大鼠自然戒断和小鼠催促戒断模型评价宣肺止嗽合剂的躯体依赖作用

宋月红 陈 瑛 张晨熙 贾艳丽 董福天 韩 刚 董延生 宋敏平▲

1.甘肃普安制药股份有限公司，甘肃武威 733006；2.国科赛赋河北医药技术有限公司，河北廊坊 065500

药物依赖性是由于长期或反复使用某种药物，与机体相互作用而产生对个体精神和躯体上的依赖性[1]，反复用药会使机体不断进行新陈代谢调整，以适应药物作用下的生理活动，机体一旦适应，中断用药后会导致机体产生不适或心理上的强烈需求，长期处于强烈用药欲望会使神经细胞和脑机能受损，生理及代谢活动发生严重絮乱或病理性改变，出现戒断症状[2-4]。

宣肺止嗽合剂是临床上比较常用的止咳中成药，以宣肺止咳化痰为主[5]。其处方中的蜜罂粟壳含吗啡等生物碱，而吗啡是临床上常用的可致依赖性的药物[6-12]。本课题组前期研究（未发表）显示，宣肺止嗽合剂（等效为人临床拟用剂量的1、2、4 倍）在大鼠条件性位置偏爱模型上未表现出精神依赖性，为进一步判断其是否有躯体依赖隐患，根据《药物非临床依赖性研究技术指导原则》[13]相关要求，本实验以盐酸吗啡作为阳性对照药物，考察了宣肺止嗽合剂的躯体依赖性，以期为临床安全用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

自然戒断实验：SPF 级SD 大鼠60 只，雌雄各半，5～7 周龄，体重160～230 g。催促戒断实验：SPF 级Balb/c 小鼠60 只，雌雄各半，3～6 周龄，体重16～24 g，动物均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号：SCXK（京）2016-0006，实验动物使用许可证号：SYXK（冀）2020-010。饲养环境：屏障动物房，12 h/12 h 昼夜自然规律，通风良好，温度20～26℃，湿度40%～70%，饮水和饲料供动物自由摄取。本研究实验设计等遵循国科赛赋河北医药技术有限公司实验动物伦理委员会相关规定。

1.2 药品与仪器

宣肺止嗽合剂（甘肃普安制药有限公司，批号：CP002200106，规格：200 ml/支，6 支/盒）；盐酸吗啡注射液（morphine hydrochloride injection，Mor）[东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：190202-1（有效期至2024-01-31），规格：10 mg/ml，购自华润河北医药有限公司，药品使用获得河北省药品监督管理局审批]；氯化钠注射液（河北天成药业股份有限公司，批号：1150442，规格：100 ml/瓶）；电子天平（日本岛津公司，型号：AEL-200，精密度0.1 mg）。

1.3 研究方法

1.3.1 大鼠自然戒断试验

1.3.1.1 分组与给药 根据体重随机分为五组，每组12 只，分别为溶剂对照组，低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组和盐酸吗啡组，本试验设置的低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组根据原液中吗啡实际浓度折算，分别为原液的1/5 倍、1/2 倍和1 倍，约与人临床拟用剂量的2.4、6.0、12.0 倍等效[14]。给药周期和频率均为连续30 d，3 次/d。各组给药途径、剂量、制剂、浓度、体积见表1。

表1 大鼠自然戒断模型评价宣肺止嗽合剂的躯体依赖作用剂量设计表

1.3.1.2 戒断评分 从第31 天（即自然戒断第1 天）开始，观察末次给药后12、18、36、42、60、66、84、108、132 及156 h 的症状，按照以下评分标准对各组大鼠的戒断症状进行评分。①跳跃、湿狗样摇体、扭体、摇头、打哈欠、扫尾。0 分=无；1 分=1～5 次；2 分=6～10 次；3 分>10 次。②齿颤、咀嚼（次与次之间至少间隔3 s）、舔生殖器。0 分=无；1 分=1～10 次；2 分=11～20 次；3 分>20 次。③流涎、流泪、竖毛、激惹、眼睑下垂、腹泻。0 分=无；1 分=轻度“+”；2 分=中度“++”；3 分=重度“+++”。将动物放入戒断观察箱中观察出现上述症状的次数或程度，根据上述标准对相应症状进行评分，汇总所有症状的得分即为该动物的戒断症状评分[14-17]。

