沙利度胺联合化疗对B细胞非霍奇金淋巴瘤免疫功能的影响

李建安 陈慧华 杨兰平 文玲波 贾燕华

B细胞非霍奇金淋巴瘤(B cell non-Hodgkin′s lymphoma，B-NHL)是发生在淋巴造血系统、淋巴器官等免疫系统的一种恶性肿瘤，免疫功能紊乱和微环境分子异常均可导致B-NHL恶化[1]。沙利度胺(thalidomida)是具有抗肿瘤以及免疫功能调节等作用的药物，广泛用于多发性骨髓瘤、大肠癌、肝癌等恶性肿瘤的治疗[2]。研究已证实，沙利度胺联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效确切，安全性高，远期疗效显著[3]。本研究主要探讨沙利度胺联合奥沙利铂和吉西他滨对复发难治性B-NHL患者免疫功能的影响，以期为沙利度胺在B-NHL的临床应用中提供更多依据，现报道如下。

资料与方法

1.一般资料：随机选取2018年1月～2020年12月于笔者医院肿瘤科确诊为复发难治性B-NHL的100例患者，根据化疗方案随机分为观察组(沙利度胺联合奥沙利铂和吉西他滨)和对照组(奥沙利铂和吉西他滨)，每组50例。观察组男性24例，女性26例，患者平均年龄为45.28±6.63岁。对照组男性22例，女性28例，患者平均年龄为44.32±5.23岁。纳入标准：①年龄18～70岁；②临床确诊为B-NHL；③经4～6个周期以CHOP(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松)为主方案化疗后复发或化疗后从未达到过部分缓解或完全缓解的患者；④外周血白细胞计数≥3.5×109/L，血小板计数及肝肾功能正常；⑤近3个月内未接受输血及其他治疗。排除标准：①合并其他肿瘤及传染性疾病；②有化疗禁忌证者；③有严重心血管疾病及自身免疫性疾病者；④糖尿病患者；⑤怀孕或哺乳期女性；⑥对本研究中使用药物过敏者。同时选取笔者医院同期健康体检者50例为正常组，其中男性23例，女性27例，平均年龄为44.56±6.63岁。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经笔者医院医学伦理学委员会审核，所有入组对象均签署知情同意书。

2.治疗方案：患者均于第1天给予静脉滴注奥沙利铂(H20000337，江苏恒瑞医药)100mg/m2(5%葡萄糖溶液250ml)，吉西他滨(H20030104，江苏豪森药业)800mg/m2(0.9%氯化钠注射液100ml)，第8天只给予吉西他滨(剂量同前)。在此基础上，观察组增加沙利度胺片(H32026129，常州制药厂有限公司)治疗，初始剂量为50mg/d，每周增加50 mg/d，最大剂量不超过400mg/d，期间观察患者，若出现不能耐受的毒性不良反应时停止增加剂量或减少剂量，每天口服维持至化疗结束。21天为1个周期，共治疗6个周期。治疗期间给予其他对症治疗及保护措施。

3.样品收集及观察指标：分别于化疗前、化疗结束后24h抽取本研究所有入组对象空腹外周静脉血5ml，分离血清及外周血单核细胞。采用流式细胞术检测CD4+(CD3+CD4+)、CD8+(CD3+CD8+)、Treg(CD4+CD25+)、Th17(CD4+且IL-17A+)细胞比率，结果以百分比表示；ELISA法检测血清中IL-17、IL-25的含量。

结 果

1. CD4+、CD8+T细胞比率的检测：与正常组比较，化疗组治疗前外周血CD4+T细胞比率、CD4+/CD8+比值降低，CD8+T细胞比率升高，差异有统计学意义(P<0.05)；化疗组治疗前各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)；与治疗前比较，B-NHL患者化疗后CD4+T细胞比率、CD4+/CD8+比值明显升高，CD8+T细胞比率明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，观察组治疗后CD4+T细胞比率、CD4+/CD8+比值均明显升高，CD8+T细胞比率明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表1。

2. Treg、Th17细胞比率的检测：与正常组比较，化疗组治疗前Treg细胞比率、Treg/Th17比值明显升高，Th17细胞比率明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；化疗组治疗前各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)；与治疗前比较，化疗组治疗后Treg细胞比率、Treg/Th17比值明显降低，Th17细胞比率明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，观察组治疗后Treg细胞比率、Treg/Th17比值明显降低，Th17细胞比率明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表2。

3.血清IL-17和IL-25的检测：与正常组比较，化疗组治疗前血清中IL-17和IL-25水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；化疗组治疗前各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)；与治疗前比较，化疗组治疗后IL-17和IL-25水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，观察组治疗后IL-17和IL-25水平均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表3。

表3 各组血清IL-17和IL-25水平

讨 论

沙利度胺的抗肿瘤效应多表现在其抗血管生成、抑制炎症等作用。研究指出，沙利度胺联合CHOP化疗可显著提高B-NHL患者完全缓解率[4]，可见沙利度胺在B-NHL治疗中效果良好。CHOP为治疗B-NHL的基本方案，对初治者效果较好，但对复发或侵袭性B-NHL效果欠佳，缓解时间短且易复发[5]。

