乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠含量测定方法的探讨

鄢雷娜，章红，黎忠良，陈希，肖钦钦，段和祥

1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.江西省儿童医院，江西 南昌 330006

乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液（Levofloxacin lactate and sodium chloride injection）是一种以乳酸、左氧氟沙星、氯化钠等按一定比例配制而成的灭菌大输液剂。该制剂中氯化钠是一种电解质补充药物，氯和钠是人体重要的电解质物质，主要存在于细胞外液，有维持正常的血液、细胞外液的容量和调节渗透压的作用，其含量高低直接威胁人体的健康，因此对氯化钠含量准确测定有着较为重要的作用［1］。为控制该制剂中氯化钠的含量，本文根据氯化钠的结构和性质，参考含氯化钠制剂文献进行了研究［2-7］，建立了用银量法（荧光黄吸附指示剂法）测定224 批乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠含量的方法。该方法以荧光黄指示液为指示剂，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量，加入2.5%硼砂溶液后，pH 值和乙二胺四乙酸（EDTA）对滴定终点均未有明显干扰，终点颜色反应灵敏，经方法学考察和含量测定，结果准确可靠，能有效控制乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量［8］。

1 仪器与材料

1.1 仪器

BT125D 型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，50 mL 棕色聚四氟酸式滴定管。

1.2 试剂

氯化钠基准试剂（汕头市西陇化工厂有限公司，批号：080921），硝酸银滴定液（本单位自制，按《中国药典》2015 年版标准依法配制，精密标定为0.1 mol/L），荧光黄（上海麦克林生化科技有限公司，批号：C10875958），糊精（西陇科学股份有限公司，批号：170507），硼砂（上海实验试剂有限公司，批号：20140817）。2%糊精溶液、2.5%硼砂溶液和荧光黄指示液按《中国药典》2015 年版标准依法配制［9］。

2 方法与结果

2.1 法定检验标准差异

本试验共涉及29 个厂家共224 批样品，现行法定标准中氯化钠含量的检测方法差异较大，涵盖了3 种方法［10-11］，方法具体差异见表1。

表1 法定方法差异比较

有两家厂家的处方中添加了EDTA，在法定检验过程中发现按标准检测时，若未加2.5%硼砂溶液，滴定终点不明显，粉红色不显著，影响试验结果。该注射液10 mL 加水40 mL 的溶液pH 值为4.7 时，再加2 mL 2.5%硼砂溶液后的pH 值约为8.5，可满足荧光黄指示剂需在pH7～10 的溶液中指示终点的需要。

2.2 试验操作方法

根据上述试验结果确定本试验方法为“精密量取样品10 mL，加40 mL 水，5 mL 2%糊精溶液，2 mL 2.5%硼砂溶液与5～8 滴荧光黄指示液，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定，每1 mL 硝酸银滴定液（0.1 mol/L）相当于5.844 mg 的NaCl”［12-13］。

2.3 线性关系试验

精密称取经105 ℃干燥至恒重的基准级氯化钠试剂6.010 5 g，置100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀释定容至刻度，摇匀，作为氯化钠标准储备液。再精密量取5、10、15、20、25 mL 分别至100 mL 量瓶中，加水稀释定容至刻度，摇匀，作为对照溶液，精密量取上述溶液各10 mL 按“2.2”方法依法测定，进行线性回归［14］。线性回归方程：y=4.975x+0.195，r=0.999 9。表明氯化钠在3.005 25～15.026 25 mg/mL的取量范围内，线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密量取2.3 项下氯化钠标准储备液15 mL 至100 mL 量瓶中，加水稀释定容至刻度，摇匀，作为对照溶液，精密量取上述对照溶液各10 mL 按“2.2”方法连续滴定6 次，记录消耗硝酸银滴定液的体积［15］。结果其RSD为0.25%，表明该方法精密度较好。

2.5 稳定性试验

精密量取“2.4 精密度试验”项下的对照溶液，各10 mL 分别在0、4、8、12、16、20、24 h 按“2.2”条件依法测定，记录消耗硝酸银滴定液的体积［16］。结果：RSD 为0.21%，表明对照溶液制备后24 h 内稳定性好。

