药物检验分析中应用超高效液相色谱法的研究

罗鸣

（江西省吉安市食品药品检验检测中心，吉安 343000）

临床在进行药物、食品检测时，常用超高效液相色谱法实施检测， 其属于一种化学成分分离技术，应用原理与高效液相色谱法一致，能够快速检测小颗粒物质，分离速度快、自动化程度高，且适用范围较广[1]。 当前在进行药物检验分析时，相比高效液相色谱法， 超高效液相色谱法具有更加突出的优势， 不仅可以将药物中的复杂成分进行有效分析，且检验分离速度快，使用较为广泛[2]。

1 仪器与方法

1.1 仪器选取 使用超高效液相色谱仪， 选取48片三七伤药片（生产厂家：山西和丰大来制药有限公司；国药准字：Z20003048），随机分为对照组与研究组，各24 例。

1.2 方法 随机择48 片三七伤药片，实施检测。 对照组：高效液相色谱法检测。 将药片进行研磨，直到其呈现粉末状，将药粉置入量瓶中，增加流动溶解，进行稀释与滤过后，放置紫外线中扫描（200～400 nm），其中末端吸收210 nm，对波长进行检测。随后吸取20 μL 稀释液注入液相色谱仪， 并且记录以及观察色谱图。 研究组：超高效液相色谱法检测。 将药片进行研磨，直到其呈现粉末状，随后增加流动溶解，进行稀释以及过滤后，在超高效液相色谱法仪中注入20 μL 稀释液， 对色谱图进行观察与记录。

1.3 观察指标 分析两组药物检验分析时间以及彻底分离率。

1.4 统计学分析 以SPSS 19.0 软件分析资料。 χ2检验计数资料，t 检验计量资料。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分析时间对比 对比分析时间， 研究组更短，P＜0.05，见表1。

表1 分析时间（±s，min）

表1 分析时间（±s，min）

组别 例数 分析时间研究组对照组t 值P 值24 24 2.41±0.11 15.34±1.47 42.971＜0.001

2.2 彻底分离率 对比彻底分离率， 研究组更高，P＜0.05。 见表2。

表2 彻底分离率（n，%）

3 讨论

3.1 药物检验相关概述 在实施药物检验时，部分样品由于含量比较少，因此分离时难度大，时间长，结果不理想。因此当前临床需要一种分析速度快且分离效率高的方式，而超高效液相色谱法则可以满足上述条件。 超高效液相色谱法具有灵敏度、精确度高的优势，因此在临床进行药物检验中使用较为广泛。 由于超高效液相色谱法分辨率、自动化程度高，检测速度快，所以在实施检测后，能够有效分辨出假冒伪劣药物，提高用药的安全性。 在进行药物分析时，相比高效液相色谱法，使用超高效液相色谱法分离能力更高，可以在较快的流速、线速以及反压下实施分离，结果较为优异。 因此现阶段临床在对原料药、成药、中间体各组分以及杂质含量检测时，常选择使用超高效液相色谱法，具有快速、准确且高效的优势[3]。

超高效液相色谱是由细粒径填料和细内径柱子而获得的高效液相色谱技术， 对色谱柱性能产生影响的主要因素是固定相的颗粒度。 颗粒度越小其色谱柱的效率越高， 颗粒度的降低能够提升色谱柱的效率， 同时还能提高分析的灵敏度和速度。 为了能够显著提升分离速度和分离效率，则需要在超高效液相色谱的色谱技术上进行改进，需要创新的技术有4 点：（1）使用杂化颗粒技术来合成新型色谱填料。 新型的全多孔球形反相固定相色谱填料的粒径大小为17 μm，同时在填料技术上也进行改进，制备高效率的色谱柱。 （2）制造超高效液相色谱输液泵。 如装填的色谱柱较长，为提升柱效的流速，应先将其柱压进行准确计算，再使用输液泵将溶剂进行直接传送。 （3）超高效液相色谱高速检测器。 当色谱峰通过检测器时，一般会有一个非常小和非常高的时间常数， 这样可以帮助检测器在整个色谱峰内扑捉到更多的数据点， 能够获得准确的保留时间和峰面积。 （4）自动进样器。进样系统是超高效液相色谱非常关键的因素，在超高效液相色谱中确保极端高压力波动的影响，所以进样时体积要尽量减小， 这样才能加快进样周期的同时还能实现进样的高速度。

3.2 超高效液相色谱法的应用现状

3.2.1 应用于药品分析 在药品检验分析中， 样品分离难度高、 分析时间长一直是药品检验分析的弊端。 而应用超高效液相色谱法进行药品检验分析，可弥补上述弊端，提高药品检测的灵敏度和药品分析准确性。 如，在测定人凝血因子VII 中枸橼酸离子含量的试验中， 应用超高效液相色谱法进行测定的效果良好。 采用氢氧化钠溶液（20 mmol/L）作为流动相，离子交换柱为4 mm × 250 mm，等度洗脱时长20 min， 测定枸橼酸离子的浓度范围在0.1～2.0 μg/mL 之间，该浓度与对照品色谱峰呈线性关系，回收率为98.4%[4]。 如在3-羟基地氯雷他定和地氯雷他定的测定时， 实验证明应用超高效液相色谱法进行测定无任何误差。 除此之外，超高效液相色谱法还被成功应用于松乳剂、 曲安西隆乳剂等合成药物，以及中间体、副产物的检验分析中，提高了检测分析结果的准确性。

