miR-95在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义①

程兰芳

(郑州市金水区总医院病理科，河南 郑州 450000)

胃癌属临床常见恶性肿瘤之一，发病率及死亡率均较高，且多以进展期胃癌患者为主。病理学研究结果显示，微小RNA(miR)在恶性肿瘤细胞的增殖及凋亡过程中具有重要调节作用，可通过调控靶基因转录后水平参与肿瘤发生、发展及化疗药物耐药等[1]。miR-95属miRNA家族重要一员，参与肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤病情进展，可一定程度调控癌细胞增殖与凋亡[2]。但其在胃癌组织中的表达及与胃癌病情进展的关系尚未明确。本研究选取我院行手术治疗胃癌患者122例，旨在研究miR-95在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018-01～2019-12郑州市金水区总医院行手术治疗胃癌患者122例，其中男76例，女46例；年龄39～74岁，平均(57.24±8.19)岁；肿瘤大小3.1～6.6cm，平均(4.82±0.82)cm；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期77例；肿瘤分化程度：高、中分化97例，低、未分化25例；淋巴结转移情况：阳性101例，阴性21例。

1.2 纳入及排除标准

(1)纳入标准：均经超声内镜、病理学检查等确诊；患者各项生命体征均正常；均行胃癌根治术治疗；术前均未采用放疗、化疗等抗肿瘤治疗；患者及其家属均知情本研究并签署同意书。(2)排除标准：合并其他肿瘤；重要器官功能异常；存在手术相关禁忌证；合并血液、免疫系统疾病。

1.3 方法

术中肿瘤离体后，分别取新鲜肿瘤组织及距肿瘤边缘>3cm癌旁正常胃黏膜组织各2份，大小为1.0cm×0.5cm×0.5cm，其中1份经磷酸盐缓冲液漂洗后转入-80℃液氮速冻冰箱中冻存备用，另外一份于2h内实施原代细胞培养。分别充分研磨术中切除的新鲜组织，以200目细胞筛过滤后制成单细胞悬液，将细胞株接种至细胞培养皿，细胞浓度为5×105个/mL，置于37℃、5%CO2培养箱中孵育，培养基为含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基，每1～2d对培养基实施换液，细胞融合至80%～90%时每3d以0.25%胰蛋白酶消化并传代细胞，取对数生长期细胞进行测定。以Trizol试剂(美国，Invitrogen)提取组织细胞总RNA，将RNA以反转录试剂盒(美国，Promega)进行反转录，将所获取的反转录RNA与相应靶基因引物、实时定量聚合酶链反应(qPCR)Master Mix混合建立反应体系后进行qPCR检测，以94℃、30s(第1个步骤)-58℃、30s(第2个步骤)-30s，72℃(第3个步骤)为1个循环连续进行40个循环反应，于每个循环第3个步骤末期收集信号，U6为miRNA检测内参，β-actin为mRNA检测内参，以△Ct、△△Ct方法计算结果，获取mRNA表达相对定量值，miR-95采用微小RNA检测试剂盒(Gene Copoia公司)检测。

1.4 观察指标

(1)手术标本胃癌组织、癌旁组织中miR-95表达水平。(2)不同临床病理特征(TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况)患者胃癌组织中miR-95表达水平。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 胃癌、癌旁组织中miR-95表达水平

手术标本qPCR检测结果显示，胃癌组织miR-95表达量为(0.110±0.016)，高于癌旁组织(0.045±0.022)(t=26.392，P<0.001)。

2.2 不同临床病理特征患者胃癌组织miR-95表达水平

TNM分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌组织miR-95表达量与TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者比较差异无统计学意义(P>0.05)，肿瘤高、中分化患者胃癌组织miR-95表达量低于肿瘤低、未分化患者，淋巴结转移阳性患者胃癌组织miR-95表达量高于淋巴结转移阴性患者(P<0.05)，见表1。

表1 不同临床病理特征患者胃癌组织miR-95表达水平比较

3 讨论

miRNA属内源性非编码RNA分子，多由22个左右核苷酸组成，可与一个或多个mRNA靶向结合，阻断蛋白编码调节基因表达，与多种恶性肿瘤发生及发展密切相关[3]。

既往临床研究发现，miRNA对靶基因转录后水平具有调节作用，进而参与肿瘤发生、发展、抗辐射性及耐药[4]。miR-95属肿瘤细胞中常见miRNA，在结直肠癌、非小细胞肺癌、前列腺癌组织及细胞株中均呈高表达状态，可一定程度影响患者化疗敏感性及放疗耐受性，抑制miR-95表达可有效阻碍癌细胞增殖。miR-95表达与多种癌细胞增殖存在密切联系，可通过促进DKK3使Wnt/β-catenin信号通路激活，进而增强前列腺癌细胞增殖能力，同时可对蛋白p21产生一定调节作用，加速肝癌细胞增殖[5]。本研究为探讨miR-95表达对胃癌患者病情进展的影响，以qPCR法测定患者手术标本中胃癌组织、癌旁组织miR-95表达情况，并进行比较，结果显示，胃癌组织miR-95表达量高于癌旁组织，肿瘤高、中分化患者胃癌组织miR-95表达量低于肿瘤低、未分化患者，淋巴结转移阳性患者胃癌组织miR-95表达量高于淋巴结转移阴性患者(P<0.05)，不同TNM分期患者胃癌组织miR-95表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明与正常胃黏膜组织相比，胃癌组织miR-95表达水平较高，且miR-95在肿瘤低、未分化、淋巴结转移患者中表达增高。综上可知，正常胃黏膜组织相比，胃癌组织miR-95表达水平较高，测定miR-95表达量可一定程度反映胃癌患者病情进展情况。