兽用碱性恩诺沙星粉的制备和稳定性研究

林章秀 厦门惠盈动物科技有限公司 福建厦门 361023

恩诺沙星也叫做乙基环丙沙星，药物是属于喹诺酮类的抗生素，是指定为动物的专用药物，属于广谱的杀菌药。主要是对支原体有比较强的抗菌作用，也对大肠杆菌、克雷伯杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、嗜血杆菌以及金黄色葡萄球菌、溶血性巴氏杆菌有一定抗菌作用。对绿脓杆菌、链球菌作用较弱，对厌氧菌作用微弱。对敏感菌有明显的抗菌后效应。但恩诺沙星难溶于水，临床应用时，很容易造成药物损失，增加了养殖成本。为提高恩诺沙星溶解度，本试验利用无水碳酸钠与恩诺沙星通过混合法制备碱性恩诺沙星粉，并进行稳定性试验，为该制剂的临床应用提供试验依据。

1 材料和方法

1.1 主要药品与试剂恩诺沙星（浙江国邦药业，批号151015-10，含量99.0%）；无水碳酸钠（唐山三友化工股份有限公司，批号180109）；恩诺沙星对照品（中国兽医药品监察所，批号H0081206，含量99.9%）；乙腈为色谱纯，磷酸、三乙醇胺均为分析纯，购自西陇科学股份有限公司；水为超纯水，实验室自制。

1.2 仪器和设备电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，型号MS105DU）；超声波清洗器（天津市东康科技，型号DS-3120）；实验型pH计（（雷磁）上海仪电科学仪器股份有限公司）；电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司，型号DHG-9247A），；高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司，型号LC-100）；电子秤（厦门懿恒电子有限公司，型号TCS-150）；振荡筛（常州市范进干燥设备厂，型号10022）；V型高效混合机（常州市范进干燥设备厂，型号V-1000）。

1.3 碱性恩诺沙星粉制备按质量比M（恩诺沙星）∶M（无水碳酸钠）=1∶9，称取原辅料，进行过筛。过筛顺序为先恩诺沙星，后无水碳酸钠；筛网目数为60目。过筛后的物料投入V型混合机中进行混合（总物料体积应为混合机总容积的30%～70%）[1]。混合时间10 min，混合结束后采用随机取样法，在混合粉体的不同部位随机取10份样品，进行含量均匀度测定，并以此为评价指标对混合时间进行验证。另取样品，进行水中溶解度、1%水溶液pH测定。产品制备3批次，批号分别为180301、180302、180303。

1.4 碱性恩诺沙星粉检测

1.4.1 碱性恩诺沙星粉含量均匀度的测定 称取碱性恩诺沙星粉样品10份，按恩诺沙星粉（水产用）[2]质量标准进行含量检测，测定以标示量为100的相对含量X，求其均值和标准差S，以及标示量与均值之差的绝对值A。若A＋2.2S≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定[3]。

1.4.2 碱性恩诺沙星粉溶解度的测定 分别称取碱性 恩 诺 沙 星1.00 g、2.00 g、3.00 g、4.00 g、5.00 g、6.00 g、7.00 g、8.00 g、9.00 g、10.00 g、11.00 g、12.00 g，分别置于100 mL的容量瓶中，加入适量纯化水（25±2℃），定容，每隔5 min强力振摇30 s；观察溶解情况，观察30 min，当看不见恩诺沙星颗粒时，即视为完全溶解[3]。

1.4.3 碱性恩诺沙星粉1%水溶液pH测定 称取3批次碱性恩诺沙星粉各1.00 g，加入100 mL纯化水，搅拌使溶解，按溶液pH检测方法进行检测，对检测结果取平均值。

1.5 碱性恩诺沙星粉稳定性试验配制3批恩诺沙星与无水碳酸钠（1∶9）样品，混合10 min，其中1批进行影响因素试验，取3批进行加速试验和长期稳定性试验[2]。

1.5.1 影响因素试验 取1批碱性恩诺沙星粉样品，用纯铝袋包装进行试验。（1）高温试验：置于60℃恒温箱中；（2）高湿试验：置于25℃、相对湿度92.5%的恒温恒湿箱中；（3）强光照射试验：置于照度为4 000 Lux的光照箱中。

