催产素在绒山羊人工输精中的应用研究

赵 霞,爱伦高娃,马跃军, 樊 东,乌仁图亚,苏雅拉图，乌尼尔夫

(1.内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古 呼和浩特 010031； 2.内蒙古医科大学附属医院；3.赤峰市巴林左旗畜牧工作站；4.赤峰市巴林左旗乌兰达坝苏木动物防疫站5.内蒙古农业大学动物科学学院)

绒山羊是内蒙古自治区具有自主供种能力的特色草食家畜品种，内蒙古自治区是我国绒山羊数量和产绒量第一的优势产区。为保护优质绒山羊品种，提升绒山羊产业的核心竞争力，实现绒山羊产业的转型升级，开展高繁高产型绒山羊的选育以及高端绒肉产品的开发、研发高效的绒山羊人工输精技术并应用于生产实践，实现绒山羊冻精供种，对于降低养殖成本和建立良种繁育体系具有重要意义。

在绒山羊生产中，人工授精是最著名和最常用的繁殖技术，人工输精技术对快速推广良种，扩大种公羊的利用率，减少疾病传播，减少母羊空怀起到积极作用的同时为良种的推广利用提供可靠的系谱档案并节约饲草料以及减少经济支出。随着精液保存技术和同期发情技术的成熟我们可以用保存的精液，通过运输可使母畜配种不受地区和时间的限制，有效地解决供种不足的问题。当前我国农村牧区养羊业分散，优秀种公羊数量少、质量差、常年混群饲养管理、乱交乱配等问题严重。人工输精可以集中供精、集中配种，可充分发挥优秀公羊的作用，成为加快羊群改良步伐的最有效的途径，具有重要现实意义。

同期发情技术更是便于组织配种，可使绒山羊大批量生产，有利于羊群抓膘，节约劳动力，更利于发挥人工输精的优点，扩大利用优秀种公羊，使羔羊年龄整齐，便于管理，做到一年生产2胎或两年3胎，做到均衡上市，全年供应。当前国内绒山羊精液冷冻技术水平与国外同类研究较于过时，且绒山羊冷冻精液解冻后的成活率不稳定，研究报道的受胎率结果差异较大。本研究针对同期发情人工授精情期受胎率低的主要问题，为提高自然发情和同步发情绒山羊在繁殖季节人工授精后的受孕率，我们采用不同的发情处理方法、不同的输精方法进行试验，为提高绒山羊人工输精受胎率的提高提供科学参考依据。

1 材料

1.1 试验药品

产轻松(宁波)10 IU/支、PMSG(1 000IU/支)、孕酮海绵栓(42 mg/支)均由宁波第二激素制品有限公司生产，胚胎保存液(新西兰进口)，青霉素，生理盐水，碘酊，酒精，新洁尔灭等相关耗材。

1.2 母羊

赤峰市巴林右旗养殖户选择繁殖机能正常、体质健壮、营养状况良好，膘情中等以上的适龄母羊，并在预试期内完成驱虫和常规防疫注射。

1.3 种公羊

选择35岁精力旺盛，生殖系统发育正常，两侧睾丸匀称，无疾病和缺陷，性欲旺盛，中等以上膘情、精液品质好的优秀公羊。

2 方法

2.1 母羊的饲养管理

参加输精的母羊均来自同一饲养管理条件的养殖场。配种季节来临之前，及时做好羔羊断奶、整群、预防接种、驱虫、药浴等工作，使参与配种的母羊有充裕的时间来充分抓膘，根据配种计划把母羊组群。在配种时母羊膘情要中上等以上，初次参加配种的母羊体重要求达成年母羊的70%以上。

2.2 母羊的处理

针对XOZ平面和YOZ平面，设计2套相互独立的纠偏控制器。对每套控制器而言，不仅需要考虑位移的偏移，也需要考虑偏斜的角度，输入量分别为偏移ε和角度偏差θ，以及其相应的改变量Δε、Δθ，输出量为支撑油缸的液压缸压力差ΔP。在2套互相独立的纠偏控制器共同作用下，可实现竖井掘进机的纠偏控制。

张小波的同学和出租车司机提供的“中年男子”身高、脸形，特别是头发有点弯的特征，都与李桂明大体相同，然而，在调查李桂明时，却发现他不具备作案时间。

第二组：根据配种计划任选一天在母羊阴道内放置孕酮海绵栓。海绵栓放置后的第10～14 d任意一天撤栓，同时肌内注射PMSG200IU，撤栓后的24 h开始用试情公羊进行试情，早晚各一次，并做好观察记录。并分两组进行输精，输精时一组注射催产素2～4 mL，一组不注射。

