HPLC-CAD同时测定复方醋酸钠林格注射液中钠、钾、镁、钙的含量

杨 琴，袁 军，刘 峰，钱广生

(1. 四川大学华西药学院，四川 成都 610041; 2. 四川省药品检验研究院，四川 成都 611730)

0 引 言

复方醋酸钠林格注射液中含有多种电解质(Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cl–、Acetate–、Gluconate–、Citrate3–)和葡萄糖，在临床上用于循环血量及组织间液减少时的细胞外液的补充，代谢性酸中毒的纠正[1]，也应用于各类型手术中补液[2-3]。为了临床上电解质输入的准确性和科学性，需要对复方醋酸钠林格注射液中的各电解质含量进行测定。目前其质量标准中测定各离子的方法为原子吸收光谱法，需对其中的每一种离子进行单独分析，耗时长、成本高。除原子吸收光谱法外，离子色谱-电导检测器也被用于样品中钠、钾、镁、钙的测定[4]，但电导检测器的响应受温度影响较大。在其他领域，样品中的钠、钾、镁、钙常采用电感耦合等离子体质谱法(ICPMS)[5]，但ICP-MS较昂贵，对氩气消耗大，耗材更换频率高。电雾式检测器(charged aerosol detector ，CAD)作为一种新型的通用型质量型检测器[6]，现已被2020年版《中国药典》收载。CAD的响应值只与进样质量有关，不依赖于化合物的结构与性质，具有检测范围宽、灵敏度高、重现性好的优势[7-8]，可应用于中性、酸性、碱性及两性物质等，特别是无紫外吸收、非挥发性或半挥发性物质的检测[9]。有文献报道，利用CAD检测器同时测定葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖、氯和钠的含量[10]。为了缩短测定时间，本实验采用阳离子分析柱与通用型检测器——CAD，同时测定其中钠、钾、镁、钙离子的含量，能更加快速、简便、准确地对复方醋酸钠林格注射液进行定量分析。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

Vanquish高效液相色谱仪（美国Thermo）；电雾式检测器（美国Thermo）；Arium pro超纯水仪（德国Sartorius）；复方醋酸钠林格注射液，批号为D20122309（方法学验证批）、T20082901、T20083001，四川科伦药业股份有限公司；钠元素标准溶液（批号208043-3）；钾元素标准溶液（批号208042-2）；镁元素标准溶液（批号194013-3）；钙元素标准溶液（批号201007-4）；乙腈（新蓝景，色谱纯）；三氟乙酸（安谱，色谱纯）。

1.2 方法与结果

1.2.1 HPLC-CAD条件

采用SiELC Primesep A(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，柱温30 ℃，流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液，流动相B为0.25%三氟乙酸乙腈溶液，按表1中的程序进行梯度洗脱，流量1 mL/min，进样器温度15 ℃，进样量25 μL。采用CAD检测器，数据采集频率10 Hz，滤波5 s，雾化器温度50 ℃，幂函数1。

表1 流动相洗脱程序

1.2.2 溶液的制备

精密量取样品2 mL于10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液A，供测定钾、钙、镁离子。精密量取1 mL样品于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液B，供测定钠离子。分别精密量取钠、钾、镁、钙单元素标准溶液（1 000 μg/mL）1 mL 于 10 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为钠、钾、镁、钙单元素对照品贮备液。分别精密量取钠、钾、镁、钙单元素对照品贮备液3 mL，3 mL，0.5 mL，1.2 mL于同一10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为30 μg/mL，30 μg/mL，5 μg/mL，12 μg/mL 的对照品溶液。

1.2.3 专属性

精密量取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液25 μL，分别进样测定，记录色谱图，见图1。结果表明：空白溶剂不干扰待测组份测定，钠、钾、镁、钙的保留时间分别为 7.046 min、9.256 min、17.190 min、19.077 min左右，峰形良好，供试品溶液中无其他杂质峰干扰。

图1 溶液色谱图

1.2.4 线性与范围

分别精密量取钠、钾、镁、钙单元素标准溶液（1 000 μg/mL）3 mL、3 mL、0.5 mL、1.2 mL 于同一25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为线性储备液。精密量取 1.25，2.5，2.5，2.5，3.75，5 mL 线性储备液，分别置于 50，50，20，10，10，10 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依次等体积按“1.2.1”项下方法进行测定，记录色谱图。以质量浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，绘制标准曲线。钠、钾、镁、钙的回归方程与线性范围见表2。

表2 钠、钾、镁、钙的回归方程、线性范围和相关系数

1.2.5 检测限与定量限

精密量取各对照品储备液适量，逐级稀释后进样测定，记录色谱图，以信噪比为3时的质量浓度作为检测限，以信噪比为10时的质量浓度作为定量限。测得钠的检测限为0.154 μg/mL，定量限为0.330 μg/mL；钾的检测限为 0.286 μg/mL，定量限为 0.571 μg/mL；镁的检测限为 0.100 μg/mL，定量限为 0.200 μg/mL；钙的检测限为 0.100 μg/mL，定量限为 0.200μg/mL。

