胃癌组织中LINC00152、UBE2Q1 的表达及意义

叶雅丽，阮荣华，蔡莎莎，段达荣，符竣惠

（台州市第一人民医院检验科1，普外科2，浙江 台州 318020）

胃癌（gastric cancer）是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和致死率较高，严重影响患者生命安全。目前胃癌诊断主要依据临床症状、胃镜、病理切片、影像学诊断以及CA199 等肿瘤标志物，但胃癌发病初期，并无明显症状，且已知的肿瘤标志物敏感度和特异度均不能满足临床需求，容易漏诊和误诊。胃镜为侵入性操作，病理取材为有创性操作，患者难以接受，同时患者出现影像学改变时往往已发展为中晚期阶段[1，2]，而中晚期胃癌手术难度高，放化疗等治疗手段疗效有限，且治疗费用高，患者耐受性差。因此早期诊断、及时治疗是延长患者生存时间、降低治疗费用、提高生存质量的关键。但目前尚无有效、无创的胃癌早期筛查诊断方法。本研究主要探讨长链非编码RNA LINC00152、泛素接合酶E2Q1（ubiqutin-conjugating enzyme E2Q1，UBE2Q1）在胃癌组织中的表达及意义，以期为胃癌肿瘤标志物的挖掘提供基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2017 年1 月-2021 年3 月台州市第一人民医院收治的79 例首次诊断为胃癌患者的癌组织和远端癌旁组织，所有患者术前均未进行放化疗等任何治疗，已排除合并其他肿瘤、术后病理确认为原发性胃癌者。本研究经医院医学伦理委员会批准，所获得的样本均经过患者及家属知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 组织标本取材与保存 手术切除胃癌组织，取胃癌组织和距离癌组织距离大于5 cm 的远端癌旁组织，切成小块,置于无氮样品保存液中，-80 ℃冻存。

1.2.2 实时荧光定量PCR 检测LINC00152、UBE2Q1表达 取出-80 ℃保存的组织标本，解冻后装入无RNA 酶的EP 管，加入1 ml Trizol 试剂，匀浆，提取总RNA。8 μl 总RNA，加2 μl 逆转录酶，配成10 μl体系，逆转录为cDNA，逆转录条件为：37 ℃15 min（逆转录），98 ℃5 min（酶失活），12 ℃0.5 min（保温）。以逆转录所得的cDNA 为模板，设计引物（表1），以GAPDH 为内参，在美国ABI Step One Plus Real Time PCR System 上检测各样本中LINC00152、UBE2Q1 的水平，相对表达水平用2-△△Ct表示，△Ct=（Ct目的基因-CtGAPDH）。Trizol 试剂、反转录试剂盒、SYBR Green 荧光定量PCR 试剂盒均购自日本TaKaRa 公司。

表1 引物序列

1.3 观察指标 比较胃癌组织和癌旁组织中LINC00152、UBE2Q1 表达，并分析LINC00152、UBE2Q1 表达与胃癌患者临床病理因素间的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0 统计学软件对数据进行分析，非正态分布的计量资料以[M（P25，P75）]表示，组间比较采用Mann-WhitneyU检验，多组比较采用Kruskal-Wallis 检验；计数资料以（n）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织和癌旁组织中LINC00152、UBE2Q1 表达比较 胃癌组织中LINC00152、UBE2Q1 表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 胃癌组织和癌旁组织中LINC00152、UBE2Q1 表达比较[M（P25，P75）]

2.2 LINC00152、UBE2Q1 的表达水平与胃癌患者临床病理因素间的关系 LINC00152 表达与分化程度有关，UBE2Q1 表达与TNM 分期、转移有关（P＜0.05），见表3。

表3 LINC00152、UBE2Q1 的表达水平与胃癌患者临床病理因素间的关系[M（P25，P75）]

