钩藤碱对肾性高血压大鼠血管紧张素、醛固酮及降钙素基因相关肽的影响

王 舸，李 倩

高血压是临床上以血压升高为主要表现的一种系统性疾病，发病原因较为复杂，可继发心、脑、血管以及多系统、多器官损害[1]。常见的继发性高血压主要有肾性高血压和肾动脉狭窄性高血压两种。肾脏是高血压损害的主要靶器官又是导致顽固性高血压的主要病因，肾血管硬化或肾动脉狭窄可使肾脏血流相对不足，导致肾脏入球小动脉的颗粒细胞分泌肾素增加，进一步激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)，引起血管收缩，水钠潴留，导致血压升高[2]，而血压的持续升高又可加强肾动脉硬化从而加重肾脏损害。目前，临床上治疗高血压的药物主要有利尿剂、钙离子通道阻断剂、β受体阻断剂、血管转化酶抑制剂等，这些药物可快速、有效地降低血压，但常需联合应用，不仅花费较高且不良反应也较多。中医药可有效平稳地控制血压且不良反应较小。钩藤碱药理成分主要是钩藤碱，其功效为息风止痉、清热平肝，临床上主要用于治疗高血压等心脑血管疾病。本研究探讨钩藤碱对肾性高血压大鼠模型的作用机制，以期为钩藤碱的现代药理学研究及肾性高血压的中西医结合治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取无特定病原体(SPF)级SD大鼠60只，雌雄各半，体质量(200±20)g。实验动物购于新疆医科大学实验动物中心，生产许可证号：SCXK(新)2018-0001，实验动物合格证号：SCXK 20090002。

1.2 仪器与设备 Power Lab数据采集系统(购自澳大利亚AD公司)、恒温器官灌流系统(成都仪器厂生产)、-80 ℃ 型低温冰箱(购自美国Thermo公司)、LEGEND X1R型低温离心机(购自美国Thermo公司)、EPS300型电泳仪(购自上海天能科技有限公司)、Power Wave XS2型酶标仪(购自美国Bio Tek公司)、无创鼠尾动脉血压测量仪(购自美国哈佛仪器公司)。血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、降钙素基因相关肽(CGRP)放射免疫试剂盒均购自北京索莱宝公司。

1.3 实验方法

1.3.1 建立肾性高血压大鼠模型[3]3%的戊巴比妥钠腹腔注射，乙醇液消毒腹部切口处皮肤，在左侧季肋区下约2 cm处，用玻璃棒在距离大鼠脊柱约1 cm处分离左肾动脉，缝合切口处皮肤时结扎左肾动脉。为预防感染，缝合后腹腔注射青霉素。建模后第4周测量大鼠尾动脉压，若尾动脉压高于160 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)提示动物模型建立成功。

1.3.2 钩藤碱的提取[4]80 ℃下用80%乙醇溶液提取钩藤2 h，乙酸乙酯溶液分离提取物后，用聚酰胺树脂吸附分离出钩藤碱。

1.3.3 给药方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组，每组10只。除空白组外，其余5组均建立肾性高血压模型。卡托普利组给予40 mg/kg卡托普利灌胃；钩藤碱高、中、低浓度组分别给予钩藤碱400 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg灌胃；空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃，每日1次，连续灌胃6周。

1.4 观察指标 在造模前、造模成功后4周、末次给药(6周)2 h后测量大鼠尾动脉压；处死大鼠，迅速分离心脏以及双肾，清理表面脂肪、结缔组织及血管，用4 ℃的氯化钠溶液冲洗后天平称取左右肾重量；分离血浆，采用放射免疫法测定大鼠血浆AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP含量；切除大鼠胸主动脉组织，离心匀浆后检测AngⅡ含量。

2 结 果

2.1 各组大鼠血压比较 与空白组比较，模型组造模后4周、给药6周后尾动脉压明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后4周，模型组、卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组血压均较造模前高，差异均有统计学意义(P<0.05)。给药6周后，卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组血压均较造模后4周低，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 各组大鼠尾动脉压比较(±s) 单位：mmHg

2.2 各组血浆AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP含量比较 与空白组比较，模型组大鼠血浆AngⅠ、AngⅡ、ALD及 CGRP含量明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组大鼠血浆AngⅡ、ALD含量明显下降，AngⅠ、CGRP含量明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 各组对肾性高血压大鼠血浆Ang Ⅰ、AngⅡ、ALD、CGRP含量比较(±s)

2.3 各组大鼠主动脉组织中AngⅡ含量比较 与空白组比较，模型组大鼠主动脉组织AngⅡ含量明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组大鼠主动脉组织AngⅡ含量明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 各组大鼠主动脉组织中AngⅡ含量比较(±s) 单位：ng/L

2.4 各组左肾、右肾质量比较 与空白组比较，模型组大鼠左肾质量、左右肾质量比值明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组大鼠左肾质量、左右肾质量比值明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

表4 各组大鼠左右肾质量比较(±s)