1.2.6 进样精密度与重复性试验

取对照品溶液，连续进样6针，记录峰面积，计算得钠、钾、镁、钙峰面积的RSD分别为0.45%、0.79%、0.69%、0.52%(n=6)，说明本方法进样精密度良好，精密度结果见表3。按1.2.2项下方法分别平行制备6份供试品溶液A与供试品溶液B，按1.2.1项下方法进行测定，记录峰面积，计算样品中钠、钾、镁、钙的含量。重复性实验结果见表4，本文方法重复性良好。

表3 钠、钾、镁、钙的精密度试验结果

表4 钠、钾、镁、钙的重复性试验结果

1.2.7 加样回收试验

精密量取同一样品1 mL，共9份，至10 mL容量瓶中，分别精密加入不同体积的钠对照品储备液，照1.2.2项下方法制备，得80%、100%、120%浓度的加标溶液A。精密量取同一样品0.5 mL，共9份，至100 mL容量瓶中，分别精密加入不同体积的钾、镁、钙对照品储备液，照1.2.2项下方法制备，得80%、100%、120%浓度的加标溶液B。以重复性测定结果为样品本底值，按1.2.1项下方法测定，记录峰面积。计算得钠的回收率在101.0%～102.8%之间，平均回收率为101.7%，RSD为0.70%；钾的回收率在97.19%～100.3%之间，平均回收率为98.41%，RSD为1.05%；镁的回收率在97.38%～101.9%之间，平均回收率为99.28%，RSD为1.48%；钙的回收率在 97.14%～102.2%之间，平均回收率为 99.73%，RSD为1.88%。加样回收试验结果见表5。

表5 钠、钾、镁、钙加样回收率试验

1.2.8 样品测定

取复方醋酸钠林格注射液3批，按1.2.1项下方法进行测定，计算样品中钠、钾、镁、钙的含量，并与标准推荐的原子吸收光谱法进行对比，试验结果见表6，两种方法测定结果相当。

表6 样品中钠、钾、镁、钙的测定结果

1.2.9 耐用性试验

取复方醋酸钠林格注射液（批号D20122309）以及对照品溶液，按表7中更改后的条件进行测定，记录峰面积，计算样品中钠、钾、镁、钙的含量。开发方法时已试验过多根色谱柱，故不再更换色谱柱进行考察。试验结果见表8。7种方法测得的供试品中钠、的钾、镁、钙含量RSD值分别为2.40%、1.60%、0.86%、1.84%，表明方法耐用性良好。

表7 耐用性试验条件

表8 耐用性试验结果

2 讨 论

2.1 供试品溶液浓度的选择

由于样品中钠离子与其他3种离子浓度相差甚大，若用同一份供试品测定4个离子，很难满足钠离子不出现平头峰且其他3个离子达到定量限且峰型良好，所以设计两份稀释倍数不同的供试品溶液A和供试品溶液B；钠离子的供试品溶液A由样品稀释100倍而得，钾、镁和钙离子的供试品溶液B由样品稀释5倍而得，由此得到的色谱图峰形良好。

2.2 色谱条件的优化

本实验考察了多根色谱柱,包括SiELC PrimesepA(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent HILIC-Z(3.0 mm×150 mm，2.7 μm)、Thermo Dionex IonPacTMCS12A(4 mm×250 mm)，通过比较其对4种阳离子的保留行为和分离度，最终发现SiELC Primesep A (4.6 mm×250 mm，5 μm)柱分离效果最佳。葡萄糖在此色谱条件下率先出峰，但峰形较差，故不对葡萄糖进行分析。

流动相中加入的酸性调节剂选用了具有挥发性的三氟乙酸，并考察了不同浓度三氟乙酸对结果的影响。结果表明，当酸浓度过低时，镁、钙离子不出峰，当浓度过高时，各离子间分离较差，最后发现0.1%三氟乙酸水溶液–0.25%三氟乙酸乙腈系统分离效果最佳，且基线平稳。进一步优化洗脱梯度后，确定了上述的洗脱条件，此时分离效果好，峰形好，理论塔板数高。

3 结束语

本文采用阳离子分析柱和通用型检测器-电雾式检测器，建立了同时测定复方醋酸钠林格注射液中钠、钾、镁、钙离子含量的HPLC-CAD检测方法。本研究对色谱柱和流动相进行了筛选和优化，考察供试品溶液浓度，并进行方法学验证。该方法能较好地分离上述四种离子，不受溶剂和辅料的干扰，灵敏度、精密度、重复性、准确度均良好。该方法测定结果与原子吸收光谱法测定结果无明显差异，可准确定量，且可实现多种离子同时测定，耗时少，操作简便，为金属离子的测定提供了一种新的思路。