吉西他滨是阿糖胞苷新一代的嘧啶类似物，具有广谱抗肿瘤活性，作用于S期细胞，抑制DNA合成。奥沙利铂是第3代铂类抗癌药物，对DNA合成也具有抑制作用。吉西他滨联合奥沙利铂治疗复发难治性B-NHL具有一定疗效，然而吉西他滨的使用可影响患者免疫功能，引发血小板、白细胞减少等不良反应[6]。

近年来研究发现，沙利度胺具有免疫调节功能，在抗肿瘤过程中具有重要地位[7]。在多发性骨髓瘤中，沙利度胺治疗可以显著提高CD4+T细胞，降低调节性T细胞(Treg)的水平，改善T细胞亚群分布，提高患者治疗缓解率[8]；李丽等[9]研究显示，沙利度胺治疗弥漫大B细胞淋巴瘤时，可显著提高患者外周血Th17细胞和IL-17水平，表明沙利度胺的抗肿瘤作用与其免疫功能调节作用相关。故本研究运用沙利度胺联合奥沙利铂和吉西他滨治疗复发难治性B-NHL患者，探究其对免疫功能的影响。

机体抗肿瘤免疫反应以细胞免疫为主，T淋巴细胞亚群不仅是细胞免疫的效应细胞，功能各异的细胞亚群也在调节免疫反应中起重要作用。CD4+T细胞是免疫应答中的主要反应细胞，可直接抗肿瘤；CD8+T细胞可对靶细胞产生细胞毒性作用，同时对CD4+T细胞具有调节性抑制性作用，可抑制抗体合成和T淋巴细胞增殖。CD4+T和CD8+T细胞存在平衡关系，其比值下降表明机体处于免疫抑制状态，常表现为CD4+T细胞的亚群Treg免疫抑制功能过强，辅助性T细胞(Th)功能减弱。已有研究指出，较高的外周血Tregs和Treg/Th17比值可能与淋巴瘤患者的预后和化疗反应良好，以及复发率降低有关[10]。Treg细胞是免疫抑制型细胞，可通过直接接触细胞促进CD4+T、CD8+T、NK等免疫细胞的增殖和活化[11]。Th17则通过分泌IL-17家族细胞因子参与机体免疫反应。

当CD4+T细胞活化程度不足以抵抗肿瘤细胞时，机体抗肿瘤免疫能力减弱，导致B-NHL肿瘤细胞不断增殖、恶化进展为难治性肿瘤[12]。B-NHL患者体内也存在免疫抑制现象，表现为外周血CD4+T、Th17比例下降，Treg、Treg/Th17升高[13]。本研究发现，B-NHL患者外周血CD4+/CD8+T细胞比例降低，Treg/Th17细胞比例升高，证实了B-NHL患者存在免疫功能紊乱；化疗后，B-NHL患者CD4+/CD8+T细胞及Treg/Th17细胞比例均得到显著改善，且沙利度胺联合化疗组的改善效果优于单纯化疗组，表明沙利度胺联合奥沙利铂和吉西他滨化疗法可有效改善B-NHL患者T淋巴细胞亚群比例，增强免疫功能，且效果优于单纯化疗，这或许是因为沙利度胺的免疫调节功能减少了单纯化疗所造成的免疫系统不良反应，同时抑制了患者体内的免疫抑制现象。

细胞因子在抗肿瘤免疫及其调节中具有重要作用。IL-17家族细胞因子包括IL-17A、B、C、D、E、F，其中IL-17A通常简称为IL-17，IL-17E又称为IL-25。IL-17是Th17细胞的效应分子，可通过激活NF-κB和MAPK途径来发挥其生物学活性，参与调控炎症和自身免疫性疾病。IL-25促进Th2免疫应答，介导过敏反应和抗寄生虫感染。Ferretti等[14]研究发现，IL-25可以通过抑制新生血管的生成来抑制B-NHL细胞的生长。此外，B-NHL患者治疗缓解后外周血中IL-17升高与较好预后有关，表明上调IL-17和IL-25对增强B-NHL患者免疫功能具有重要作用[15,16]。本研究发现，B-NHL患者外周血IL-17和IL-25水平显著低于健康者，与黄颖等[16]的研究结果相符，进一步说明B-NHL患者免疫功能的下调；经化疗治疗后，B-NHL患者IL-17和IL-25水平均升高，且沙利度胺联合化疗组的效果显著高于单纯化疗组，表明沙利度胺联合奥沙利铂和吉西他滨化疗法可通过显著提高B-NHL患者IL-17和IL-25的水平，进而调节机体免疫反应，发挥抗肿瘤作用。

综上所述，沙利度胺联合奥沙利铂及吉西他滨治疗可通过调节CD4+/CD8+T、Treg/Th17细胞比例和IL-17、IL-25水平，调节T淋巴细胞亚群分布，进而改善B-NHL患者的免疫功能，更利于复发难治性B-NHL的治疗，值得进一步研究予以证实。