2.3 种公羊的饲养管理

借助假阴道，诱导公羊射精。成年公羊每日采精2～3次，连续采精时让公羊休息5～10 min即可采集。

式中：P、Q为线路负载有功功率和无功功率；U为线路首端线电压。可以看出，在线路负载一定的条件下，线路末端电压主要由线路电阻R和电抗X确定，且线路电抗X往往大于电阻R，因此，降低电抗X能有效降解决低电压问题。

2.4 公羊的采精

种公羊要常年注意饲养管理，维持中等以上的膘情。配种以前的一个半月开始加强饲养管理，按配种期日粮标准饲喂，保证饲料中的蛋白质、维生素及矿物质的供给。在配种前45 d开始采精排出附睾积存的大量衰老、死亡的精子并做好精液品质鉴定。

2.5 输精

通过试情挑选出稳定接受公羊爬跨的受体母羊进行输精。上午发情的羊下午输精一次，下午发情的羊隔日上午输精一次。第二次输精时严格检查母羊阴道黏液的变化，当黏液稠而略带黄色、不结块时进行输精；使用开膣器扩张阴道，借助一定的光源找到宫颈外口，然后用输精器把精液输到尽可能送到的深度。本次试验输精时间为母羊发情后的约12～14 h和发情后的22～24 h进行两次输精。催产素组羊输精前20～30 min均注射产轻松(催产素)2～4 mL。

2.6 输精后母羊的管理

输精后的母羊每天补饲优质干草、青干草、青贮饲料，妊娠后期适量补充精料、微量元素等。输精35～40 d后B超仪检测妊娠情况，统计受胎率。

2.7 数据处理

采用单因素方差分析(ANOVA)后，采用Etukey-Kramer检验评估统计学差异，P<0.05被认为是差异显著。

在自然情况下，交配发生在发情初期或前期，而排卵则发生在发情期结束前后，卵子保持受精能力的时间大致为5～6 h，而精子在母羊生殖道内维持受精能力的时间较长，一般为1～2 d。当精子进入生殖道，精子快速运行至受精部位，时间要先于卵子许多时间，在此时间精子得以获能。所以输精应在排卵前充分的时间内进行，以便排卵时在受精部位(输卵管壶腹部)沉积大量精子。因此，总的原则是输精应在卵子排出以前或正在排卵过程中进行，排卵后输精，受精的可能性逐渐降低，甚至不能受精；但也不能过早，否则精子衰老，活力降低，也很难达到受精的目的。在常规输精情况下，每天进行两次人工输精可以得到满意的妊娠率。

3 结果与讨论

3.1 催产素在人工输精中的应用研究

此次试验在9月中旬在同一地点、同一饲养管理条件下，将养殖场羊随机分组实施。输精前20～30 min，我们根据发情羊胎次、年龄、个体大小注射不同剂量的催产素；在进行经宫颈输精时使用带有刻度的自制输精针测量输精针进入宫颈管深度。

结果如表1所示，无催产素处理羊宫颈通透性和催产素处理羊宫颈通透性有显著差异(P<0.05)。无催产素处理羊发情后输精器进入宫颈管深度约0.5～1.0 cm，占发情羊23.21%；注射催产素后发情羊输精器进入宫颈管深度约1～2 cm，占发情羊73.21%。

第一组：在没有同期发情处理的大群羊中用试情公羊进行试情，早晚各一次，试出稳定接受爬跨的发情母羊，并做好观察记录。并分两组进行输精，输精时一组注射催产素2～4 mL、一组不注射。

表1 催产素处理后羊宫颈通透性情况

3.2 不同发情处理方法及输精次数对妊娠率的影

我们对用不同方法处理的发情母羊进行单次和两次输精，输精后的第35～40 d，B超进行妊娠鉴定，输精后妊娠率如表2所示。自然发情组妊娠率和同期发情组妊娠率有显著差异(P<0.05)；在自然发情组催产素处理羊妊娠率显著高于无催产素羊妊娠率；单次输精和两次输精妊娠率无显著差异(P>0.05)。同期发情组催产素处理羊妊娠率显著高于无催产素组妊娠率(P<0.05)；单次输精和两次输精妊娠率无显著差异(P>0.05)。

