薄层色谱法检测聚维酮K90中肼*

吴红洋，詹宇杰，李莎，韩海燕，武静文，范能全

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

聚维酮K90是以单体乙烯基吡咯烷酮为原料，通过本体聚合、溶液聚合等方法得到的均聚物，黏合性、增溶性、可压性均良好，广泛应用于食品、药品、化妆品等行业［1-2］。肼又称联氨，剧毒，具有强致癌性，为聚维酮K90在生产过程中加入的对人体有害的偶氮引发剂［3-4］。美国国家环境保护局等已将其列入优先控制污染物名单［5］。目前，主要采用薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、分光光度法等方法检测肼［6-10］，但肼无紫外吸收，故采用后3种方法需进行衍生化或萃取等前处理。薄层色谱法前处理简单，操作简便，荧光斑点集中［11-12］。肼与水杨醛反应可生成水杨醛吖嗪，故本研究中以水杨醛吖嗪为对照品，建立了检测聚维酮K90中肼的薄层色谱法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Visualizer/DAX252型薄层色谱成像仪（瑞士Camag公司）；XPE205型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度为0.01 mg）；Multifuge X1R型高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技＜中国＞有限公司）；HHS-21-8型恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司）；GF254薄层层析硅胶板（以下简称薄层板）、RP-2 GF254薄层板、RP-18 GF254薄层板（德国Merck公司）。

1.2 试药

水杨醛吖嗪对照品（中国食品药品检定研究院，批号为190119-201501，纯度为97.3%）；聚维酮K90（企业A，批号为013；企业B，批号为021；企业C，批号为064）；甲醇、乙醇、二氯甲烷、水杨醛、甲苯均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

取水杨醛吖嗪对照品0.045 0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲苯溶解并定容，即得对照品贮备液；精密吸取上述溶液0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲苯溶解并定容，配制成质量浓度为9 μg/mL的对照品溶液。

取聚维酮K90 2.5 g，精密称定，置50 mL离心管中，加超纯水25 mL，搅拌使溶解。加5%水杨醛甲醇溶液0.5 mL，摇匀，置60℃水浴中加热15 min，放冷至室温。精密吸取甲苯2.0 mL置离心管中，密塞，剧烈振摇，离心（转速为4 000 r/min）10 min，取甲苯层上清液，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件优化

薄层板：以甲醇-水（4∶1，V/V）为展开系统，精密吸取2.1项下对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别点于GF254薄层板、RP-2 GF254薄层板、RP-18 GF254薄层板，预饱和30 min，展开至溶剂前沿到达薄层板3/4处，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板的比移值适中，分离效果较好。色谱图见图1。

1，4，5.对照品溶液2，3，6.供试品溶液（批号为021）A.GF254薄层板B.RP-2 GF254薄层板C.RP-18 GF254薄层板图1 不同薄层板薄层色谱图（365 nm）1，4，5.Reference solution 2，3，6.Test solution（batch No.：021）A.GF254 TLC plate B.RP-2 GF254 TLC plate C.RP-18 GF254 TLC plateFig.1 TLC chromatograms with different TLC plates（365 nm）

展开系统：以甲醇-水为展开系统，精密吸取2.1项下对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别点于RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。当展开系统为甲醇-水（2∶1，4∶1，V/V）时，RP-2 GF254薄层板展开后比移值分别为0.31和0.62，前者比移值适中；当展开系统为甲醇-水（4∶1，7∶1，V/V）时，RP-18 GF254薄层板展开后比移值分别为0.220和0.346，对照品溶液与供试品溶液色谱图斑点的比移值均适中，分离度均较好。综合考虑，展开系统选择甲醇-水（2∶1，V/V）。色谱图见图2。

进样量：以甲醇-水（2∶1，V/V）为展开系统，吸取2.1项下对照品溶液和供试品溶液各5，10，15 μL，分别点于同一RF-2 GF254薄层板，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。点样量为5 μL，荧光斑点不明显；点样量为15 μL，点样时间较久；点样量为10 μL，点样时间适中，荧光斑点集中、清晰，故点样量选择10 μL。色谱图见图3。

