四种婴幼儿湿疹外用方剂对小鼠急性湿疹的影响

吴白芬 尚 李 尚 怡 彭海燕 刘 录 何芳雁 周志宏 浦仕彪*

1.云南省高校中药饮片工程研究中心 云南中医药大学，云南 昆明 650500；2.云南经济管理学院，云南 昆明 650032

婴幼儿湿疹又称为特应性皮炎，是常见病、多发病，有研究[1]表明新生儿期至3岁是婴幼儿湿疹的高发期。婴儿湿疹确切病因尚不清楚，一般认为是由内、外因素共同作用而引发的变态反应性皮肤疾病，主要与遗传、感染、环境、饮食、皮肤屏障功能破坏及机体免疫功能失调等因素相关，婴儿期免疫系统发育不成熟也是重要的发病因素[2]。中医对湿疹的外治法是根据皮损的性质和发病部位的不同，选择适当的药物和剂型，进行外洗、湿敷、涂抹、喷雾、熏洗或坐浴的方法，具有疗效好、作用直接、疗程短、副反应小的优势[3]，可缓解临床症状，有效改善皮损，避免了外用激素的不良反应，并在一定程度上可控制疾病复发，故越来越受到重视。本文采用DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应及特异性皮炎模型，考察4种云南某中医馆处方、民族民间验方及自拟外用方剂对婴幼儿湿疹的影响，以期为临床应用及进一步开发提供科学依据。

1 材料

1.1 实验动物 雄性ICR小鼠，5～8周龄，体重18～26 g，成都达硕实验动物有限公司，SCXK(川)2015-030。

1.2 试剂 2,4-二硝基氟苯(DNFB，批号：F20120726，中国医药集团上海化学试剂公司)；橄榄油(批号：20160912，国药集团化学试剂有限公司)；丙酮(批号：20160626，天津市富宇精细化工有限公司)。

1.3 受试药品 皮炎平(复方醋酸地塞米松乳膏，批号：1706004H，华润三九医药股份有限公司)；儿肤康搽剂(批号：170807，成都森科制药有限公司)。方剂1(1#)由显齿蛇葡萄、桑白皮及三七组成。方剂2(2#)由显齿蛇葡萄、桑白皮及全蝎组成。方剂3(3#)由白鲜皮、紫草及全蝎组成。方剂4(4#)由显齿蛇葡萄、白鲜皮、紫草、桑白皮、三七及全蝎组成。取各处方药材，分别加水煎煮三次，合并滤液浓缩至含生药浓度依次为0.84、0.80、0.80、1.04 g/mL，于4～8 ℃冷藏备用。

1.4 仪器 HX602Z电子天平(慈溪市大东衡器厂)；ADVENURERTM电子天平(奥豪斯仪器(上海)有限公司)；10～100 μL移液器(Eppendorf)；8 mm打孔器、剪刀、眼科弯镊、止血钳等。

2 方法

2.1 DNFB致小鼠迟发型超敏反应[4]选18～20 g雄性小鼠，试验前背部脱毛。除随机抽取10只为正常对照外，其余造模动物均于腹部涂抹2% DNFB致敏，次日再加强1次。将模型动物随机分为11组，于2次致敏后4 h开始于背部脱毛区及双耳内外涂布给药。正常和模型对照组给予纯水(背0.5 mL、每耳50 μL)，化药对照组给予皮炎平(背10 mg、每耳5 mg)，中药对照组给予2倍稀释的儿肤康搽剂(背0.5 mL、每耳50 μL)，各方剂样品高、低剂量组分别给予5倍及10倍稀释的原液(背0.5 mL、每耳50 μL)；每日2次，连续7 d。致敏第7 d，末次给药后30 min，各小鼠用0.5% DNFB丙酮橄榄油溶液30 μL涂抹右耳内外两侧进行激发，左耳涂等量混合基质为对照。激发后24 h脱颈椎处死动物，剪下双耳，以直径8 mm打孔器取双耳片称重，计算肿胀度即迟发性超敏反应值，并摘取胸腺、脾脏称重，计算脾脏和胸腺系数。结果见表1。

2.2 DNFB致小鼠特异性皮炎模型[5]选用23～26 g雄性小鼠，实验前日腹部剪毛、背部脱毛约2×3 cm2。除随机抽取 11只为空白对照组外，其余动物致敏及分组情况同上。各模型组动物于致敏后第 5、8 天在背部脱毛区涂抹0.5% DNFB混合液50 μL诱发皮炎，并于首次激发后4 h开始于背部脱毛区涂药：空白和模型对照组给予纯水0.5 mL/只，化药对照组给予皮炎平背10 mg、每耳5 mg，中药对照组给予2倍稀释的儿肤康搽剂背0.5mL，每耳50 μL，各方剂样品高、低剂量组分别给予5倍及10倍稀释的原液背0.5mL，每耳50 μL；每天给药2次，连续7 d。第8天于脱毛部位及双耳进行第8次给药，1 h后用0.5%DNFB溶液30 μL涂抹右耳激发，左耳涂抹等量溶媒为对照，6 h后右耳再涂药1次。激发后24 h，脱颈椎处死小鼠，取双耳称重，以两耳片重量之差作为肿胀度指标；剖取胸腺和脾脏称重，计算脏器系数；并取各组动物的背部皮肤进行组织病理学检查。结果见表2及图1。

3 结果

3.1 对DNFB致小鼠迟发型超敏反应的影响 与模型组相比，各给药组连续局部涂药7 d，均可明显抑制DNFB诱导小鼠的耳肿胀(P<0.05，P<0.01)，明显降低脾脏系数(P<0.05,P<0.01)，但对胸腺系数仅有降低趋势而无统计学意义。详见表1。

3.2 对DNFB致特异性皮炎小鼠的影响 与模型组相比，各给药组连续局部涂药8 d，均可显著抑制DNFB诱导小鼠的耳肿胀(P<0.05，P<0.01)，明显降低脾脏系数(P<0.05，P<0.01)，不同程度降低胸腺系数。详见表2。

表1 对DNFB致小鼠迟发性超敏反应的影响

表2 对模型小鼠耳肿胀及免疫器官的影响

图1 皮肤组织病理检查结果图

由图1可见，对照组皮肤各层次正常，真皮层结缔组织疏松，各附属器及脂肪组织正常；模型组表皮明显增厚，表皮突明显延长，角化过度和角化不全，结缔组织变致密，皮下组织见炎细胞浸润；各给药组表皮增厚程度及炎细胞浸润有所减轻。

4 讨论

湿疹病因复杂，现代医学对于本病的具体病因并不明确，认为迟发型变态反应与此病的发病机制密切相关[6]。婴儿湿疹是特应性皮炎在婴儿期的表现，西医至今尚无理想根治手段，临床一般以抗组胺、糖皮质激素、非特异性脱敏等治疗为主，但疗效并不理想，且长期使用不良反应较多[7]。基于对西医治疗的安全性考虑，多数家长更倾向于采用中药外用制剂治疗婴幼儿湿疹，而目前临床应用的方剂大多缺乏科学评价依据和规范的临床总结，一定程度上限制了中医药优势的发挥。本文采用DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应及特异性皮炎模型，验证了4种外用婴幼儿湿疹方剂的药效学基础，为临床推广应用提供了试验依据。