2019年河南新乡某规模化猪场猪伪狂犬病抗体水平检测分析

饶丹

（信阳农林学院牧医工程学院，河南信阳 464000）

猪伪狂犬病（porcine pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒感染引起的以发热、流产、死胎等主要临床症状表现的一种急性传染病[1]。猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）属于疱疹病毒科（Herpesviridae）、α-疱疹病毒亚科[2]。猪被伪狂犬病病毒感染后会引起不同的临床症状，包括种猪的繁殖障碍、产死胎、木乃伊胎、弱胎等，主要表现症状有共济失调、抽搐，严重的还可能会突然死亡[3]。保育猪感染猪伪狂犬病病毒会有几种主要的临床表现，典型的有神经症状、食欲不振、呕吐不止、高温发热等[4]。其他动物也能够感染PRV，其中猪是伪狂犬病病毒的储存宿主，健康猪接触后会感染此病。自然状态下该病的传播不受季节影响，一年四季都会出现，一般养殖场感染猪伪狂犬病病毒会出现在产仔高峰期，除了猪可以感染外，其他多种禽类也会感染，严重的甚至可能会传播给人。在养殖场病猪、带毒猪和各种鼠类是主要传染源[5]。怀孕母猪感染猪伪狂犬病毒后，产生的病毒会通过胎盘垂直传播给仔猪，哺乳期母猪感染病毒1周后会产生大量带病毒的乳汁，导致仔猪哺乳时被感染，最终导致死亡。15日龄内的初生仔猪若感染病毒，其发病率可达98%，致死率则达100%[6]。

猪伪狂犬病的传播速度快、传染范围广，对养猪行业造成了巨大的影响，并且危害着猪群的健康成长，给养猪业带来了巨大的经济损失。为了有效的控制该病，需要对病猪的临床症状及病理学特征进行科学的分析，并且采取相应的措施，针对性防治。

1 材料与方法

1.1 试验材料

血清全部来自河南新乡某规模化猪场的猪群，该猪场应用的疫苗为猪伪狂犬疫苗。母猪接种gE缺失弱毒疫苗，免疫程序为2月份、8月份肌肉注射，5月份、11月份肌肉注射弱毒疫苗＋灭活疫苗，2 mL/头份。育肥猪在56日龄肌肉注射gE缺失弱毒疫苗，1头份，84日龄肌注接种gE缺失弱毒疫苗，1头份，112日龄肌注接种灭活疫苗，1头份。分别在猪免疫猪伪狂犬病疫苗21 d后从猪的前腔静脉采集血样，检测抗体。

1.2 试验方法

试验采用酶联免疫吸附试验对受免猪群的抗体水平进行评估，检测试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司的HerdChek PRV-gE检测试剂盒。所有试剂在使用前一律恢复至室温。不同试剂盒中的试剂不得混用。试剂使用前应先摇匀，使用后冷藏。具体检测操作步骤如下。

⑴试验前所有试剂应回温至室温18～25℃。给每个微量条贴标签编码。

⑵分别设2孔阴性对照、2孔阳性对照，包被有PRV抗原的孔内分别加入100 μL阳性对照血清（试剂A）和100 μL阴性对照血清（试剂B），阴性孔标记为A1A、B1A；阳性孔标记为C1A、D1A。

⑶于选定的包被有PRV抗原的孔内加入100 μL未稀释的血清样本，重复试验。

⑷将微量板（条）密封后，置于37℃条件下孵育1h。

⑸以PBS-Tween缓冲液将微量板（条）洗涤3次。每次洗涤应将孔充满、沥干水分，叩板以除去全部液体。

⑹每孔中加入100 μL交联物溶液，将微量板密封后于37℃条件下孵育30 min。并重复第（5）步。

⑺每孔中加入100 μL底物溶液，并于室温条件下（18～25℃）孵育15 min。第1孔加入后开始计时。

⑻每孔中加入50 μL终止液，混合均匀，终止反应。终止液加入的顺序应按第（7）步加入底物溶液的顺序。

⑼于酶标仪读取对照试剂和试验样本的光密度值（OD450nm），空气作空白对照。在加入终止液后15 min内读取OD值，避免OD值的波动。

2 结果与分析

2.1 妊娠期母猪伪狂犬gE抗体检测结果与分析

由表1可知，在母猪妊娠前期，其猪伪狂犬gE病毒抗体的阳性率为90%，妊娠中期和后期阳性率为100%。gE抗体阳性率、gE抽检率均达90%以上，说明猪场妊娠母猪野毒感染严重。

