热敏灸干预对脑出血大鼠神经功能及脑组织含水量的影响

芦晓溪，侯志帆，赵文

1.江西省中医院神经外科，江西南昌 330000；2.江西中医药大学党委组织部，江西南昌 330004

脑 出 血（intracerebral hemorrhage，ICH）是 指 非创伤性脑内血管破裂， 导致血液在脑实质内聚集的一类临床综合征，属于脑卒的一种类型[1]。 ICH 占脑卒中13%左右[2]。 最常见病因为高血压合并细小动脉硬化，临床症状多种多样[3]。常表现为头痛、呕吐及不同程度上的意识障碍，如昏睡、昏迷、局灶性神经功能缺损等[4-5]。 总体预后较差，而脑水肿、颅内压增高、脑疝的形成是致死的主要原因[6]。 目前西医对ICH 的治疗方法不多，且疗效并不理想，反而长期服用药物会带来一定的不良反应[7-8]。 有关报道显示，灸法对改善ICH 患者的神经功能和脑组织含水量有良好的疗效[9]。由江西省中医院陈日新教授发明的热敏灸法，对ICH 患者有显著的疗效[10]。 基于此，该实验于2020 年12 月—2021 年5 月将43 只大鼠作为实验对象，使用热敏灸法治疗ICH 大鼠，观察治疗后大鼠ICH 神经功能评分、神经损伤积分值和脑组织含水量。 现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

43 只SD 大鼠（22 只雄性，21 只为雌性），适应饲养时间为夏季，饲养一般温度在18～26℃，相对湿度在40%～70%，噪音在85 分贝以下，氨浓度20 Pm下。 所有SD 大鼠达到SPF 级要求，均由江西中医药大学动物实验中心提供。 分笼喂养在江西中医药大学动物房内， 温度恒定在25℃， 湿度恒定在40%～50%， 光照周期为8～10 h， 平均体质量 （239.45±13.78）～（241.65±14.39）g。 食物获取方式人工喂养，喂养时间早晨9∶00、中午12∶00、下午17∶00。 饮水自由，每12 小时更换饮水。

1.2 主要仪器与试剂

大鼠立体定位仪（南京卡尔文生物科技有限公司）；Ⅶ型胶原蛋白酶（国药准字H20080096，规格:100 μg）；热敏灸治疗仪（江西凯敦医疗器械有限公司，规格：705 mm×175 mm×367 mm），真空干燥箱（南京申运佳机械科技有限公司，产品型号SZG-50），75%乙醇溶液（规格:500 mL），0.9%氯化钠溶液（规格:500 mL），0.01 g 电子天平（瑞士梅特勒-托利多），奥拉西坦注射液（国药准字H20060072，规格:5 mL）。

1.3 分组与造模

采用随机分组法将43 只大鼠随机分为正常组（n=5）、假手术组（n=6）、模型组（n=9）、热敏灸干预组（n=8）、奥拉西坦组（n=8）、热敏灸干预联合奥拉西坦组（n=7），在治疗后24、72、110 h 比较神经损伤程度积分、脑组织含水量。 使用Ⅶ型胶原蛋白酶诱导制备大鼠脑出血模型[11]。在持续12 h 禁食和6 h 的禁水后，给予大鼠2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(400 mg/kg)，麻醉后等待5 min，观察大鼠是否麻醉成功，成功后固定在脑立体定位仪上，剔除头部毛发，局部头皮消毒， 沿头皮正中线做1 cm 的切口， 在前囟后0.21 mm， 中线旁开2.8 mm 处钻一个0.8 mm 的小孔，使用脑立体定位上的微量注射器（5 μl，针头半径为0.4 mm）沿钻孔缓慢进针，在大鼠的尾状核，缓慢注入3 μl 的Ⅶ型胶原蛋白酶和1 μL 的0.9%氯化钠溶液。 留针6 min 后退针，缝合头皮。 大鼠醒后根据Longa 评分法[12]将评分分为5 大类，第1 类无神经缺陷（0 分）；第2 类未完全伸展左前爪（1 分）；第3 类向左旋转（2 分）；第4 类倒向左边（3 分）；第5类没有自发行走，意识水平低下（4分）。 神经功能评分，评分≥1 分可认为模型制备成功。

1.4 干预方式

假手术组注射3 μl 的0.9%生理盐水代替，正常组不处理，模型组则只注射3 μl 的胶原酶。 热敏灸法组：在大鼠头皮上20 cm 处进行热敏灸，为感受温度的适宜程度，可以将手悬空于大鼠头顶，感受温度的适宜程度，待温度适宜后，根据《实验大鼠和小鼠穴位定位的研究概况》[13]取大鼠头部穴位，如百会、四神聪、风池、风府等腧穴进行热敏灸，时间控制在0.5～1 h，3 次/d，中间间隔休息4 h，连续实验5 d。 奥拉西坦组：在造模术完成35 min 后，往大鼠注射奥拉西坦注射液（15 mg/mL）。 热敏灸干预联合奥拉西坦组：热敏灸法和奥拉西坦注射液的用法用量，同前面热敏灸法组和奥拉西坦组一样。

