沙棘果渣总黄酮不同提取方法比较

冯丽娟

(山西省林业和草原科学研究院，山西 太原 030012)

沙棘(HippophaerhamnoidesL．)，为胡颓子科沙棘属落叶灌木或小乔木，具有较高的营养价值及药用价值。目前，国内沙棘的研发主要为利用果实制作饮料和沙棘食品，沙棘果渣一般被丢弃，不仅污染环境，还浪费资源[1]。据国内外文献报道，沙棘黄酮在沙棘果渣中的含量很高，且具有抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力等药理功效[2]。因此，笔者采用热水浸提法、回流法、超声辅助提取法、微波辅助提取法以及酶-超声双辅助法提取沙棘果渣总黄酮，比较其提取率和方法特性，旨在为沙棘果渣的开发利用提供理论依据及指导。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验材料：沙棘果渣(山西省沙棘饮料厂废弃果渣)，芦丁、果胶酶、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂皆为市售国产分析纯。

试验仪器：电子天平、鼓风干燥箱、电热恒温水浴锅、超声波提取仪、微波提取仪、紫外可见分光光度计、台式离心机。

1.2 试验方法

1.2.1 原料预处理

将沙棘果渣于60 ℃鼓风干燥箱中烘干，粉碎机粉碎，过80目筛后备用。

1.2.2 标准曲线的制作

分别吸取0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL芦丁标准溶液于25 mL容量瓶中，各加30%乙醇至6 mL。加入5%NaNO2溶液1 mL，摇匀静置6 min。加入10%Al(NO3)3溶液1 mL，摇匀静置6 min。加4%NaOH溶液10 mL，加30%乙醇至刻度，摇匀静置15 min。于510 nm处测定吸光度。以X轴为芦丁浓度，Y轴为吸光度，制作标准曲线。

1.2.3 黄酮提取液的获取

本研究采取5种方法提取沙棘果渣总黄酮。

1) 热水浸提法。精确称取3份沙棘果渣粉末，每份1 g(精确至0.000 1 g)，均加入60%乙醇30 mL，在水浴锅中进行浸提[3]，冷却后过滤定容。

2) 回流法。精确称取3份沙棘果渣粉末，每份1 g(精确至0.000 1 g)，按照药典回流法[4]制备黄酮提取液。

3) 超声辅助提取法。精确称取3份沙棘果渣粉末，每份1 g(精确至0.000 1 g)，均加入60%乙醇30 mL，在超声提取仪中进行浸提[5]，冷却后过滤定容。

4) 微波辅助提取法。精确称取3份沙棘果渣粉末，每份1 g(精确至0.000 1 g)，均加入60%乙醇30 mL，在微波提取仪中进行浸提[6]，冷却后过滤定容。

5) 酶-超声双辅助提取法。精确称取3份沙棘果渣粉末，每份1 g(精确至0.000 1 g)，均加入0.05 g果胶酶，60%乙醇30 mL，在超声提取仪中进行浸提[7]，冷却后过滤定容。

1.2.4 总黄酮含量的测定

分别吸取1 mL黄酮提取液于25 mL容量瓶中，按照上述标准曲线制作的方法加入显色剂，于510 nm处测定吸光度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

以X轴为芦丁浓度，Y轴为吸光度，制作标准曲线，结果见图1。

图1 芦丁标准曲线

2.2 沙棘果渣总黄酮含量的测定

不同提取方法沙棘果渣总黄酮含量见表1。

由表1可知，回流法所测得沙棘果渣总黄酮含量最高，为6.60%。该方法主要用乙醇等挥发性有机溶剂浸提，浸提液被加热，溶剂馏出后又被冷凝流回浸出器中浸提，直至有效成分被完全提取。回流法可以将沙棘果渣中的黄酮充分提取出来，但操作复杂、提取时间较长(需要4 h)，且乙醇需要量大。

表1 不同提取方法沙棘果渣总黄酮含量

酶-超声双辅助提取法测得的沙棘果渣总黄酮含量仅次于回流法，为6.28%。该方法同时结合了2种提取辅助方法，生物酶法是利用酶的专一性高效降解并充分释放出原料中的总黄酮，可以提高提取率；超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放和溶出，超声波使提取液不断震荡，有助于溶质扩散。

超声辅助提取法测得沙棘果渣总黄酮含量为5.15%，低于酶-超声双辅助提取法。该方法操作简单，耗时短，仅用30 min，试验条件易于控制。

热水浸提法测得沙棘果渣总黄酮含量为4.57%。该方法是最传统的浸提法，其工艺简单、成本低、不破坏有效成分、安全，适合于工业化生产。但仅限于黄酮苷类物质的提取，提取液中杂质较多(如，无机盐、蛋白质、糖等)，且耗时较长，需要提取120 min。

微波辅助提取法测得沙棘果渣总黄酮含量为3.70%，提取率最低。该方法主要是利用微波对细胞的破壁和加热作用，使细胞内黄酮快速溶出，具有穿透力强、选择性和加热效率高的优点。考虑到连续辐射时间较长，提取液易暴沸、溶剂易挥发，设置提取时间为5 min。若提取时间太短，则不能完全将黄酮提取出来，使提取率降低。

3 结论

采用5种不同方法对沙棘果渣黄酮进行提取，测得的沙棘果渣总黄酮含量存在明显差异，由高到低依次为回流法、酶-超声双辅助提取法、超声辅助提取法、热水浸提法、微波辅助提取法。回流法提取率最高，但是提取时间长，不适合工业化提取。酶-超声双辅助提取法仅次于回流法，且成本低廉、操作简单、省时省力，是一种比较理想的提取方法。

山西是我国沙棘资源大省之一。目前，沙棘果加工成饮料或油之后，果渣一般作为废弃物丢弃，仅有极少部分被用作饲料，造成了极大的浪费[8]。本研究可为沙棘果渣中黄酮类物质的提取提供参考，对沙棘果渣的开发利用具有积极意义。