清解败毒颗粒镇咳、祛痰、平喘和抗炎的药效学试验

景慕娴 ， 李连缺 ， 王志玲 ， 张宝元 ， 刘 明 ， 孟志敏

(1.石家庄江山动物药业有限公司 ， 河北 石家庄 050200 ； 2.河北省口服兽药制剂技术创新中心 ， 河北 石家庄 050200 ; 3.河北工程大学生命科学与食品工程学院 ， 河北 邯郸 056000 ； 4.石家庄市牧工商开发总公司 ， 河北 石家庄 050000)

新兽药制剂清解败毒颗粒由麻黄、枇杷叶、苦杏仁、黄芩、柴胡、石膏、甘草等组成。此方源于《伤寒论》的名方麻杏石甘汤，具有清热、宣肺、平喘的作用，对肺热咳喘的疗效显著[1-2]。为进一步研发和申报新药，推广清解败毒颗粒的临床使用，根据国家3类新兽药要求，对其主要药效学进行试验研究。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 清解败毒颗粒(批号20181026，规格：每1 g相当于原生药1 g，100 g/袋)，购自石家庄江山动物药业有限公司；麻杏石甘散(批号20180323)，购自河北新世纪药业有限公司；复方甘草浙贝氯化铵片，购自浙江康恩贝制药股份有限公司；氨水、二甲苯，均购自天津市科密欧化学试剂有限公司；酚红，购自天津市风帆化学试剂科技有限公司；氨茶碱片，购自天津力生制药股份有限公司；磷酸组织胺、氯化乙酰胆碱，均购自上海三思试剂有限公司；醋酸地塞米松片，购自浙江仙琚制药股份有限公司。

1.2 仪器 小动物雾化给药仪，购自江苏赛昂斯生物科技有限公司；酶标仪，购自Bio-Rad公司；引喘仪，购自江苏赛昂斯生物科技有限公司；电子天平，购自赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。

1.3 动物 SPF级昆明小鼠，18～22 g，雌雄各半；SPF级豚鼠，雄性，体重150～200 g，均购自北京华阜康生物科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 镇咳作用 釆用氨水诱咳法[3]。取小鼠120只，雌雄各半，随机平均分为6组：清解败毒颗粒高、中、低剂量组[16.20、8.10、4.05 g/(kg·bw)，相当于原生药的6.0、3.0、1.5倍]；麻杏石甘散组[8.10 g/(kg·bw)，相当于原生药的3倍]；复方甘草浙贝氯化铵片组[115.71 mg/(kg·bw)，相当于人用剂量的9倍]; 造模组(纯化水)。小鼠灌胃给药，1 次/d，连续给药7 d，于末次给药后1 h，将小鼠逐个放入5 L的干燥器内，用超声雾化器向内喷入25%氨水溶液15 s，立即开始记录小鼠的咳嗽潜伏期和3 min内咳嗽次数。

1.4.2 祛痰作用 采用气管段酚红排泄法[3]。精密称取酚红适量，用5%碳酸氢钠溶液配置成不同浓度溶液，用酶标仪测定OD值，绘制标准曲线并计算出回归方程。取小鼠120只，雌雄各半，随机平均分为6组，组别及剂量同1.4.1。小鼠灌胃给药，1次/d，连续给药7 d，末次给药后1 h，腹腔注射5%酚红生理盐水溶液0.2 mL/(10 g·bw)，30 min后将小鼠脱颈处死，仰位固定于手术板上，剪开颈部皮肤，分离气管，取自甲状软骨处至气管分叉处的气管段，将气管段放入1.5 mL 5%的碳酸氢钠溶液中，充分振摇，静置1 h，于酶标仪546 nm处测定OD值，根据回归方程计算酚红含量。

1.4.3 平喘作用 采用组胺引喘法[3]。取豚鼠60只，雌雄各半，随机平均分为6组：清解败毒颗粒高、中、低剂量组[1.62、3.24、6.48 g/(kg·bw)，相当于原生药的0.6、1.2、2.4倍]；麻杏石甘散组[3.24 g/(kg·bw)，相当于原生药的1.2倍]；氨茶碱片组[21.43 mg/(kg·bw)，相当于人用量的5倍]；造模组(纯化水)。豚鼠灌胃给药，1次/d，连续给药3 d，末次给药后1 h，按相同剂量再次给药，30 min后将豚鼠至于连接有超声波雾化器的倒置5 L干燥器内，持续喷雾2%氯化乙酰胆碱(Ach)和1%磷酸组胺等体积混合液15 s，观察豚鼠的哮喘反应，以5 min内豚鼠跌倒翻滚开始，记录引喘潜伏期，超过5 min以300 s计算，记录豚鼠的平喘潜伏期。

