痰热清注射液联合碳青霉烯类药物对分离自脓毒症患者的多重耐药铜绿假单胞菌的作用分析*

2022-07-04 06:22
中国中医急症 2022年6期
关键词:亚胺美罗培南铜绿

姜 爽 梁 群

(1.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 154000;2.黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江 哈尔滨 154000)

铜绿假单胞菌为一种革兰阴性短杆菌,为院内感染的一种常见致病菌,可引起长期卧床、机械性和呼吸机相关性等呼吸道感染,也可以引起尿路感染、创口感染、导管相关性感染、皮肤组织感染及血流感染等,也是脓毒症患者的主要分离病原菌[1]。近年来,随着临床使用抗菌药物的逐渐增多以及不合理使用,临床中出现的多重耐药铜绿假单胞菌越来越多,给临床抗感染治疗带来巨大的挑战,尤其是对于脓毒症患者,如果不尽快控制感染的进一步发展,患者将面临极大的生命危险。因此寻找有效的抗菌药物在治疗中具有重要意义。碳青霉烯类药物一直是治疗多重耐药革兰阴性菌的有效抗菌药物,但是近年来关于碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的报道愈加增多。

痰热清注射液为一种具有清热解毒、化痰、抑菌抗炎的中药制剂,主要由黄芩、金银花、山羊角和连翘等组成,上清肺火、下泻膀胱火[2]。有研究表明,痰热清注射液在抑制耐药菌方面具有重要作用,如改变细菌膜通透性、抑制β-内酰胺酶、消除耐药质粒方面具有一定作用[3]。本研究对痰热清注射液联合碳青霉烯类药物抑制多重耐药铜绿假单胞菌的疗效进行研究,以期为临床抗感染治疗提供一定的理论支持。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集笔者所在医院临床分离自脓毒症患者的8株多重耐药铜绿假单胞菌(8株菌均分离自血液标本),剔除同一患者同一部位分离的菌株,菌株通过MALDI-TOF-MS鉴定系统进行鉴定,鉴定为铜绿假单胞菌。药敏质控菌株大肠埃希菌ATCC25922购自卫健委临床检验中心。

1.2 仪器和试剂 痰热清注射液(上海凯宝药业),MALDI-TOF-MS质谱仪、DR100型比浊仪(法国生物梅里埃公司),八通道微量移液枪(德国Eppendorf公司),96孔细胞培养板,美罗培南和亚胺培南(美国Thermo Fisher公司),Mueller-Hinton(MH)肉汤和哥伦比亚血琼脂(英国OXOID公司),0.22 μm的过滤膜(广州翔博生物科技公司)。

1.3 细菌药敏试验 参照CLSI操作标准[4],挑取接种于血平板上培养18~24 h的菌株的3~5个纯菌落,使用无菌生理盐水将菌悬液调浊度至0.5麦氏浊度,采用微量肉汤稀释法检测美罗培南、亚胺培南及痰热清注射液单药对8株多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)值。其中,美罗培南和亚胺培南的初始抗菌药物原液质量浓度为5 120 μg/mL(检测终质量浓度范围0.12~128 μg/mL),痰热清注射液的原液质量浓度为1 000 μg/mL(检测终质量浓度范围0.50~200 μg/mL),并采用0.22 μm的过滤膜对抗菌药物及痰热清注射液原液进行过滤除菌,储存于4℃备后续使用。向无菌的96孔平板中每行的第1~10孔依次加入100 μL的各质量浓度药液,再向各孔加入100 μL稀释后的菌液(5×106CFU/mL),同时做阴性对照和空白对照。35℃培养18~20 h,观察并记录3种药物单药最低抑菌浓度值(单药MIC)。试验重复3次取平均值。