为了改善羊子宫颈的通透性，尽可能地把精液输入子宫内较深的部位，本研究提供了自然发情、同期发情山羊使用催产素进行处理，采用新鲜精液进行人工授精后的绒山羊妊娠率数据。与其他研究一致，我们的研究也表明人工授精后的妊娠率是受多因素影响的，未进行催产素处理的自然发情、单次输精山羊最低妊娠率(48%)这个值不能令人满意的一个原因可能是输精时间和排卵时间之间的差异。山羊的发情持续时间在24～48 h之间变化较大，排卵往往发生在发情期结束前后，在发情行为开始后的9～37 h都有可能排卵，所以输精应在排卵前充分的时间内进行，以便在排卵时在受精部位壶腹部形成大量精子。故此，在稳定接受试情公羊爬跨发情开始时进行人工授精会导致妊娠率下降，这可以解释上述结果。

表2 不同发情处理、不同输精方法、输精次数对妊娠率的影

3.3 讨论

母羊子宫颈结构特殊，是一括约肌样的结构，向后突入于阴道内。它的特征具有很厚的壁和一条狭窄的管腔。在反刍动物中，这些凸起形成横的或螺旋形的互相契合的嵴，形成轮状环，通常有四个环，它们在牛羊上特别显著，互相契合而将子宫颈严密地封锁。这些轮状环结构和加上缺乏有效的人工授精方法是造成妊娠率低的主要原因之一。试验发现宫颈内授精越深，精子到达受精点越多，受精率随之提高，从而致使母羊妊娠率增加。在宫颈部分穿通时，部分或全部精液会回流到阴道内，而阴道内的酸碱度对精子不利；在子宫颈中段穿刺术中，大量精子几乎在子宫颈环内进入死胡同，无法进入子宫内。所以常规输精和过宫颈第一皱褶输精受胎率低是可以理解的。

参加试验的羊按计划分两组进行输精。第一组羊为大群试情挑选的自然发情羊，第二组为采用孕酮海绵栓进行处理后发情的羊。

“昆北”阴平声字“家”的唱调（《紫钗记·折柳》【寄生草】“可笑自家”，761），该单字唱调的过腔是。其中的即第一节级音性过腔，即第二节主调性过腔，由此构成的也是“级音+主调”两节型过腔。

由于羊子宫颈末端有4～5个漏斗状环，因此经宫颈宫内输精，子宫颈是一个强大的屏障。目前，在山羊的人工输精，特别是冷冻精液的输精，只有通过腹腔镜辅助宫内人工授精术才能获得较为满意的妊娠率。但其成本、侵入性和对专业劳动力的需求限制了腹腔镜输精的广泛使用。针对催素对宫颈扩张的有效作用，本研究将催产素用于经宫颈人工输精工作中。经宫颈人工输精技术是具有无创性输精技术，除品种外，冻精质量、精子数量、母羊情况和输精时间、输精次数的影响外，宫颈的穿透性直接影响精液能否输送到授精部位。壶腹部是经宫颈输精成功率的重要因素。

经宫颈人工授精时输精针通过时，母羊子宫颈需要扩张。因此，我们在受精前20 min给母羊注射催产素。催产素启动胶原分解酶过程，导致宫颈扩张，有记录表明催产素引起母羊宫颈扩张。这种效应是由COX2mRNA的表达和PGE2的产生介导的。PGE2开始重构宫颈细胞外基质，导致宫颈扩张。此外，催产素还可提高胚胎移植过程中损伤的胚胎、宫内、宫颈的修复功能速度。另外，催产素增加子宫收缩，但对精子转移到壶腹部没有任何有害影响。

本试验发现自然发情、同期发情羊使用催产素处理后宫颈通透性从不使用催产素母羊宫颈通透性大幅度提高；发情后输精时输精器从宫颈管进入的深度约0.2～0.5 cm，占发情羊的(23.21%)提高到了输精器进入宫颈管深度(1.5～2.0 cm以上)，占发情羊的(73.21%)；从表1发现使用催产素、两次人工授精母羊的妊娠率都有提高的趋势。所以不难发现，人工授精后成功受孕的其他先决条件是，在排卵前立即将足够的可受精精子存入子宫颈内。在本研究中，催产素的使用提高了宫颈松弛度，是输精器能够深部输精，使精子沉积更深，致使受胎率明显高于自然发情，无催产素处理母羊人工输精后的受胎率。

2.1.2 子宫出血常见的4种类型:(1)月经过多:周期规则,但是经量过多(>80m1)或者经期延长(>7天);(2)月经频发:周期规则,但是短于21天;(3)子宫不规则出血:周期不规则,可在两次月经之间的任何时候发生出血;(4)月经频多:周期不规则,经量过多。