2.6 重复性试验

精密量取乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液（厂家：A，处方中含EDTA）10 mL 按“2.2”方法，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）连续滴定6 次，记录消耗硝酸银滴定液的体积。RSD 为0.25%，表明该方法重复性较好。

2.7 加样回收率试验

精密量取“2.3”项下氯化钠标准储备液15 mL至100 mL 量瓶中，加水溶解并稀释定容至刻度，摇匀，作为回收加标溶液。取具塞锥形瓶9 个，依次编号①～⑨，精密量取已知氯化钠含量的乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液5 mL（厂家：A，处方中含EDTA）9 份，分别置9 个具塞锥形瓶中，于①②③号瓶中各精密加入回收加标溶液4 mL，加水41 mL，摇匀；④⑤⑥号瓶中各精密加入回收加标溶液5 mL，加水40 mL，摇匀；⑦⑧⑨号瓶中各精密加入回收加标溶液6 mL，加水39 mL，摇匀；按上述条件依法测定，试验数据及结果见表2。结果表明：回收率结果良好。

表2 加样回收率测定结果

2.8 空白对照试验

精密称取与供试品相同浓度的乳酸、左氧氟沙星配成不含氯化钠的空白对照溶液，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定，结果消耗硝酸银滴定液为0 mL［17］。

2.9 试验结果

本试验建立了银量法对224 批乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠含量进行统计分析，结果显示223 批合格，含量范围为98.0%～103.4%；1 批不合格，含量为87.3%。总体合格率为99.6%，平均含量为100.1%；含量为99.4%的批次最多，有35批次。数据分析图详见图1。

图1 银量法数据分析图

3 讨论

3.1 pH 值对滴定终点的影响

该试验所用的荧光黄吸附指示剂是一种有机弱碱，pKa=8，其在溶液中可离解为黄绿色的荧光黄阴离子和质子。因此，当溶液的pH 值小于8 时，荧光黄的电离被抑制，导致荧光黄阴离子浓度变低，较难被AgCl 沉淀吸附，滴定终点颜色变化不明显［18］。实验结果表明，当待测溶液的pH 值为中性至弱碱（pH7～10）时，终点颜色较容易观察。29个厂家生产的该注射液pH 值均偏弱酸性，范围在3.9～5.0 之间。因此，在执行法定标准对乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液进行含量测定时，本品10 mL 加水40 mL 的待测溶液pH 值为4.7 时,加2 mL2.5%硼砂溶液后的pH 值约为8.5 显中性至弱碱性,待测溶液黄绿色荧光显示强烈，滴定终点明显。A 厂家和B 厂家的处方中添加了EDTA，加入2mL 2.5%硼砂溶液后，pH 值从弱酸性调成了中性至弱碱性，可满足荧光黄指示剂需在pH7～10 的溶液中指示终点的需要，此时待滴定溶液黄绿色荧光显示强烈，滴定终点明显［19］，详细结果见表3。

表3 pH值的变化

3.2 EDTA 对滴定终点的影响

本品种29 个生产企业的处方中，有部分厂家处方中添加了EDTA，为了络合部分金属离子调节溶液颜色，在氯化钠滴定过程中，EDTA 会与Ag+稳定结合而干扰AgCl·Ag+形成，进一步会干扰荧光黄阴离子吸附AgCl·Ag+导致滴定终点颜色变化不明显［18］。本试验方法加入了2.5%硼砂溶液2 mL，可把处方中有EDTA 的样品溶液pH 值调整至弱碱性（pH7～10），pH 值和EDTA 对滴定终点的干扰可以忽略不计［20］。

3.3 硼砂溶液对滴定终点的影响

该试验选用乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液（厂家：D，处方中不含EDTA），进一步证实加入2.5%硼砂溶液，pH 值和EDTA 对滴定终点的干扰可以忽略不计，试验结果见表4。

表4 乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液（D厂家生产）加入硼砂溶液对滴定终点的关联影响

4 结论

本试验建立了以荧光黄指示液为指示剂的银量法，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量，加入2.5%硼砂溶液后，pH 值和EDTA 对滴定终点均未有明显干扰，终点颜色反应灵敏，经方法学考察和含量测定，结果准确可靠，能有效控制乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量［21-23］。