1.5 标本采集

每组选取2 只于术后24、72、110 h 麻醉后断头处死， 取出脑组织用一次性的无菌纱布稀释多余的血渍，放于天平上称质量，此时为湿质量，然后将脑组织放于65℃真空干燥箱内烘60～90 h， 拿出反复称重直到质量不改变时，为干质量。剩余各组大鼠进行神经功能行为比较。

1.6 观察指标

①观察脑含水量指标，脑含水量=（湿质量-干质量）/湿质量×100%。

②观察神经功能行为， 在术后24、72、110 h 进行mNSS 的测试，测试包括运动、感觉、平衡和反射测试[14]。 （A）运动测试：提起大鼠，前后肢屈曲各记1分，30 min 内垂直移动＞10°记1 分；正常走为0 分，不能走直线记1 分，往瘫痪侧转圈记2 分，倒向则记3 分。（B）平衡测试：姿态稳定平衡记0 分，紧抓平衡木边缘记1 分，一侧肢体掉下记2 分，两侧掉下或者旋转（＞1 min）记3 分，在平衡木上保持平衡但摔下来（＞40 s）记4 分，（＞20 s）记5 分，未尝试抓住平衡木落下（＜20 s）记6 分。（C）感觉测试：本体视觉触觉实验记1 分，深感觉，刺激大鼠机体记1 分。 （D）反射实验：触及耳道时摇头记1 分，角膜反射记1 分，惊吓反射记1 分，肌张力障碍记1 分[15]。 mNSS 神经功能损伤程度评分范围为0～18 分， 分为4 个标准，第1 个标准为严重伤害（13～18 分）；第2 个标准为中度伤害（7～12 分）；第3 个标准为轻度伤害（1～6分）；第4 个标准为正常（0 分）。 损伤严重程度与分数成正相关。 正常组与假手术组无神经功能损伤影响，所以不参与神经功能的评分比较[16]。

1.7 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件处理数据。 计量资料符合正态分布以（±s）表示，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠脑组织含水量比较

正常组与假手术组在24、110 h 脑组织含水量差异无统计学意义（P>0.05）。 与模型组比较，热敏灸干预组在24 h 的脑组织含水量下降，差异有统计学意义（P<0.05），与奥拉西坦组比较，热敏灸干预联合奥拉西坦组在72 h 的脑组织含水量下降，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表1。

表1 各组大鼠脑组织含水量比较[(±s),%]Table 1 Comparison of brain tissue water content in each group of rats [(±s),%]

表1 各组大鼠脑组织含水量比较[(±s),%]Table 1 Comparison of brain tissue water content in each group of rats [(±s),%]

注：同时间正常组与假手术组比较，#P>0.05；同时间热敏灸干预组与模型组比较，△P<0.05；同时间热敏灸干预组与奥拉西坦组比较，□P<0.05；同时间热敏灸干预组与热敏灸干预联合奥拉西坦组比较，▲P<0.05

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2.2 各组大鼠运动测试积分值比较

同时间段比较，热敏灸干预联合奥拉西坦组大鼠运动测试评分显著低于奥拉西坦组、模型组、热敏灸干预组、差异有统计学意义（P<0.05）。 见表2。

表2 各组大鼠运动测试积分值比较[(±s),分]Table 2 Comparison of the integral values of exercise test of rats in each group [(±s), points]

表2 各组大鼠运动测试积分值比较[(±s),分]Table 2 Comparison of the integral values of exercise test of rats in each group [(±s), points]

注：热敏灸干预组与同时间其他组比较，#P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，△P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，▲P<0.05

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2.3 各组大鼠平衡测试积分值比较

同时间段比较， 热敏灸干预联合奥拉西坦组平衡测试评分显著低于奥拉西坦组、模型组、热敏灸干预组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表3。

表3 各组大鼠平衡测试积分值比较[(±s),分]Table 3 Comparison of the integral value of the balance test of rats in each group [(±s), points]

表3 各组大鼠平衡测试积分值比较[(±s),分]Table 3 Comparison of the integral value of the balance test of rats in each group [(±s), points]

注：热敏灸干预组与同时间其他组比较，#P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，△P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，▲P<0.05

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2.4 各组大鼠感觉测试积分比较

同时间段比较， 热敏灸干预联合奥拉西坦组感觉测试评分显著低于奥拉西坦组、模型组、热敏灸干预组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表4。