3 讨 论

肾性高血压是由单侧或双侧肾动脉主干或分支狭窄，导致肾血流量减少，从而引起肾缺血所致的高血压，是继发性高血压的常见原因之一[5]。约90%的肾实质性高血压是由肾血管硬化所致，肾性高血压的临床表现及进展较原发性高血压重[6]。研究显示，舒张肾的动脉系统，可改善肾内血流，是防治肾性高血压的主要措施[7]。降低病人血压水平可明显降低心脑血管疾病的发生率、改善生活质量，虽然降压药可有效控制血压，但其应用范围有限且常伴发不良反应，所以，寻找稳定、安全的降压药物及方式至关重要，一些西方国家也纷纷开始采用替代医学的方法进行血压的控制[8]。中医药作为传统的治疗手段可有效降低病人血压、明显改善病人的临床症状，具有多靶点、多途径的特点，并能从整体调节机体代谢紊乱的状态，已经成为治疗高血压疾病的重要手段[9]。钩藤是茜草科钩藤属藤本植物，其茎较细，叶为椭圆形，为头状花序[10]。在明代李时珍的《本草纲目》中就已经有钩藤主“大人头旋目眩，平肝风，除心热”的记载，认为“钩藤，手足厥阴药也，足厥阴主风，手厥阴主火，惊痫眩晕，皆肝风相火之病，钩藤通心包于肝木，风静火熄，则诸症自除。”临床上常用钩藤治疗肝肾阴虚所致的肝阳上亢，而取其清热平肝之功效[10]。《本草新编》：“钩藤，去风甚速，有风症者必宜用之”，《黄帝内经》：“诸风掉眩皆属于肝”“诸暴强直皆属于风”，可见钩藤可用于治疗肝风内动的眩晕之症。在现代药理学中，可从钩藤中分离出三萜皂苷类、黄酮类以及生物碱类，而生物碱类物质是钩藤中含量最多且主要的活性成分，钩藤的茎中含有许多吲哚类生物碱，而其中就包括钩藤碱、钩藤总碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱、异钩藤碱[10]。研究显示，钩藤降压的主要有效成分也是其生物碱中的钩藤碱和异钩藤碱，而钩藤的降压作用主要取决于钩藤中的生物碱成分[11-13]。

RAAS系统在失去平衡以后，血管紧张素原(由肝脏产生)被大量释放至外周血中，进一步导致肾素水解为AngⅠ，AngⅠ在肺循环中血管紧张素转酶(ACE)的还原下进一步转化为AngⅡ，故外周血中AngⅡ含量会随着ACE的不断还原而增加，这时肾动脉血管平滑肌不断收缩，导致外周阻力加大，同时反应性刺激肾上腺皮质功能亢进，肾上腺束状带分泌ALD不断增加，而ALD具有保钠排钾作用，这时肾远曲小管对钠离子的重吸收不断增加，进一步导致体内水钠潴留，从而引起机体血压升高[14]。AngⅡ不仅通过收缩血管导致血压升高，还可通过炎症反应及氧化应激导致高血压的发生，同时AngⅡ可产生一氧化氮诱导炎症反应和导致内皮功能异常，而炎症与内皮功能异常又是血管动脉粥样硬化以及心血管疾病的主要危险因素[15]。AngⅡ是RAAS系统中的重要环节，可使小动脉平滑肌收缩以及外周阻力增多，交感神经兴奋促进肾上腺皮质分泌醛固酮分泌导致水钠潴留。AngⅡ是肾素系统中生物学活性较强的物质，可通过血管收缩以及损伤血管内皮引起血管狭窄，出现外周阻力升高导致血压升高[16]。ALD的合成和分泌主要是受AngⅡ以及促肾上腺皮质激素的调节，同时ALD不仅由肾上腺合成，还能由非经典组织以及细胞合成，而局部组织产生的ALD一般不会引起血液中ALD的浓度发生改变，且ALD的浓度还和生物钟有关，表现出昼夜节律变化[17]。

CGRP是辣椒素敏感感觉神经的重点递质之一，由37个氨基酸组成，有a2CGRP及b2CGRP两种亚型，两种亚型对心血管的作用相同，是目前作用能力最强的舒血管物质，且CGRP有CGRP1、CGRP2、CGRP3受体，这3种受体均属于G蛋白耦联受体，其中CGRP1蛋白主要分布在心血管系统，可参与心血管活动的调节[18]。CGRP对循环系统的调节复杂多样，在高血压的进展过程中发挥着十分重要的作用，CGRP的合成与分泌增多对血管的反应性增多是高血压发生的主要机制，而CGRP的合成与释放不足又是高血压疾病发病的重要原则，所以，研究CGRP的合成、释放与调节及药物相互作用对防治高血压具有十分重要的意义[19]。

本研究造模成功后，与空白组比较，模型组大鼠左肾质量、左右肾质量比值明显下降(P<0.05)；与模型组比较，卡托普利组、钩藤碱高浓度组、钩藤碱中浓度组、钩藤碱低浓度组大鼠左肾质量、左右肾质量比值明显增加(P<0.05)，说明治疗后左肾出现萎缩、右肾代偿增大。在正常的血浆浓度下AngⅠ一般并无生理作用，仅仅作为转换酶的底物，所以通常情况下AngⅠ的含量多少就可决定有效反应生成底物的含量，AngⅠ在ACE催化作用下转化为AngⅡ可发挥作用。卡托普利为血管紧张素转化酶抑制剂，其可有效抑制ACE的活性，使AngⅠ不能向AngⅡ转化，血浆中剩余的AngⅠ含量增多，本研究结果显示，钩藤碱组中的AngⅠ与模型组比较增多，而AngⅡ的含量比模型组减少，考虑可能是钩藤碱可以通过ACE酶使AngⅠ向AngⅡ转化失败，使血管平滑肌收缩能力变小进一步导致血压下降，ADL含量主要与体内AngⅡ、促肾上腺皮质激素的含量以及受体内钠、钾两种离子的调节有关，所以AngⅡ含量下降势必导致ALD含量也随之下降，本研究结果中卡托普利组、钩藤碱各浓度组ALD含量均较模型组下降。CGRP是一种具有舒血管因子可使肾血管舒张以及外周阻力下降导致血压的降低，本研究结果显示，钩藤碱各浓度组可提高血浆CGRP含量，舒张血管平滑肌，降低血压。