3 讨论

LINC00152 位于染色体2p11.2 上，是一种含有828 个核苷酸分子的长链非编码RNA，在多种人类肿瘤中，特别是消化系统恶性肿瘤中高度表达[3]。研究表明[4-6]，LINC00152 通过调控肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡，从而促进肿瘤的发生发展。此外，LINC00152 可通过影响PI3K/AKT、mTOR、NOTCH1等各种信号通路参与多种癌症的发生，包括肝癌、胆囊癌、结肠癌等[7]。

何美玲等[8]的研究发现，LINC00152 可通过调控vimentin 和N-cadherin 蛋白的表达，促进胰腺癌细胞（MIAPaCa-2）的侵袭和迁移能力。唐世磊等[9]研究表明，LINC00152 在肝癌中异常高表达，高表达与肿瘤TNM 分期呈正相关（P＜0.05），且高表达患者的无病生存时间、总生存期均明显低于低表达者（P＜0.05）。高希春等[10]通过RT-qPCR 方法检测了24 例胃癌患者癌组织和癌旁组织中LINC00152 的表达，结果发现胃癌组织中LINC00152 的表达水平与癌旁组织相比呈显著高表达（P＜0.01），且LINC00152的表达水平与胃癌临床病理分期呈正相关（P＜0.05）。Huang Y 等[11]从组织水平、细胞水平和动物模型方面研究了LINC00152 对胃癌增殖的影响，结果表明LINC00152 在胃癌组织中的表达水平明显高于邻近正常组织；LINC00152 下调后，胃癌细胞的增殖明显受到抑制；构建裸鼠异种移植模型，进一步证实了LINC00152 促肿瘤增殖作用。本研究采用RTqPCR 方法检测了79 例胃癌患者癌组织和癌旁组织中LINC00152 的差异表达，结果发现胃癌组织中LINC00152表达高于癌旁组织（P＜0.05），且LINC00152 的表达水平与分化程度有关（P＜0.05），与既往研究结果相符[12-14]，提示LINC00152 在胃癌早期筛查诊断中具有一定临床价值。

UBE2Q1 是一种泛素接合酶，定位于人1 号染色体长臂21 位点，编码泛素接合酶E2蛋白，E2能促进活化泛素从泛素失活酶（E1）转移到泛素连接酶（E3），从而影响下游基因，调节细胞生物学行为，在肿瘤中发挥作用[15，16]。UBE2Q1 已被证实在各种类型的癌症中过度表达，参与肝癌、卵巢癌、结直肠癌等恶性肿瘤的发展和进展，有望成为临床上潜在的生物标志物和分子治疗靶点[17，18]。常仁安[19]研究发现，UBE2Q1 在肝癌组织中的表达高于癌旁组织，且其高表达与肝癌组织学分级有关（P＜0.001）；UBE2Q1在肝癌中的高表达与患者总生存率的降低呈明显正相关，是肝癌患者预后的独立指标；此外，细胞实验发现，抑制UBE2Q1 的表达可以引起肝癌细胞增殖水平下降以及细胞周期的停滞。Topno R 等[20]研究表明，UBE2Q1 是高级别浆液性卵巢癌患者的潜在的预后指标，UBE2Q1 的高表达提示较低的无复发生存率和对铂/紫杉烷治疗的反应结果较差。本研究采用RT-qPCR 方法检测了79 例胃癌患者癌组织和癌旁组织中UBE2Q1 的差异表达，结果发现胃癌组织中UBE2Q1 表达高于癌旁组织（P＜0.05），且TNM分期Ⅲ/Ⅳ期患者的UBE2Q1 mRNA 表达水平高于Ⅰ/Ⅱ期，发生转移患者的UBE2Q1 mRNA 表达水平高于未转移患者（P＜0.05），表明UBE2Q1 的表达水平与TNM 分期、转移有关。

综上所述，LINC00152 和UBE2Q1 在胃癌组织中高表达，有望成为胃癌诊断的生物标志物和肿瘤治疗的靶点，但其作用于胃癌的分子机制尚不明确，有待进一步研究。