市售和自摘银杏叶中黄酮类化合物含量对比研究

周晴 吕虹霞 代靖

【摘要】目的：研究市售和自摘银杏叶中黄酮类化合物的含量对比。方法：主要采用超声波辅助法，使用不同浓度乙醇溶液提取银杏叶中黄酮类化合物，另外采用紫外可见分光光度计测定银杏叶中黄酮类化合物含量。结果：市售的银杏叶中黄酮类化合物含量最多。结论：超声提取法省时、高效、节能、环保，适用于银杏叶中黄酮类化合物的提取，且在该条件下陕西省西安市市售的银杏叶中黄酮类化合物含量比自摘银杏叶高。

【关键词】银杏叶;黄酮;超声提取法;紫外可见分光光度法

【DOI 编码】10.3969/j.issn. 1674-4977.2022.02.012

Comparative Study on Flavonoid Content in Commercial and Self-picked Ginkgo Biloba Leaf

ZHOU Qing，Lu Hong-xia，DAI-Jing

（Xi'an International University，Xi'an 710077，China）

Abstract：Objective：To study the content comparison of flavonoids in commercial and self-picked Ginkgo biloba leaf. Methods：Flavonoids in Ginkgo biloba leaf were extracted with different concentrations of ethanol by ultrasonic-assisted method，and the content of flavonoids in ginkgo biloba leaf was determined by UV-visible spectrophotometer. Results：The commercial Ginkgo biloba leaf contained the most flavonoids. Conclusion：Ultrasonic extraction is time-saving，high efficiency，energy saving，environmental protection，suitable for the extraction of flavonoids in Ginkgo biloba leaf，and under the conditions of Xi'an city，Shaanxi Province，the content of flavonoids in Ginkgo biloba leaf is higher than that of self-picked Ginkgo biloba leaf.

Key words：Ginkgo biloba leaf;flavonoids;ultrasonic extraction;UV-visible spectrophotometry

银杏叶除了含有黄酮类化合物以外，同时还含有蛋白质、鞣质、糖类、多酚类等水溶性物质，大量应用于防治心脑血管疾病、神经性疾病、哮喘、癌症等疾病[1]。临床使用的干燥银杏叶药材一般为人工栽培，市面上买到的干燥银杏叶也都是人工栽培的药用银杏叶[2]。除了栽培银杏树，中国很多地区野生银杏树的数量也不少。西安有银杏树的地区就很多，如古观音禅寺、杜陵遗址公园、汉阳陵、唐大慈恩寺遗址公园、大唐芙蓉园等。

黄酮类化合物作为银杏叶的主要成分之一，具有抗氧化、抗炎、抗衰老、抗癌、保肝护肝、抑菌、治疗心血管疾病等作用，对高血压、癌症、冠心病等疾病有显著的疗效[3]。姜晓旭等人[4]的研究证明，银杏叶中黄酮类化合物是治疗心血管疾病的主要有效成分。穆楠[5]的研究证明，银杏叶中黄酮类化合物在抗肿瘤方面具有很大潜力。

近年来，随着科学技术的发展，银杏叶除了作为中药材使用，还被广泛地应用于饮料、化妆品等领域。陈桂光等人[6]的研究表明，以银杏叶和芒果为原料，可以研制出一种新型的营养保健天然饮品，为银杏叶饮料市场的开发提供了一定的依据。刘燕等人[7]在介绍银杏洁面膏和银杏护肤爽的研制方法时简述了银杏在防衰老化妆品中的应用，表明它在化妆品领域也有很大潜力。

提取银杏叶黄酮类化合物主要可以采用浸取方法、超声提取方法、微波技术提取方法、生物酶解提取方法、先进的超临界流体萃取方法[8]。房磊[9]采用超声辅助法的最佳工艺为提取功率80 W、提取时间40 min、提取温度70℃、料液比1：25 （g/mL），此条件下提取出黃酮为27.32 mg/g。杜若源等[10]提取银杏叶中总黄酮采用超声波辅助方法的最优提取条件为：乙醇浓度60%，固液比1：50（m：v），提取时间30 min，浸提物总黄酮含量达到8.075 mg/g，提取率达到80.75%。在张育新等人[11]的研究表明，按照国内的设备和成本现状，银杏叶中黄酮类化合物提取主要采用的是水-乙醇提取法。所以，在乙醇回流的过程中，影响银杏叶中黄酮类化合物提取的重要成因有提取溶剂的浓度（乙醇）、提取溶剂的具体用量、提取次数和提取时间。在本次研究主要采用超声辅助提取法提取银杏叶中黄酮类化合物，在乙醇回流的过程中分析乙醇浓度对银杏叶中黄酮类化合物提取率的影响，同时对比市售和自摘银杏叶中黄酮类化合物的含量，为后期开发利用银杏叶提供广泛发展思路。

