酸枣仁汤对帕金森病抑郁大鼠行为学及脑内5-HT表达的影响

黄忠明 (达州中医药职业学院，四川 达州 635000)

帕金森病抑郁(PDD)是帕金森病(PD)常见的非运动症状之一，可能会加重PD患者认知功能损害及运动功能障碍程度，但PDD病情隐匿，容易被忽视，患者可能面临残疾、生活质量降低等风险〔1,2〕。因此，PDD患者实施科学有效的治疗措施十分必要。以往西医治疗PDD主要通过左旋多巴、氟西汀等西药治疗，虽然可在一定程度上改善患者临床症状，但经临床实践发现，单纯西药治疗往往需要长期服药，价格昂贵，患者接纳度不高，且西药长期应用副作用较大，依赖性强，容易产生一系列不良反应，应用受限〔3〕。随着中医理论不断发展，中医药近年不断被用于PDD治疗中，并取得一定效果。中医认为，PDD属于“颤证”合并“郁证”范畴，肝肾阴虚、气机阻滞、脾失健运等是其重要病机，治疗应以疏肝解郁、清热除烦等为主〔4〕。酸枣仁汤是一种安神剂，多被用于治疗神经衰弱、心肝血虚者，具有养血安神、清热除烦等功效〔5〕。研究发现，酸枣仁汤用于抑郁患者中可改善患者症状，提高其睡眠质量〔6〕。但目前关于酸枣仁汤治疗PDD具体作用机制尚未阐明，相关研究较少，本研究通过建立PDD大鼠模型，对其实施酸枣仁汤治疗，观察酸枣仁汤对PDD大鼠行为学及脑内5-羟色胺(5-HT)表达的影响。

1 资料与方法

1.1实验动物 选取SPF级的健康雄性SD大鼠50只，均由湖北实验动物研究中心提供，大鼠均饲养于恒温动物房内，每12 h昼夜交替1次，保证大鼠可自由饮水及进食饲料；50只SD大鼠周龄6～13 w，平均(8.15±0.57)w；体重0.15～0.35 kg，平均(0.25±0.03)kg。

1.2方法

1.2.1主要药品与试剂 氟西汀胶囊购自苏州中化药品工业有限公司，国药准字H20064844，规格：20 mg/粒，用蒸馏水配制成0.18 mg/ml药液；酸枣仁汤由解放军总医院中药房提供，药物组成：酸枣仁15 g、甘草3 g、知母6 g、茯苓6 g、川芎6 g，先用水浸泡约30 min，再武火、文火分别煎煮30 min、20 min，滤出药液，再加水煎煮，滤出药液，将2次药液混匀制成浓缩液；5-HT、去甲肾上腺素(NE)、神经肽(NP)Y等检测试剂盒均购自美国Sigma公司；6-羟多巴胺购自美国Sigma公司。

1.2.2主要仪器与设备 常州普天仪器制造有限公司提供的TD-5M型离心机；美国Agilent公司提供的HP1100型高效液相色谱仪；天津斯维科科技公司提供的电子秤；STOELTING公司提供的脑立体定位仪；北京光明仪器厂提供的匀浆器；北京军事科学院提供的QL21型动物旋转监测仪。

1.2.3大鼠分组及药物干预方法 大鼠进行常规适应性饲养1 w后，随机选择其中10只大鼠作为空白对照组，剩余40只大鼠建立PDD模型，建模成功后随机分为4组，每组各10只，分别为：模型组、氟西汀组、中药(酸枣仁汤)高剂量组、中药低剂量组；氟西汀组实施盐酸氟西汀3 mg/kg干预；中药高剂量组、中药低剂量组分别给予9.90 g/(kg·d)、2.48 g/(kg·d)体重灌服酸枣仁汤(给药体积：每100 g体重给予1.0 ml)；空白对照组、模型组均给予等体积的生理盐水灌服；连续灌胃2 w。

1.2.4建立PDD模型 用10%水合氯醛对大鼠麻醉，固定于脑立体定位仪，参考脑立体图谱，颅骨钻孔，向大鼠左侧纹状体缓慢注射6-羟多巴胺液5 μg/μl，缝合皮肤，术后常规预防感染；术后2 w注射阿朴吗啡，诱导大鼠旋转，记录每5 min大鼠向健侧旋转的次数及40 min内旋转总次数，阳性判定：≥7圈/min，40 min总旋转次数≥280圈；1次/w，连续测量4 w阳性大鼠为PD合格模型。PD建模成功后，利用慢性不可预见性温和应激法制作PDD模型：禁食禁饮24 h、4℃冷水游泳5 min、关闭在潮湿鼠笼中24 h、热烘、通宵照明、夹尾10 min、束缚8 h、电击足底、昼夜颠倒；每日随机选择一种刺激方式，每种方式不可联系使用，持续21 d。

1.3观察指标的检测

1.3.1行为学检测 ①悬尾试验：选择适宜高度的横杆，将大鼠尾巴固定于杆上，使其距地面约1.5 m，记录大鼠5 min内静止时间(大鼠四肢、头部不动时身体晃动时间)；②糖水偏爱测试：大鼠禁食禁饮24 h后进行实验，同时给予大鼠200 ml 1%蔗糖水、纯净水各1瓶，24 h后测量糖水消耗情况，计算糖水偏爱率=糖水消耗/液体总计消耗×100%；③强迫游泳实验：将大鼠放置在24℃左右的透明水缸内，游泳6 min，观察并记录后4 min大鼠漂浮不动时间，每次实验后需换水，避免对实验产生影响。