3.2.2 应用于药物代谢动力学 目前， 在医药学领域中， 针对药物代谢动力学方面的研究主要集中在以下几个方面：药物在体内的分布情况、药物在人体内的吸收、代谢和排泄。 研究内容包括药物分析测定、 药物代谢和基质分离、 代谢物定量分析等。 相关研究结果表明，超高效液相色谱法在药物代谢产物检测中的分离效率较高，不仅如此，超高效液相色谱法还能对样品进行定量分析。 利用超高效液相色谱法-MS/MS 系统可以测定人体血浆当中的喹那普利和喹那普利拉， 前者的回收率高达85.8%，后者的回收率则可达到62.6%[5]。 超高效液相色谱法检验分析过程的耗时较短， 大约在3 min 左右，便可测定出血清中氯氮平及去甲可待因的含量， 并且还能测定出人体血浆中洛匹那韦和利托那韦的浓度。 综上，在药物代谢动力学的研究中， 应用超高效液相色谱法能够使检测分析结果更加精确。

3.2.3 应用于中药成分分析 生物碱是大部分中药最具活性的成分之一，而在中药成分分析中，超高效液相色谱法的作用十分明显。 通过超高效液相色谱法分析生物碱时， 因硅羟基在固定相表面的残留， 会使化合物色谱峰呈现出拖尾或是展宽的情况， 所以需要在检测分析中加入有机胺类或是离子对试剂等添加剂， 这样能够对固定相表面残留的硅羟基起到有效的屏蔽作用[3]。 但是添加剂的使用，导致残余的硅羟基减少，影响了检测分析结果的准确性。 而采用酸抑制剂，能够达到有效分析的目的，可提高检测灵敏度。

3.2.4 保健食品中非法添加化学药品的检测 随着物质生活不断地提升，肥胖症的人也越来越多，人们也热衷于减肥。 生产商们为了提高减肥效果，非法添加化学药物，常见的有盐酸西布曲明。 该种药物会导致人体心血管系统、 消化系统和神经系统等发生不良反应。 如果减肥保健食品中添加了这类物质，人们长期服用就会对身体造成极大危害。药品检验人员通过超高效液相色谱建立盐酸西布曲明的检测方法， 对市场上的减肥保健食品进行筛查， 发现了不少非法添加的现象， 结果快速准确。 通过超高效液相色谱对减肥保健食品中的违禁成分进行检测， 为食品药品行政监督提供准确可靠的信息，起到了净化食品药品市场，确保人们的食药安全的作用。

3.3 超高效液相色谱法的优势 目前现代色谱技术中， 使用最为广泛以及活跃的一种分析方式便是液相色谱，在生化、药物、环境以及农业等领域中使用较为广泛[6]。 近些年工业以及技术发展速度不断加快，各领域对液相色谱的要求不断提升，要求在短时间内完成对大量样品的分析， 而部分生化样品以及天然产物的分离难度大， 分析时间较长，便对液色相谱技术的分离能力提出更多要求。在该情况下，出现了超高效液相色谱法，属于小颗粒填料液相色谱技术。 作为一种新型的高效液相色谱技术，该项技术的研发成果以及使用，提升液相色谱技术的分离能力，使其进入一个新的高度[7]。当前，临床在使用超高效液相色谱法时，对样片的吸收方便，处理操作简便，检测自动化程度高，具有高灵敏度和分离效率，且检测时间较短，因此在进行药物质量、药剂样品、成分识别微量药物检验等情况下使用广泛[8-9]。 超高效液相色谱法的主要原理是，使用超高压技术，提高色谱柱性能，加快分离检查速度，提升灵敏度，从而使分析样品时间显著减短[10-11]。 超高效液相色谱的主成分自身对照法包括两种方式，一种加矫正因子，一种不加。 前者通过载入矫正因子来矫正杂质的实测峰面积；如果没有杂质对照品就可以使用不加矫正因子的对照检测方法。 总之利用主成分自身对照法能快速准确地对药物中微量杂质进行定量分析， 有广泛的应用前景[12]。

3.4 超高效液相色谱法在药物检验分析中的应用效果 当前我院在实施药物检验分析时，主要选择使用超高效液相色谱法检验， 相较高效液相色谱法，研究结果显示，研究组分析时间、彻底分离率显著较优。 因此不难看出，研究组在采取超高效液相色谱法检验后，临床价值高，能够加快药物检验速度，提高分离率。

对该结论进行原因分析，主要因素如下：当前临床在实施检验时， 超高效液相色谱法具有广泛的使用价值。 其作为一种新型液相色谱技术，将液相色谱的应用范围进行扩大与延伸， 因其具备操作简便、 分析速度快、 灵敏度和分离能力高的优势，扩宽了现代色谱分析的应用前景[9]。 超高效液相色谱法的样本体积较小，对溶剂消耗的量较少，并且药物成分分离速度快， 因此在进行药物体内代谢产物、药物合成、化学成分、定量定性分析等内容方面使用较广，具有重要意义[13]。 目前实施超高效液相色谱法， 可以完成较多复杂的成分减低与分离[10]。 虽在理论上分析，超高效液相色谱法和高效液相色谱法的原理基本一致，但相比而言，超高效液相色谱法提高了色谱峰容量、 分析通量以及灵敏度， 有效将高效液相色谱法的不足之处进行弥补，因此在分离速度、分离效果以及灵敏度方面具有更加显著的优势。 站在适应环境角度分析，超高效液相色谱法具有更高的适应力， 即使在高压以及高速的状态下，也能够完成分离，且质量较佳，站在灵敏度角度分析，超高效液相色谱法使用的为微粒， 可以有效减小颗粒度粒径以及微粒色谱峰，有效缩短样品检测分离时间，对检测的灵敏度进行提高[14]。 站在速度角度分析，使用超高效液相色谱法，其选择的为微粒，可以显著缩短色谱柱长，在保障柱效不变的情况下，能够提升药物分析速度，从而缩短的分析时间，提高分析效率。

综上所述， 实施药物检验分析采取超高效液相色谱法检验临床效果显著。