每项试验期为10 d，于第5 d、第10 d取样，观察外观和性状，检测pH值、水分及恩诺沙星含量。考察结果与第0 d的检测结果进行比较，进行统计分析，数据以平均值表示。

1.5.2 加速试验 碱性恩诺沙星粉样品取3批，用纯铝袋包装，放置在恒温恒湿箱中，设置温度40℃、相对湿度75%，放置6个月。在第1、2、3、6月时取样，检测外观与性状、水分、pH值、恩诺沙星含量。检测结果分别与第1 d的检测结果进行比较，进行统计分析，结果以平均值表示。

1.5.3 长期稳定性试验 碱性恩诺沙星粉样品取3批，用纯铝袋包装，在25℃、相对湿度60.0%的条件下遮光密封保存24个月，分别于第3、6、9、12、18、24个月月末取样1次，检测外观性状、色泽、pH值、水分及恩诺沙星含量变化。恩诺沙星含量测定采用HPLC法，色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.025 moL/L磷酸溶液（用三乙醇胺调节pH值至3.0）-乙腈（83∶17）为流动相；进样量为10μL；检测波长为278 nm；流速为1.0 mL/min。理论塔板数按恩诺沙星峰计算不低于2 500。分别与第1 d的检测结果进行比较。

2 结果与分析

2.1 碱性恩诺沙星粉含量均匀度结果碱性恩诺沙星粉通过混合机混合10 min，3批次的A＋2.2S数值都小于15，含量均匀度符合兽药典要求，因此，以恩诺沙星与无水碳酸钠1∶9混合10 min的生产工艺合理。见表1。

表1 含量均匀度结果

2.2 碱性恩诺沙星粉溶解度的测定结果当100 mL水中的碱性恩诺沙星为10.00 g时，溶液无可见颗粒，视为完全溶解；而当碱性恩诺沙星粉为11.00 g时，还有可见颗粒，视为不完全溶解（见表2）。因此，确定该碱性恩诺沙星溶解度约为10.00 g/100 mL（不完全精确），完全能满足对于需要通过加药器给药的养殖场。

表2 溶解度测定结果

2.3 碱性恩诺沙星粉1%水溶液pH测定结果由表3测定结果可知：碱性恩诺沙星粉1%水溶液的pH在11.12～11.25。

表3 1%水溶液pH测定结果

2.4 稳定性试验结果由表4可知：碱性恩诺沙星粉在高温、高湿、强光照射条件下放置时，外观和性状、pH均无明显变化；水分逐渐升高，恩诺沙星含量逐渐下降。

表4 碱性恩诺沙星粉影响因素试验结果（n=1）

由表5可知：在加速试验整个过程中，碱性恩诺沙星粉的外观、pH值基本无变化，水分随时间延长逐渐升高，恩诺沙星含量随时间延长逐渐降低。

表5 碱性恩诺沙星粉加速试验结果（n=3）

由表6可知：样品存放2年期间，外观性状未发生明显改变，pH值有降低趋势；水分由1.5%增加至2.5%；恩诺沙星含量由10.03%下降至9.62%，含量下降未超过标示量百分含量的10%，符合规定。说明该碱性恩诺沙星可溶性粉配方及工艺科学、合理、简单易操作，产品质量稳定，有效期暂定2年。

表6 碱性恩诺沙星粉长期稳定性试验结果（n=3）

3 结 论

经过前期小样测试，可以确定该配方比例为质量比M（恩诺沙星）∶M（无水碳酸钠）=1∶9，碱性恩诺沙星粉的含量规格为10%。

稳定性试验，是考察药物随着温度、湿度、光线的变化，放置不同时间变化的规律，为兽药的生产过程、包装材料、保存期、运输条件提供了科学依据，可确定产品的有效期限[4]。兽药的有效期，是衡量药物稳定性的重要指标，一般指的是在（25±2）℃、相对湿度（60%±10%）条件下，当药物含量降解至标示量的90%时所需要的时间[5]。本试验中，包装样品用的纯铝袋，具有很好的遮光、防潮性能，密封性好。用该纯铝袋分装碱性恩诺沙星粉，密封保存24个月，其外观和性状、pH值均无明显改变，水分和恩诺沙星含量略有变化，但检测结果合格、均符合兽药典的要求，因此，有效期可暂定为2年。

该碱性恩诺沙星可溶性粉配方合理、工艺科学，简单易操作，产品质量稳定，可以进行规模生产。