2.3 验证试验

1，4，6，8.对照品溶液 2，3，5，7.供试品溶液（批号为021）A1，A2.RP-2 GF254薄层板［甲醇-水（2∶1，4∶1，V/V）］B1，B2.RP-18 GF254薄层板［甲醇-水（4∶1，7∶1，V/V）］图2 不同展开系统色谱图（365 nm）1，4，6，8.Reference solution 2，3，5，7.Test solution（batch No.：021）A1，A2.RP-2 GF254 TLC plate［methanol-water（2∶1，4∶1，V/V）］B1，B2.RP-18 GF254 TLC plate［methanol-water（4∶1，7∶1，V/V）］Fig.2 TLC chromatograms with different development systems（365 nm）

1，4，5.对照品溶液2，3，6.供试品溶液（批号为021）A.5 μL B.10 μL C.15 μL图3 不同点样量薄层色谱图（365 nm）1，4，5.Reference solution 2，3，6.Test solution（batch No.：021）A.5 μL B.10 μL C.15 μLFig.3 TLC chromatograms with different sample volumes（365 nm）

精密吸取2.1项下对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别点于同一RP-2 GF254薄层板上，以甲醇-水（2∶1，V/V）为展开系统，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。在对照品溶液色谱相应位置处，2批（批号分别为013和064）供试品溶液未出现荧光斑点，1批（批号为021）供试品溶液的荧光斑点弱于对照品溶液。色谱图见图4。

1，3，4.供试品溶液（批号分别为013，021，064）2.对照品溶液图4 验证试验薄层色谱图（365 nm）1，3，4.Test solution（batch No.：013，021，064）2.Reference solutionFig.4 TLC chromatograms of the verification test（365 nm）

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法选择

由于聚维酮K90黏度较大，加水不能直接溶解，故前处理主要考察振摇、搅拌、超声3种溶解方法。结果聚维酮K90与水接触后迅速包裹成团状，振摇和超声均无法使之迅速溶解，搅拌能最大程度地破坏分子间的作用力，使样品在短时间内充分溶解。

3.2 硅胶薄层板选择

由于水杨醛吖嗪在紫外光灯（365 nm）下可观察到荧光斑点，故本研究中选择带有荧光剂的GF254薄层板、RP-2 GF254薄层板、RP-18 GF254薄层板。结果GF254薄层板色谱图中荧光斑点的比移值超过0.8，且荧光斑点接近溶剂前沿位置；RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板色谱图中荧光斑点的比移值为0.2～0.8，符合2020年版《中国药典（四部）》通则0502中对比移值的要求。

3.3 展开系统选择

展开系统的极性越大，对化合物的洗脱能力就越大，薄层板上主要荧光斑点离基线越远，比移值就越大［13-14］。本研究中主要以甲醇-水为展开系统，通过改变二者的比例，考察展开系统对薄层色谱的影响。结果不同薄层板的比移值各不同，分离效果也不同。当甲醇-水比例逐渐增大时，RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板展开后的比移值均逐渐增大。调节甲醇-水的比例在适当范围内，RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板展开后的比移值均可达到0.3，符合2020年版《中国药典（四部）》要求，对照品溶液与供试品溶液色谱图中荧光斑点的比移值适中，分离度均较好，提示RP-2 GF254薄层板和RP-18 GF254薄层板均可用于聚维酮K90中肼的检测。为减少有机溶剂对身体的伤害，本研究中最终以甲醇-水（2∶1，V/V）为展开系统，薄层板采用RP-2 GF254。

3.4 点样量选择

点样量过少，荧光斑点不明显，尤其含量较少的供试品溶液的薄层色谱结果偏差较大；点样量过多，点样时间较久，且多次点样时点样中心不易重合，造成斑点异常，色谱图质量不好。