不同提取方法对氯化丁基胶塞中游离硫测定的影响研究

张 华,李 挥,徐业朝,陈 明,李岱岳,杜志斌

(1.河北省药品职业化检查员总队，河北 石家庄 050024;2.河北省药品医疗器械检验研究院，河北 石家庄 050200;3.河北省药品审评中心，河北 石家庄 050024)

引言

药用丁基胶塞，特别是卤化丁基胶塞由于其固有的洁净度、生物特性、密封性和化学稳定性等，在医药包装领域应用广泛。为提高胶塞的密封性和稳定性，在其加工过程中会加入硫化剂、抗氧化剂以及增塑剂等多种助剂。研究指出，胶塞中微量的助剂对胶塞与药物相容性具有一定的影响，卤化丁基胶塞硫化处理过程中不可避免地会在胶塞内残存一些未被化学键合的反应剩余物、不参与反应的物质及热分解的产物如游离硫等，硫磺的应用历史悠久，是最重要的硫化剂之一，而游离硫可能会与药物发生反应，影响和污染药物，随药物进入人体后可能会引起不良反应，危害健康[1-4]。

当前国家标准GB/T15251-2008中测定硫含量的方法包括亚硫酸钠和铜螺旋法，这两种方法均有一定的局限性，不仅实际操作复杂、耗费时间长，而且只适用于常量分析。随着分析测试技术的发展，用质谱法电位滴定法以及色谱法测定游离硫含量的研究不断增多[5-8]。本研究考察了游离硫的四种提取方法，并使用高效液相色谱法对提取液进行测定，实验对比了不同提取方法对测定结果的影响。对卤化丁基胶塞的稳定性、安全性评价提供了参考依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1260 型高效液相色谱仪(Agilent公司)，MS104TS电子天平(梅特勒-托利多)，eppendorf移液枪。

1.2 包材与试剂

对照品游离硫(纯度98%)，河北旭隆化工有限公司；甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮均为色谱纯。氯化丁基胶塞是由某厂家提供的4种产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：Thermo Acclaim120 C18色谱柱(5μm，4.6 mm×250 mm)，流动相：甲醇(A)和水(B)作流动相，梯度洗脱(0～7min，95%A；7～15min，95%A→100%A；15～30min，100%A；30～30.1min，100%A→95%A;30.1～35min,95%A)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：220nm，紫外检测器；进样量：10μL。在该色谱条件下，游离硫对照品溶液浓度均为80μg/mL时，其保留时间为15.326min，保留时间3min附近的峰为溶剂峰，见图1。

图1 游离硫对照品高效液相色谱图

2.2 对照品溶液配制

精密移取游离硫的标准品于量瓶中，同时加二氯甲烷-无水乙醇(1∶1)配成1mg/mL的标准储备液；用二氯甲烷-无水乙醇(1∶1)依次稀释标准储备液配制成分别为80、40、20、10、5、1μg/mL的标准工作液。同时配制空白试剂。

2.3 不同提取方法

(1)方法1：参考王丽[9]等人的研究方法，于磨口硼硅玻璃烧瓶中称定约2g样品，加入20mL无水乙醇-正己烷-丙酮(4∶3∶3)，煮沸回流4h，放冷，定容至20 mL。微孔滤膜过滤即得。

(2)方法2：参考魏君[10]等人的研究方法，选取甲醇-异丙醇(1：1)作为提取溶剂，提取条件为50℃，4h。

(3)方法3：参考冯靖[11]等人的研究方法，使用20mL二氯甲烷-无水乙醇(1∶1)作为提取溶剂，煮沸回流4h，放冷，定容至20 mL，经微孔滤膜过滤即得。

(4)方法4：参考李婷婷[12]等人的研究方法，选取20mL甲醇作为提取试剂，超声30min，静置24h，定容至20mL，经微孔滤膜过滤即得。

2.4 线性关系、定量限和检测限

以对照品质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程，线性范围等见表1。精密量取2.2节中对照品溶液适量，倍比稀释，按2.1节中色谱条件进样测定，分别以信噪比3∶1和10∶1计算检测限和定量限。结果见表1。

表1 回归方程与线性范围

2.5 精密度和回收率

取2.2节下质量浓度为20μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，测定色谱峰面积。结果表明游离硫峰面积的RSD为0.5%(n=6)。精密度良好。按2.3中实验条件分别提取质量浓度为20μg/mL的样品溶液，每个样品平行制备3份，计算回收率，实验结果见表2。

表2 不同提取方法中游离硫的回收率实验结果

2.6 样品含量测定

分别取适量胶塞按2.3节中不同的提取方法制备供试品溶液，再按2.1节色谱条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积并以标准曲线法计算胶塞中游离硫的含量，取平均值。结果见表3，每组平行数据的峰面积相对标准偏差均小于5%。

表3 不同批次氯化丁基胶塞中游离硫不同提取方法的测定结果(μg/mL)

3 结果与讨论

3.1 测定结果分析

经测定发现，在四种胶塞中均提取到游离硫，其中镀膜卤化丁基胶塞中游离硫含量较少，可能与胶塞的生产工艺有关。通过比较4种不同提取方法的测定结果发现：超声处理的样品和加热至50℃处理的样品中游离硫的测定结果数值较小，其与煮沸回流处理的样品相比提取不充分。除此之外，所选用的提取溶剂对胶塞的膨胀程度以及提取溶剂的极性也会显著影响提取结果。图2为同一种胶塞用方法3和方法4分别进行提取，结果均检测到了游离硫，游离硫保留时间分别为15.377min和15.386min，方法3煮沸回流提取效果明显优于方法4。色谱图上3min附近的峰为溶剂峰，因为两种方法所用提取溶剂不同，所以溶剂峰强度有差别。

图2 不同提取方法提取氯化丁基胶塞样品的HPLC色谱图

3.2 小结

考察了不同提取方法测定4种氯化丁基胶塞中游离硫的含量，发现用煮沸回流的提取方法提取效果较好。本研究为评价药用氯化丁基胶塞的稳定性、安全性提供了参考。由于卤化胶塞使用时所接触的药液成分各不相同，在选用此类胶塞时还应结合产品自身特性进行具体的考察。