1.3.2血清NPY、脑内5-HT、NE等表达检测 ①治疗2 w且行为学检测结束，10%水合氯醛麻醉后，取大鼠腹主动脉血2 ml，以3 000 r/min速率离心15 min，取血清，置于冰冻环境下保存待检，采用酶联免疫吸附试验测定血清NPY水平，操作遵照说明书严格进行。②上述取血操作后，立即断头处理，取出大脑称重，置于冰袋上分离大脑，取前额叶皮质组织，放入匀浆器中匀浆，低温离心，以12 000 r/min速率离心20 min，取上清液，采用高效液相电化学检测脑内5-HT、NE色谱，计算各指标含量。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件进行单因素方差分析、SNK-q检验。

2 结 果

2.1各组行为学检测结果比较 与空白对照组比较，其余4组悬尾静止、游泳不动时间均显著升高，糖水偏爱率显著降低(P<0.05)；氟西汀组、中药低剂量组、中药高剂量组悬尾静止、游泳不动时间显著低于模型组，糖水偏爱率显著高于模型组，中药低剂量组、中药高剂量组悬尾静止、游泳不动时间显著低于氟西汀组，糖水偏爱率显著高于氟西汀组，且中药高剂量组悬尾静止、游泳不动时间显著低于中药低剂量组，糖水偏爱率显著高于中药低剂量组(均P<0.05)。见表1。

表1 各组行为学检测及脑内5-HT、NE水平比较

2.2各组血清NPY水平比较 空白对照组、模型组、氟西汀组、中药低剂量组、中药高剂量组血清NPY平均水平分别为(32.96±2.24)、(13.25±2.14)、(16.58±2.41)、(22.69±3.02)、(27.45±2.77)ng/ml；与空白对照组比较，其他4组血清NPY水平显著降低(P<0.05)；但氟西汀组、中药低剂量组、中药高剂量组血清NPY水平显著高于模型组，中药低剂量组、高剂量组血清NPY水平显著高于氟西汀组，且中药高剂量组血清NPY水平显著高于中药低剂量组(P<0.05)。

2.3各组脑内5-HT、NE表达比较 与空白对照组比较，其他4组脑内5-HT、NE表达显著降低(P<0.05)；氟西汀组、中药低剂量组、高剂量组5-HT、NE表达显著高于模型组，中药低剂量组、高剂量组5-HT、NE表达显著高于氟西汀组，且中药高剂量组5-HT、NE表达显著高于中药低剂量组(P<0.05)。见表1。

3 讨 论

PD多发生于老年群体，因黑质多巴胺能神经元丢失导致患者脑内多巴胺分泌降低，使得5-HT释放减少，进而出现抑郁症状，发展为PDD〔7〕。据报道，PDD发病率高达35%～40%〔8〕。PDD可发生在疾病各个时期，不仅加重患者运动功能障碍，还严重影响其生存质量，甚至威胁生命安全〔9〕。因此，对PDD患者实施安全有效治疗方案至关重要。

以往西医治疗PDD多采用药物联合方式，主要以改善临床症状为主，可在一定程度上提高患者生存质量，但药物长期应用副作用较明显，难以达到预期效果，应用受限〔10〕。中医理论认为，PDD属于“颤证”合并“郁证”范畴，“颤证”病机主要是肝肾阴虚、虚风内动，久则肝失疏泄，气机阻滞，发展成为“郁证”，该病始发于肝，并发于脾，最终上扰脑神，治疗以疏肝理气、清热除烦等为主〔11〕。酸枣仁汤是一种安神剂，主治肝血不足、虚烦失眠证，方中含酸枣仁、知母、川芎、甘草等成分，其中酸枣仁为君药，具有养肝、安神等作用；茯苓、知母可宁心安神、清热除烦，共为臣药，川芎可调肝理气，为佐药；甘草调和各药，为使药，诸药为伍，共奏养血除烦、安神等功效〔12〕。研究发现，酸枣仁汤具有镇静催眠的作用〔13〕。

5-HT是一种抑制性神经递质，PDD发病与5-HT水平的异常代谢存在密切联系。研究发现，5-HT水平异常降低是PDD发病基础，且其水平变化与患者抑郁程度、认知功能障碍程度呈正相关〔14〕。NE也是一种神经递质，据报道，NE水平异常下降提示PD患者可能并发抑郁风险，被证实与PD及抑郁症发生及发展有关〔15〕。NPY是一种神经活性肽，大量存在于大脑皮质及下丘脑中，在情感障碍发生及发展中发挥一定作用〔16〕。研究发现，NPY在抑郁症患者中水平显著降低，且在抑郁症自杀患者中水平下降更为明显，NPY与抑郁症程度存在一定联系〔17〕。本研究结果说明酸枣仁汤治疗PDD大鼠可促进脑组织NPY的释放，增加5-HT、NE等神经递质含量。分析其原因可能为，酸枣仁汤高剂量可显著提高大鼠脑内神经营养家族相关成员表达，如脑源性神经营养因子及其特异性受体，进而促进神经元生存，提高脑内神经递质因子释放，达到抗抑郁作用〔18〕。此外，本研究结果说明酸枣仁汤可改善PDD大鼠行为学状况，这可能与酸枣仁汤通过提高5-HT、NE、NPY等因子释放，达到抗抑郁效果，进而改善大鼠行为学有关。

综上，酸枣仁汤可显著改善PDD大鼠行为学异常，促进大鼠血清DPY释放，增加5-HT、NE含量，应用价值高。