强力枇杷露质量标准的改进

宋胜男 李胜楠

摘  要：目的：改进和优化强力枇杷露的质量标准。方法：采用薄层色谱法，通过改变提取方法、点样量梯度变化、薄层板的更换，对强力枇杷露中主要药效成分进行定性鉴别。结果：枇杷叶鉴别中采用水饱和正丁醇两次提取，薄层板的斑点更加明亮;罂粟壳鉴别中采用水饱和正丁醇提取更加方便，用色谱级甲醇作为溶剂溶解供试品，在青岛海洋化工厂生产的硅胶G薄层板上点样斑点更易出现且清晰;薄荷脑鉴别中点样量10-20 μl比较合适。结论：本文建立的方法准确、可靠，可提高强力枇杷露的质量控制水平。

关键词：强力枇杷露;枇杷叶;罂粟壳;薄荷脑;薄层鉴别

强力枇杷露主要由枇杷叶、罂粟壳、薄荷脑、百部、桑白皮、白前、桔梗七味中药成分及有关辅料（蔗糖、枸橼酸、桔子香精、乙醇、苯甲酸钠防腐剂）制成，具有止咳祛痰、养阴敛肺的功效[1]。强力枇杷露的成分测定报道很多，其中薄层色谱鉴别法具有操作简单、专属性强、重现性好等特点。但不同研究中所用的提取方法、展开剂、薄层板各有不同[2-5]，因此在实际操作中存在不出点或出点不明显等情况。本文通过改变提取方法、薄层板和点样量进行研究，所用试剂的不同进行对比考察，确定最佳方案，选择最佳判别依据，以便于质量控制，为强力枇杷露的进一步研究提供依据。

1  仪器与试药

MS105DU电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;YOKO-PN薄层电动喷雾器（武汉药科生物技术有限公司）;WGL-125B电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）;TG16-203离心机（湖南平凡科技有限公司）;DK-98-11数显恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）。

罂粟壳对照药材（ 批号：120957-201507） 、枇杷叶对照药材（ 批 号： 121261-201804 ） 、薄荷脑对照药材（批号：110728-201707）、吗啡对照品（ 批号：171201-201324） 、磷酸可待因对照品（ 批号：671-9402） 均由中国食品药品检定研究院提供;自制薄層板、青岛海洋化工厂生产薄层板、烟台大学生物科学与工程研究所生产薄层板，自制超纯水，其他为分析纯试剂。

2  方法与结果

2.1  枇杷叶的薄层鉴别

取本品30 ml，加30 ml水饱和的正丁醇振摇提取1次，用氨试液30 ml洗涤，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml（少量多次进行溶解，下同）使其溶解，作为供试品溶液1。用水饱和正丁醇提取2次，制备供试品溶液2。另取枇杷叶对照药材4.035 g，加水150 ml，加热回流1小时，滤过，取滤液，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，用氨试液洗涤，正丁醇层液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为对照药材溶液。依照薄层色谱法[6]试验，吸取上述溶液各2-8 μl，于同一块硅胶G薄层板上点样，展开剂为环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（8：4：0.1），展开晾干后，喷上10%的硫酸乙醇溶液，用吹风机吹干后，放置到烘箱中在105℃加热约3-5min，直至斑点显色清晰。在强力枇杷露供试品色谱中，在与枇杷叶对照药材色谱相应位置上，日光下显相同颜色的主斑点。放置到紫外灯（365 nm）下检视，显相同颜色的主斑点，见图1、2。

图1和图2中从左到右依次为样1（2 μl）、样1（4 μl）、样1（6 μl）、样1（8 μl）、枇杷叶对照药材、样2（8 μl）、样2（6 μl）、样2（4 μl）、样2（2 μl），由梯度点样所得图谱可以看出右边显现的斑点比左边显现的斑点更加整齐，且在同样点样量的情况下右边斑点更加清晰。

枇杷叶鉴别中，用水饱和正丁醇提取两次比提取一次更好，斑点显现更加明亮，且斑点对齐情况更好，根据斑点清晰程度判断，样品的点样量控制在2-8μl皆可，自制薄层板跑的相应斑点跑的更高，更快，硅胶G板则是每次跑板斑点各不相同，且大部分情况下，斑点对齐程度不佳。

2.2罂粟壳的薄层鉴别

取样品20 ml，用浓氨试液调节pH值至11～13，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液1。取样品40 ml，加水20 ml，加氨试液调至pH至 11～13，用三氯甲烷40 ml强力振摇提取，分取三氯甲烷液（三氯甲烷层能自行分出来，但存在大量样品在里面，并未分层彻底，为提高提取效率，可以进行离心分离），水浴蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液2。另取取罂粟壳对照药材1.0021 g，加甲醇20 ml，加热回流30 min，趁热滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。再取吗啡对照品（4.46 mg）、磷酸可待因对照品（4.46 mg）和盐酸罂粟碱对照品（4.42 mg），加甲醇4.4 ml制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[6]试验，吸取上述三种溶液各10 μl，于硅胶G薄层板、1% NaOH制备的硅胶G薄层板上点样，展开剂为甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20：20：3：1），展开晾干后，先喷以稀碘化铋钾试液，再喷以亚硝酸钠乙醇试液，于日光下检视。在强力枇杷露供试品色谱中，在与罂粟壳对照药材色谱和吗啡对照品、磷酸可待因对照品色谱相应位置上，显相同颜色的棕褐色斑点。