1.3.1.3 体重变化 自然戒断第1～14 天每天测定1 次体重，体重变化为戒断期间体重与末次给药当天体重的差值。

1.3.2 小鼠催促戒断实验

将小鼠根据体重随机分为五组，每组12 只，分别为溶剂对照组，低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组和盐酸吗啡组。低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组经口灌胃给药，连续给药5 d，每天给药3 次，给药剂量根据原液中吗啡实际浓度折算分别为宣肺止嗽合剂的1/5 倍、1/2 倍及1 倍，分别约等效为人临床拟用剂量的2.4、6.1、12.2 倍[18]。各组给药途径、剂量、制剂、浓度、体积见表2。

表2 小鼠催促戒断模型评价宣肺止嗽合剂的躯体依赖作用剂量设计表

于末次给药6 h 内，腹腔注射纳洛酮2 mg/kg 进行催促戒断，观察戒断后30 min 内小鼠的跳跃、扭体次数及戒断前后约1 h 的体重变化，体重变化=给纳洛酮后体重-给纳洛酮前体重。

1.4 统计学方法

采用Stata/IC 15.0 软件对结果进行统计分析，偏态分布计量资料的描述以中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，比较采用Kruskal-Wallis H 秩和检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠自然戒断试验

试验第26 天，溶剂对照组第2 次给药后1 只动物死亡，大体解剖观察未见异常脏器改变，考虑由灌胃操作引起，因此溶剂对照组只数为11 只。

2.1.1 戒断评分

与溶剂对照组比较，盐酸吗啡组戒断评分升高，宣肺止嗽合剂低剂量组在12、18 h 的戒断评分显著升高，宣肺止嗽合剂中、高剂量组在12、18、36、66、84、108 h 的戒断评分显著升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3。

表3 自然戒断期间各组SD 大鼠戒断评分[分，M（P25，P75）]

2.1.2 大鼠体重变化

与溶剂对照组比较，盐酸吗啡组体重变化在自然戒断第2～7 天显著降低（P ＜0.05），自然戒断第8～14 天两组体重变化比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组在自然戒断第1～14 天体重变化与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。见图1。

图1 自然戒断期间各组SD 大鼠体重变化

2.2 小鼠催促戒断试验

给药第5 天，溶剂对照组给药后1 只小鼠死亡，考虑因灌胃操作不当所致，因此溶剂对照组只数为11 只。

与溶剂对照组比较，盐酸吗啡组小鼠跳跃次数、扭体次数升高，体重变化显著降低（P ＜0.05），低、中、高剂量宣肺止嗽合剂组小鼠的跳跃、扭体次数和体重变化与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表4。

表4 催促戒断期间各组Balb/c 小鼠戒断指标[M（P25，P75）]

3 讨论

采用反复给予动物依赖性药物一段时间后，通过中断给药建立自然戒断成瘾模型，可根据评分标准对戒断症状严重程度进行定量评定[19-21]。跳跃次数、体重变化和扭体指标是反映催促戒断的主要指标[22-24]，本研究以上述3 个指标来评价宣肺止嗽合剂在小鼠催促戒断模型上的躯体依赖作用，方法可靠。

本研究中大鼠自然戒断结果示宣肺止嗽合剂出现了轻微的戒断反应，最低成瘾剂量为0.732 mg/（kg·d）（按吗啡实际浓度折算剂量计），约为60 kg 成人临床用药剂量的2.4 倍；小鼠催促戒断结果显示宣肺止嗽合剂组小鼠的跳跃次数、扭体次数和体重变化与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），但是高剂量组编号为5F005 的小鼠跳跃32 次，考虑该动物出现了轻微的戒断反应，同时本研究选用动物数较少，因此不能排除该剂量下宣肺止嗽合剂不会引起戒断症状出现，最低成瘾剂量为9.15 mg/（kg·d）（按吗啡实际浓度折算剂量计），约为60 kg 成人临床用药剂量的12.2 倍，而在成人临床剂量6.1 倍下未表现出躯体依赖潜能。综上，宣肺止嗽合剂质量标准中对活性成分实行定量检测和严格控制，要求吗啡含量在0.030～0.080 mg/ml 范围内，既保证了药品有效性，又防止了因吗啡含量过高而引起药物成瘾[25]。患者在病愈的情况下可自觉停止服药，不会发生滥用现象和药物依赖性。