1.4.4 抗炎作用 采用小鼠二甲苯耳肿胀法[4]。取小鼠60只，雌雄各半，随机平均分为6组：清解败毒颗粒高、中、低剂量组(剂量同1.4.1)；麻杏石甘散组(剂量同1.4.1)；醋酸地塞米松片组[0.19 mg/(kg·bw)，相当于人用量的9倍]；造模组(纯化水)。小鼠灌胃给药，1次/d，连续给药7 d，末次给药30 min后，小鼠右耳前后均匀涂抹致炎剂二甲苯(20 μL/只)致炎，30 min后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径6 mm的打孔器打下双耳同一部位耳片，用分析天平称质量，两耳质量之差即为肿胀度(mg)，并计算肿胀抑制率(%)。肿胀抑制率/%=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100%。

2 结果

2.1 镇咳作用 结果如表1所示，与造模组比较，复方甘草浙贝氯化铵片组、麻杏石甘散组及清解败毒颗粒高、中、低剂量组可明显延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数(P<0.01或P<0.05)；与复方甘草浙贝氯化铵片组比较，清解败毒颗粒各组小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数无显著差异(P>0.05)；与麻杏石甘散组比较，清解败毒颗粒各组小鼠咳嗽潜伏期明显变短、咳嗽次数明显减少(P<0.05)。

表1 清解败毒颗粒对氨水引咳小鼠的影响

2.2 祛痰作用 酚红的标准曲线相关性良好，回归方程为Y=0.029 7X+0.039 6，R2=0.998 8。同造模组相比，复方甘草浙贝氯化铵片组、麻杏石甘散组及清解败毒颗粒高、中、低剂量组小鼠气管酚红的排泄量显著增加(P<0.01或P<0.05)；与复方甘草浙贝氯化铵片组比较，清解败毒颗粒低剂量组及麻杏石甘散组排泄量明显变少(P<0.05)，高、中剂量组效果无显著差异(P>0.05)；与麻杏石甘散组比较，高、中剂量组排泄量明显增加(P<0.05)，低剂量组无显著差异(P>0.05)，结果见表2。

表2 清解败毒颗粒对小鼠气管酚红排泌量的影响

2.3 平喘作用 与造模组比较，氨茶碱片组、麻杏石甘散组及清解败毒颗粒高、中、低剂量组豚鼠的引咳潜伏期显著延长(P<0.01)；与氨茶碱片组或麻杏石甘散组比较，清解败毒颗粒各组的引咳潜伏期无显著差异(P>0.05)，结果见表3。

表3 清解败毒颗粒对豚鼠引喘潜伏期的影响

2.4 抗炎作用 与造模组比较，醋酸地塞米松片组、麻杏石甘散组及清解败毒颗粒高、中、低剂量组可显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀度(P<0.01或P<0.05)；清解败毒颗粒各组的抗炎效果与醋酸地塞米松片组比较无显著差异(P>0.05)，与麻杏石甘散组比较差异显著(P<0.05)。清解败毒颗粒低、中、高剂量组的抑制率分别为24.80%、49.21%、72.44%，即随剂量的增加抑制率增高，但均高于麻杏石甘散组(20.08%)，其中高剂量组肿胀抑制率略高于醋酸地塞米松片组(64.96%)，见表4。

表4 清解败毒颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

3 讨论

肺热咳喘是家禽养殖中一种常见的呼吸道疾病，临床表现为高热、咳嗽、喘鸣、呼吸困难等，常因气管水肿使气道狭窄，被炎性渗出物堵塞而导致窒息死亡，造成更为严重的损失。目前，西医主要采用对症治疗，配以抗生素，但无法根治，且长期反复使用抗生素易产生耐药性，使得病情反复发生；而中兽医治疗肺热咳喘，崇尚标本兼治，整体调节，见效快，不良反应少，是一种十分有效和可行的途径[5-7]。

清解败毒颗粒为复方制剂，该处方是在麻杏石甘散的基础上研究多年而成的加减方[8-10]。处方由麻黄、石膏、黄芩等七味药组成，具有清热化痰、止咳、平喘之功效。方中麻黄辛散苦泄、宣肺平喘、利水消肿，石膏清热泻火、生津止渴，两者配伍，清解肺热而不凉遏，又是相制为用，共为君药[11]；苦杏仁降利肺气而平喘，枇杷叶降逆化痰而止咳[12]，两者协同麻黄以平喘化痰止咳，为臣药；柴胡清解寒邪、疏解气机，配以黄芩清泄郁热、解表泄热，两者共为佐药而作向导借以牵制麻黄辛温之性而转为辛凉清热之用[13]；甘草补脾益气、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药，为使药；全方配伍，有散有清，有宣有降，对表邪(风热、风寒均可)化热犯肺，无论有汗无汗，均可应用[14]。

本试验表明，清解败毒颗粒可显著延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数，增加小鼠气管酚红排泄量，延长豚鼠的引咳潜伏期，对二甲苯致小鼠的耳肿胀具有抑制作用。尤其在延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数和增加小鼠气管酚红的排泄量方面，效果优于基础方麻杏石甘散。综上所述，清解败毒颗粒具有良好的镇咳、祛痰、平喘及抗炎作用。