图3中从左到右依次为样1（4 μl）;罂粟壳对照药材;罂粟壳对照液;样2（24 μl，点到点不进去为止）;样2（9 μl）;样1（3 μl），此时所用的薄层板为硅胶G板，跑板时间为1.5 h，跑板距离为12 cm。图4中从左到右依次为为罂粟壳对照混合液;罂粟壳对照药材;样1（2 μl）;样1（1 μl）;罂粟壳对照液;样1（0.5 μl），此时所用的薄层板为青岛海洋化工厂生产的1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板，跑板时间为1.5 h，跑板距离为12 cm。

罂粟壳鉴别中，用水饱和正丁醇提取和用三氯甲烷提取都可以出点，但用三氯甲烷提取并不是很好分层，造成分离不彻底的现象，故仍然选用水饱和正丁醇提取，其优点为易分层。对供试品提取回收溶剂至干后，分别用分析纯级别的甲醇和色谱级甲醇溶解，通过观察现象发现，溶解后的供试品易出现结晶，采取两种方法进行处理，第一种在结晶的离心管里去掉大型结晶，将溶液转移至新的离心管中，进行稀释，之后进行点样。第二种是将离心管中结晶的供试品溶液直接用针管和滤头进行过滤，过滤后得到的溶液，转移至新的离心管中，进行点样。用提取好的供试品溶液分别在自制薄层板和硅胶G板1%氢氧化钠板进行点样比较，发现自制薄层板不出点，其可能原因为自制薄层板松且板子厚，不易出点。而用硅胶G板进行点样跑板对比，用分析纯级别的甲醇有一个点虽会出现，但非常模糊，且供试品溶液极易析出结晶。用色谱级甲醇虽会析出结晶，但结晶是一大块，不会被稀释，薄层板上的斑点更容易出现，用1%的氢氧化钠板点样需要在喷了显色剂之后，等待很长时间才会陆续出现斑点，且斑点不是特别明显。

2.3薄荷脑的薄层鉴别

取样品20 ml，在30～60℃的条件下，用石油醚40 ml强力振摇提取（分层现象不明显，可用离心机进行分层），挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品4.56 mg，加乙醇4.5 ml制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10-30 μl，于同一块硅胶G薄层板上点样，展开剂为石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（5：1）（25：5），展开晾干后，喷以香草醛硫酸试液-乙醇（1：4）的混合溶液，在100℃烘箱中加热至斑点显色清晰，置日光下检视。试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

图5中从左到右依次为供试品进样量10 μl、20 μl、30 μl、薄荷脑对照品溶液（30 μl）、薄荷脑对照品溶液（20 μl）、薄荷脑对照品溶液（10 μl）、样品（40 μl），由图7可知，样品的最佳点样量为20-30 μl，薄荷脑对照品的最佳点样量为30 μl，样品点样量越多，其主斑点下方尖头越高。此时所用薄层板为硅胶G板，跑板时间为1.5h，跑板距离为13 cm。图6中从左到右依次为薄荷脑对照品溶液、供试品溶液，此时所用薄层板为自制薄层板，跑板时间为30 min，跑板距离为12 cm。

薄荷脑鉴别中，薄荷脑对照品溶液点样量控制在20-30 μl最佳，样品点样量控制在10-20 μl即可，跑板子后，在烘箱中加热3-5 min即可出点明显。用三种板子都可出点明显，区别在于点样量、跑板时间和在烘箱中烘烤时间的不同。

在进行薄荷脑薄层鉴别提取供试品时，在分层不好分的情况下，建议用离心机离心分层，取上层溶液、移入蒸发皿中、挥干，用乙醇溶解供试品残渣时，若溶解出的供试品溶液有一定程度的颜色，则表示提取的很好，若供试品溶液无颜色，在点样时，需注意增加点样量，保证斑点可以出现。三种板子都可以使用，但用自制薄层板进行点样时，需适当增加点样量。通过大量点板子得出，在出现相同程度的清晰斑点的情况下，点样量为自制薄层板>硅胶G板>烟台薄层板。

3 结论

经过质量标准改进研究，实验结果表明用 TLC 法鉴别罂粟壳、枇杷叶和薄荷脑的是可行的。在各自试验条件下， 供试品色谱、对照品色谱或对照药材色谱的色谱特征均较为明显，斑点清晰，分离度较好，可有效地控制强力枇杷露的内在质量。

参考文献

[1]符映均.强力枇杷露的主要药效成分分析和质量标准研究[D]. 南京中医药大学， 2015.

[2]田洪丽，曾宏，宾文.川贝强力枇杷露的质量标准研究[J]. 辽宁中医杂志，2007（06）： 812-813.

[3]吴洋，尹晓东，巩伟，等.强力枇杷露质量标准的提高和优化[J]. 中国药师，2018，  21（06）：1119-1123.

[4]魏春芬.HPLC法同时测定强力枇杷露中吗啡与可待因含量[J]. 药学研究，2016， 35（08）： 466-468.

[5]陈晓颙，杨萍，辜明.强力枇杷露的质量状况分析[J]. 世界最新医学信息文摘，2016， 16（55）： 190-191.

[6]中国药典[S]. 2015 年版. 四部. 57-59.

通讯作者：李胜楠（1992-），女，硕士，山东菏泽人。研究方向：基礎药材的质量标准研究