1仪器与试药

1.1仪器

电子天平（FA004，宁波市鄞州华丰电子仪器厂）;电热鼓风干燥箱（DHG-9053型，上海一恒科学仪器有限公司）;超声波清洗器（SB-25-12DTDB型，宁波新芝生物科技股份有限公司）;紫外分光光度计（UV754PC型，上海佑科仪器仪表有限公司）。

1.2试药与试剂

所有银杏叶经西安外事学院医学院吕虹霞副教授鉴定为正品。市售银杏叶（产地：陕西，购于西安中药材市场）;自摘银杏叶（产地：陕西，摘自西安外事学院校区主路，新鲜，无病虫害）;蒸馏水;芦丁标准品（中国药品生物制品检定所），无水乙醇（分析纯，天津市天力化学试剂有限公司生产，批号：20210302）;硝酸钠，硝酸铝（分析纯，中国上海振欣试剂厂生产，批号：20080402）;氢氧化钠（片）（分析纯，天津奥普升化工有限公司，批号：20201015）。

2实验方法

2.1黄酮类化合物含量测定

2.1.1芦丁标准溶液的制备

准确称取芦丁标准品5.0 mg，使用浓度为60%的乙醇溶液将其溶解，定量转移到50 mL容量瓶中，将溶液稀释至刻度值后摇匀，配置成为质量浓度为0.1 mg/mL的芦丁标准溶液。

2.1.2标准曲线的繪制

吸取上述配制的标准溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0 mL分别置于6个10 mL的具塞试管中摇匀。分别在6个试管中，先加入5%硝酸钠0.5 mL，摇匀后静置6 min，再加入10%硝酸溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min，最后加入4% 氢氧化钠溶液4.0 mL，使用60%乙醇溶液，定容至10 mL，放置15 min。将加入0.0 mL芦丁的溶液设置为空白对照组。采用紫外可见分光光度计，在波长为516 nm处测定这六组标准溶液的吸光度。用Microsoft Excel软件来绘制标准曲线，纵坐标为吸光度，横坐标为浓度，得出线性回归方程。

2.2测量市售银杏叶黄酮类化合物含量

2.2.1提取市售银杏叶中黄酮类化合物的方法

称取干燥的银杏叶粉末（过80目筛）3 g，精密称定，各取平行3份，置于250 mL玻璃具塞三角瓶中，按料液比（1：7）[12]加入21 mL无水乙醇，在超声功率为500 W的条件下提取60 min后过滤，滤液备用。

2.2.2不同浓度乙醇溶液提取市售银杏叶黄酮类化合物

改变乙醇浓度为50%、60%和70%，按照2.2.1方法提取市售银杏叶黄酮类化合物。

2.2.3测量市售银杏叶黄酮类化合物含量

分别吸取2.2.1和2.2.2的滤液，按2.1.2中的步骤操作，然后测定在510 nm条件下提取液的吸光值，记录数据并计算其产率，选择提取率最高的方案。

2.3测量自摘银杏叶黄酮类化合物含量

采用超声辅助乙醇法提取自摘银杏叶黄酮类化合物，操作方法同2.2。

3实验结果与分析

3.1芦丁标样测定数据分析

根据2.1.2方法测定芦丁标准样品的吸光度，得到表1的数据。

由Microsoft Excel绘制的标准曲线（见图1），其回归方程为：y=1.1571x+0.0154，R²=0.9935。

3.2黄酮类化合物含量测定结果

3.2.1不同乙醇浓度提取市售银杏叶黄酮类化合物的结果

根据2.2.3方法测定市售银杏叶黄酮类化合物的含量，得到表2的数据。

结果：70%浓度水平的乙醇溶液提取量最强，提取率可达0.340%。

3.2.270%乙醇提取市售银杏叶与自摘银杏叶黄酮类化合物的结果

根据3.2.1的结论，采用2.3实验方式进行市售银杏叶与自摘银杏叶黄酮类化合物含量测定。得到表3的数据。

结果：由表3可知，用溶剂为70%乙醇分别提取两种银杏叶，市售银杏叶比自摘银杏叶的黄酮类化合物含量高，其最高提取率为0.345%。

4结论

由上述实验结果知，在1：7的料液比、500 w的超声功率、60 min超声时间情况下，70%的乙醇溶液提取陕西省西安市市售的银杏叶得到的黄酮类化合物含量较高。自摘银杏叶的黄酮含量低可能与其生长环境和采摘时间等因素有关，我们采摘银杏叶的时间为九月，采摘的银杏叶已经有部分发黄，虽然在打粉前将发黄叶片剪去，但是与市售的银杏叶对比，自摘的银杏叶黄酮类化合物含量少。

【参考文献】

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[11]张育新，刘伟毅，杨骏，等.银杏叶提取物的制备工艺优化及质量控制[J].中国药师，2021，24（1）：75-80.

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