表1 妊娠母猪伪狂犬病毒gE抗体抽检情况

2.2 哺乳期仔猪伪狂犬病毒gE抗体检测结果与分析

由表2可知，新生仔猪和断奶仔猪的猪伪狂犬病毒gE抗体阳性率均为100%，很可能是母源抗体通过胎盘进行了垂直传播。

表2 初生仔猪伪狂犬gE抗体抽检情况

2.3 保育期和育肥期猪伪狂犬病毒gE抗体检测结果与分析

由3可知，5～6周龄保育猪猪伪狂犬病毒gE抗体的阳性率为70%，7～8周保育猪的阳性率为50%，9～10周育肥猪的阳性率为40%。说明随着仔猪日龄的增长，猪伪狂犬病毒抗体阳性率逐渐降低，最低降至阳性率40%。猪伪狂犬病毒gE抗体下降的原因主要有2个：一是母源gE抗体在100 d后开始减少；二是野毒感染确实得到有效控制，首免效果较好。

表3 育肥猪伪狂犬gE抗体抽检情况

3 讨论

猪伪狂犬病仍然是我国规模化猪场当前的主要疫病之一，猪一旦感染PRV就会终身带毒，且给猪场带来疫病隐患[7]。科学地引种是猪伪狂犬病防控的关键，引种同时也要综合考虑种猪的健康情况、质量等因素。同时，在引种时一定要做好生物安全防控，防止致病菌通过饲料、人员、生产运送等环节进入猪场[8]。猪伪狂犬病没有有效的治疗药物，主要防治手段是注射猪伪狂犬病毒基因缺失苗。给健康猪注射猪伪狂犬病毒基因缺失苗后不会产生缺失蛋白抗体，因此，可以使用缺失蛋白的特性建立相对血清学检测，以达到将野毒感染猪只和基因缺失苗免疫猪群区分开来[9]。目前，我国使用的猪伪狂犬疫苗主要是gE基因缺失苗，应用gE基因缺失苗免疫，仅通过血清学检测就可以淘汰带毒猪，进而达到净化猪场的目的，该方法有利于规模化猪场开展猪伪狂犬病的净化工作[10]。

对河南新乡规模化猪场猪伪狂犬疫苗接种情况进行分析，PRV-gE抗体检测结果显示，母猪妊娠中期和后期、仔猪哺乳期的猪伪狂犬病野毒感染最为严重，达到了100%，该阶段猪可能由于感染外界病毒导致群体发病。猪保育期和育肥期伪狂犬病毒抗体水平下降，表明随着猪日龄的增长、抗病力不断增强，猪伪狂犬野毒感染逐渐降低。疫苗在一定程度上可以降低猪群的临床发病，但无法彻底消除隐性感染。因此，在做好免疫工作的同时，也要培育猪伪狂犬阴性母猪群。此外，还应结合gE抗体检测和PRV病原学检测，加强对妊娠母猪和哺乳仔猪的监测，发现感染猪只要及时淘汰处理。加大生物安全力度，提高生物安全管理的水平，为伪狂犬病的净化工作提供保障[11]。

4 小结

综上所述，河南新乡规模猪场妊娠期母猪和哺乳期母猪感染猪伪狂犬病毒较严重，保育期猪只疫情逐渐减少，育肥期疫情得到有效控制。建议长期监测抗体，逐步淘汰阳性母猪，哺乳仔猪在出生1日龄通过滴鼻方式接种疫苗，培养阴性后备猪群。