两次人工输精10～12 h的间隔提供了更高的精子细胞，这也可能是更好的怀孕结果的一个原因。两次输精的效果取决于排卵有关的第一次授精的时间。因此，在发情初期进行第一次授精比在发情中期或发情末期进行第一次授精的效果更可靠。在发情后10～12 h和20～22 h进行两次输精的效果有可能是由于输精是人工的，所以有充足的精子减少了受精前卵子的等待时间；此外，两次输精可能会阻止与排卵有关的输精过早进行的可能性。两次输精的效果取决于第一次输精与排卵的关系。在本研究中，两次输精妊娠率均有提高的趋势，但无显著差异 。

本方法建立了一种适用于中国西北降水量少的地区降尘总量采集与测试方法，克服了液体样品少的问题，把液体样品和固体样品集中处理成固体样品一次性测试，减少了测试的成本与误差。方法对采样的具体要求进行了讨论，对方法的准确度、精密度、加标情况进行了验证，得到了满意的结果。

与此形成鲜明对照的是中共的宣传。中共提出的“打倒军阀”“打倒帝国主义”“打土豪分田地”等口号深入人心，在大革命时期几乎主导了国民党的意识形态宣传。胡汉民在“四一二”清党后，对中共口号的威力仍心有余悸，认为口号是中共的一大利器，“即社会上耳熟口顺恬不为怪者——多半为共产党所制造”㉖。中共意识形态宣传的巨大影响力主要得益于中共抓住了时代精神，体现了当时一般民众的现实需求。

同步发情山羊的妊娠率达到了令人满意的水平，同期发情羊妊娠率均高于自然发情羊妊娠率。在同步山羊中，孕激素的初步分布通过负反馈调节垂体LH的分泌，改变下丘脑促性腺激素释放激素GnRH的分泌。它导致海绵停药后黄体生成素同步释放，并与注射的PMSG使大量卵泡发育，进而同步排卵。本研究中单次人工输精和两次人工输精妊娠率差异不显著，说明次数对怀孕率影响不大。同步发情对人工输精成功的积极影响还表现在，同步发情山羊的总妊娠率(76.15%)显著高于自然发情羊总妊娠率59.17% (P<0.05)。发情同步导致大量母羊同时发情和集中排卵，在被受精成功的最佳时间排出成熟卵子并能受精产羔。

在实际的生产中，我们使用孕酮海绵栓对母羊进行同期发情处理，所以生殖系统会发生不同程度的炎症，导致常规输精方法输精妊娠率较低，本研究使用催产素改善宫颈管的通透性，通过经宫颈输精方法，使用特制的输精针尽可能避开生殖道内的炎症部位和宫颈皱褶这一屏障，把精液尽可能地注入母羊宫颈深部，是一种“无创伤性深部输精技术”。当精液注入子宫深部时，精液沉积在受精地点较近的地方，特别有利于精子和卵子的结合，与常规人工输精方法相比较具有明显的优势。所以使用催产素经宫颈输精技术的应用研究使输精后的妊娠率得到了很大幅度的提升，使当前供种不足的情况下使用新鲜精液、冷冻精液进行人工输精提供了有力的技术保障。

过宫颈输精是将输精抢头插入到子宫颈口内进行输精的一种方法。不同动物宫颈管长度、弯曲度和穿透性差异较大，品种、年龄、产羔史等因素影响输精器的穿透深度。与绵羊相比山羊特定的特征(对疼痛高度敏感，需要镇静和局部麻醉)限制腹腔镜输精来提高妊娠率。所以在山羊人工输精、冷冻精液输精工作中为得到更好的妊娠率必须缩短输精时间，需要我们科研人员对经宫颈输精技术进一步的探索研究，以廉价、非手术的输精技术提高绒山羊人工输精妊娠率，减少创伤、节约成本，争取取得腹腔镜输精同样的高受胎率。

本研究证明在生产中进行人工输精时我们可以配合催产素进行经宫颈人工输精提高妊娠率是一种高效、廉价、实用的比阴道输精技术更为有效的输精技术。利用经宫颈输精技术进行新鲜精液、冷冻精液是一项很有前途的技术，有望成为绒山羊、绵羊品种遗传改良的重要手段。当前世界各地都在进行研究，以克服人工输精妊娠率低的问题，特别是羊冷冻精液妊娠率低的技术难关。本研究中我们对精液输精器的改进和外源性宫颈扩张药物的使用进行了应用研究，但还需要更深入了解山羊、绵羊的宫颈生理结构和发情时宫颈自然扩张的机制，以便对羊进行人工输精，特别是冷冻精液进行经宫颈输精以获得满意的妊娠率。

原辅料采购入库起始于采购中心的采购订单，仓储依据采购订单核对入库物料的品种、规格及数量进行核对，而质检科及三级站按照质量标准对入库物料进行质量抽检，两方面检查通过后即可完成入库。