1.4 联合药敏试验 采用微量棋盘稀释法分别对痰热清注射液联合美罗培南和亚胺培南进行联合药敏检测。将3种药物按照2倍的MIC值用MHB肉汤倍比稀释成8个质量浓度梯度。分别取痰热清注射液和美罗培南联合,痰热清注射液和亚胺培南进行联合,按照棋盘法设计,各取50 μL加入每孔,同时加入100 μL稀释后的菌液(5×106CFU/mL),37℃培养16~18 h后,观察记录最佳组合时的各药最低抑菌质量浓度(甲药联用MIC和乙药联用MIC),并计算部分抑菌浓度指数(FICI值)用于评价联合用药的两药相互作用效果。FICI=MIC甲药联用/MIC甲药单用+MIC乙药联用/MIC乙药单用。FICI≤0.5为协同作用,0.5<FICI≤1.0 为相加作用,1.0<FICI≤2.0为无关作用,FICI>2.0为拮抗作用。

2 结 果

2.1 3种药物对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC值 通过微量肉汤稀释法进行检测,8株菌株中除PA1223对碳青霉烯类药物中介外,表现为耐药。其中PA1106、PA1396菌株耐药明显,PA1498对亚胺培南的耐药程度较美罗培南严重。3种药物对8株菌株的具体MIC值见表1。

表1 3种药物对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC值(μg/mL)

2.2 3种药物两两联用后对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC值 通过棋盘稀释法对痰热清注射液与碳青霉烯类药物的联合用药检测,痰热清注射液、美罗培南和亚胺培南的MIC值较单药时均有降低,具体见表2。

表2 3种药物两两联用对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC值(μg/mL)

2.3 3种药物两两联用后对多重耐药铜绿假单胞菌的FICI分布 痰热清注射液与美罗培南和亚胺培南联合用药检测后,其FICI指数均表现为协同或相加的作用。见表3,表4。

表3 3种药物两两联用对多重耐药铜绿假单胞菌的FICI值

表4 3种药物两两联用的FICI值分布构成比[n(%)]

3 讨 论

脓毒症是感染引起的宿主反应失调,可导致危及生命的器官功能损坏的症候群,为一种高病死率的临床综合征,不仅给患者生命安全带来威胁,同样也给医疗卫生事业带来巨大经济负担。因此,许多专家主张对脓毒症要做到“早预防、早发现、早干预,降低脓毒症的发生率和病死率”。在对脓毒症患者抗感染的治疗中,感染控制不仅仅是预防脓毒症的重要措施,也是防止感染直接造成死亡的重要措施[5-7]。

随着细菌耐药性问题的日渐严重及新型有效抗菌药物研发的缓慢,科研工作者将目光转向中草药及中草药联合抗菌药物进行有效的抗感染治疗[8-10]。痰热清注射液一直是中医治疗肺部呼吸道疾病的中药注射制剂[11-13],在中医药治疗方面具有重要作用,临床上主要用于治疗咯痰、咽痛、早期肺炎、支气管炎及上呼吸道感染等[14-15]。

本研究通过对我院分离自脓毒症患者的8株多重耐药铜绿假单胞菌进行研究发现,8株菌中均对碳青霉烯类抗菌药物表现为非敏感,这给长期使用碳青霉烯类抗菌药物治疗多重耐药阴性菌的治疗方案带来严峻挑战,并且也给患者生命和经济带来严重损失。而通过将痰热清注射液分别与美罗培南和亚胺培南进行联合药敏检测发现,痰热清注射液分别与美罗培南和亚胺培南联合用药的MIC值较单药MIC值均有降低。进一步采用联合抑菌指数进行分析发现,痰热清注射液与美罗培南和亚胺培南联合用药检测后,其FICI指数均表现为协同或相加的作用,说明痰热清注射液与碳青霉烯类药物联合应用可能使药物的抑菌效果增强。

综上所述,本研究发现,痰热清注射液和碳青霉烯类药物联合用药组,既可抑制该菌的产生,同时也降低了临床药物的用药剂量,延缓细菌耐药性的产生,为临床抗感染治疗带来新的选择和理论依据。

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