗时一般较长[13]。一般情况下[14]，在感染或接种疫苗早期IgM 抗体会出现，在感染和接种疫苗的中晚期IgG 抗体才会出现，且滴度会持续增高，并在血液中长期存在。因此，新冠病毒IgG 和IgM 抗体检测有助于对患者的感染状况及疫苗保护力做出快速判断，同时也有助于核酸检测结果阴性但具有临床表现和影像学检查表现的疑似患者的诊断有很大帮助。本研究正是基于此，对当前我国居民的新冠疫苗接种后，不同针剂接种次数的人群抗体滴度做出研究和数据分析。最终证实2019-nCOV 抗体检测快速、简单易操作、特异度高，应作为新冠的快速筛查重要指标；国产珠海丽珠和唐山英诺特的检测试剂盒的特异度和正确率均较好，出现阳性结果时应用另一种试剂盒进行复测，可减少通报临床的假阳性率；另外，新冠抗体阳性报告的应用与分析应结合本区域内的流行状况及临床症状做出综合判断。