表4 各组大鼠感觉测试积分比较[(±s),分]Table 4 Comparison of sensory test scores of rats in each group [(±s), points]

表4 各组大鼠感觉测试积分比较[(±s),分]Table 4 Comparison of sensory test scores of rats in each group [(±s), points]

注：热敏灸干预组与同时间其他组比较，#P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，△P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，▲P<0.05

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2.5 各组大鼠反射实验测试积分比较

同时间段比较， 热敏灸干预联合奥拉西坦组大鼠反射测试评分显著低于奥拉西坦组、模型组、热敏灸干预组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表5。

表5 各组大鼠反射实验测试积分比较[(±s),分]Table 5 Comparison of test scores in the reflex test of rats in each group [(±s), points]

表5 各组大鼠反射实验测试积分比较[(±s),分]Table 5 Comparison of test scores in the reflex test of rats in each group [(±s), points]

注：热敏灸干预组与同时间其他组比较，#P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，△P<0.05；热敏灸干预组与同时间其他组比较，▲P<0.05

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3 讨论

ICH 是最为常见的脑卒中类型，具有高致死、高致残率及高发病率[17]。 临床症状表现为血压升高、头痛、呕吐、肢体瘫痪、意识障碍等。ICH 的发作也常伴随着其他并发症，如颅内压增高、癫痫、深静脉血栓、肺栓塞、脑心综合征等，常用的检查有CT、MRI、血常规、数字减影血管造影等。

西医在治疗ICH 有着好的疗效， 一般治疗方式为患者卧床休息2～4 周，避免情绪激动，有意识地禁食，注意水电解质的平衡。预防吸入性肺炎和早期的感染。观测患者的血压， 给予止血药物。该次实验使用大鼠模拟脑出血患者， 给予常规治疗和保护神经的药物奥拉西坦， 该药在保护神经功能方面有着显著的效果。

奥拉西坦作用机制是促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺合成，提高大脑的ATP/ADP 的比值，使得大脑中的蛋白质和核酸的合成增加， 对脑损伤的神经功能缺失治疗有显著效果。据有关研究表明，长期服用该药物，会出现皮肤瘙痒、恶心、神经兴奋、头晕、睡眠紊乱等不良反应。

中医认为脑出血又叫脑中风， 中医治疗脑中风有多种治疗方法，使用中药方剂、针灸等方法。 但是有部分患者对针灸有抵抗性心理，随着时代的发展，该院陈日新教授历经临床18 年， 研发出了热敏灸，又称为热敏悬灸。 改灸法不用针、不接触人体、无伤害、无不良反应，这也解决了有部分患者在治疗过程中出现晕针等问题。 热敏灸是运用点燃的艾材产生的艾热悬灸热敏态穴位，激发透热、扩热、传热、局部微热远部热、表面微热深部热、非热觉等热敏灸感和经气传导，并施以个体化的饱和消敏灸量，从而提高艾灸疗效的新疗法[18]。 在治疗ICH 患者时可选择灸百会、风池、风府、太冲等穴位，其中百会穴在头部后发际正中上7 寸，当两耳尖直上，头顶正中，灸该处可以缓解头晕头痛、失眠、昏迷等症状。 风池位于后颈部，后头骨下，两条大筋外缘陷窝中，相当于耳垂平齐，灸此穴具有壮阳益气的作用。风府位于后发际正中线上1 寸，枕外隆凸直下凹陷中。灸该处对治疗脑血管疾病有显著效果。

ICH 患者出现脑水肿，几天时间就会出现峰值，处理不及时，严重的患者血脑屏障被破坏，脑血流量的过度减少也会引起脑萎缩。 该次实验药灸联合组在24 h 与72 h 时脑含水量为 （76.34±0.43）%，（75.68±0.05）%，24 h 与72 h 运 动 测 试 积 分 值 为（4.84±0.76）分、（3.06±0.47）分，相较于其余组同时间段有较好的疗效恢复。 邵文娜等[19]研究中对72 只大鼠采取药针联合治疗， 结果显示治疗1、3 d 药针组脑含水量为 （77.00±0.525）%、（76.38±0.03）%，神经功能评分为（9.00±1.26）分、（11.67±1.21）分。 邵文娜学者研究中的脑含水量与该实验取得的结果对比一致性良好，但在神经功能上评分出现偏差，可能是药针治疗没有药物联合热敏灸干预效果好。 这也展现了热敏灸在治疗脑出血患者神经功能及治疗脑组织含水量的良好效果。 在治疗ICH 患者时，更要注重患者的预防工作，形成良好的生活习惯、定期的体检、预防便秘、冬季注意保暖、防止跌倒、保持好心情。

综上所述， 热敏灸干预对脑出血的神经功能及脑组织含水量有显著的改善效果， 建议在临床上大量推广。