屠宰场犬新孢子虫和弓形虫的感染情况调查

王英华 ， 靳 冬 ， 杨玉荣

(1.河南省动物疫病预防控制中心 河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室 ， 河南 郑州 450008 ； 2.河南农业大学牧医工程学院 ， 河南 郑州 450000)

犬新孢子虫和弓形虫是呈世界性分布的重要寄生虫[1]。犬是犬新孢子虫的主要终末宿主，可以排泄出对环境有抵抗力的卵囊。犬新孢子虫是导致牛流产的重要原因[2-3]。弓形虫病属人兽共患病，由于犬与人及猫的关系密切，因此犬弓形虫病的感染情况可以反映当地弓形虫病的流行特点。犬可以通过吞食被弓形虫卵囊污染的泥土，或采食含弓形虫包囊的生肉而感染弓形虫。犬还可以经机械传播途径将弓形虫卵囊传染给人类[4]。

目前，我国宠物犬的弓形虫血清学流行率为11.1%[5]，尚未从犬的组织中分离到弓形虫。青海(31%，25/80，牧羊犬)、乌鲁木齐(17%，5/29，宠物犬)、黑龙江(20%，95/476，乡村犬)和河南(9%，7/78，牛场犬)均有关于犬感染犬新孢子虫的报道[6-9]。本试验旨在了解吉林、河南、安徽三省犬新孢子虫和弓形虫的血清流行病学情况，并分离弓形虫。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 吉林、河南、安徽三省的屠宰场采集425份犬心脏(表1)，收集心脏血液样品，分离血清。第1批样品(96份)采集于2013年10月份，第2批样品(329份)采集于2014年4月份。

1.1.2 试剂 改良凝集试验(Modifiedagglutination test，MAT)和犬新孢子虫凝集试验(Neosporaagglutination test，NAT)抗原，均由美国农业部J.P.Dubey课题组赠送。

1.2 方法

1.2.1 血清学检测 采用MAT[10]检测425份犬血清样品中的弓形虫抗体。采用NAT[11]检测96份血清样品中的犬新孢子虫抗体。所有标本以1∶25效价作为2种寄生虫的最低阳性判断阈值，分别以1∶25、1∶50、1∶100、1∶200的稀释倍数来检测血清抗体。另外，弓形虫补充1∶10的稀释度。

1.2.2 动物接种试验 从第1批样品中选取弓形虫抗体阳性(MAT≥10)心脏(n=14)，取心肌50 g(小犬心脏取30 g)分别用胃蛋白酶消化，并用小鼠做生物学测定[9]。主要操作步骤：组织用生理盐水冲洗后匀浆，与盐酸胃蛋白酶溶液混合，37 ℃消化60 min，皮下注射5只小鼠(含2只IFN-γ基因敲除小鼠)，所有接种小鼠正常饲养并每天观察症状。死亡或发病小鼠，取肺脏进行涂片检测弓形虫速殖子。未出现症状的小鼠于接种后41 d采血通过MAT(1∶100稀释度的血清)检测弓形虫抗体。所有接种小鼠于接种后48 d进行安乐死，取脑组织做压片，检测脑组织中是否有弓形虫包囊[12]。

2 结果

96份样品中检测出6份犬新孢子虫阳性样品，占6.25%；其中2份样品滴度为1∶25，3份滴度为1∶50，1份滴度为1∶100，并且所有阳性样品的犬年龄都在1岁以上(P<0.05)。6份阳性样品均来自吉林的43份样品(占13.9%)，而河南和安徽的53份样品中没检测出阳性抗体(P<0.05)(表1)。

425份样品中检测出弓形虫阳性的样品共35份(占8.24%)，其中15份样品滴度为1∶25，14份滴度为1∶50，6份样品滴度为1∶100，未检测出滴度为1∶200及以上的样品(表1)。35份阳性样品中34份阳性样品的犬年龄都在1岁以上(P<0.05)，且均来自吉林(P<0.05)。3.13%(3/96)的样品存在犬新孢子虫和弓形虫犬交叉感染。14份弓形虫阳性心肌样品，未观察到弓形虫包囊或住肉孢子虫包囊，接种小鼠后，小鼠未呈现弓形虫感染的临床症状，血清抗体呈现弓形虫抗体阴性，未分离出弓形虫活虫株。

表1 吉林、河南和安徽三省屠宰犬犬弓形虫和犬新孢子虫的血清流行病学调查

3 讨论

先天性传播、采食含有病原的组织器官和吞食卵囊是感染犬新孢子虫病的3种途径。犬先天性感染犬新孢子虫病少见报道，多数犬是在出生后感染的，而且年龄大的犬阳性率高于幼龄犬[1,13]。本调查中6份犬新孢子虫阳性样品均来自吉林(均>1岁)，而河南和安徽的样品中没检测出阳性抗体，可能与来自这两省的犬年龄大多数<1岁有关(有53份样品，其中<1岁的犬有50只)。关于犬吞食犬新孢子虫卵囊而感染犬新孢子虫病的报道也少见。本调查中的犬主要来源于乡村，食物以剩饭为主，也捕食鼠、鸟，但还未从小动物体内分离出活的虫体[1]。给犬饲喂患犬新孢子虫病的牛、羊横纹肌、肝脏、胎盘及大脑，均能排出犬新孢子虫卵囊，但不是所有排出卵囊的犬血清抗体都是阳性[1]。犬不食生肉可有效预防犬新孢子虫病。

我国犬新孢子虫病的流行范围在17%～31%[6-9]。与欧洲、美洲及大洋洲犬新孢子虫的流行情况(2%～100%)比较，亚洲国家的犬新孢子虫抗体阳性率(0%～31%)较低[1]，本调查结果显示，犬的阳性率为6.25%。犬新孢子虫感染怀孕恒河猴，胎儿体内均可分离到犬新孢子虫速殖子[14]，由此推断，犬新孢子虫经胎盘传播也可能发生在人类。

与我国其他地区犬弓形虫抗体阳性率(1.3%～40.3%)比较[5,12]，本调查中犬弓形虫抗体阳性率为8.24%。由于不同的调查结果选取的检测方法和临界值不同，所以这些结果并没有严格的可比性。本试验没有成功分离出弓形虫，可能与弓形虫在心脏分布的数量有关。犬肉可食用，生食犬肉或食用未完全煮熟的犬肉可能会感染犬新孢子虫和弓形虫，应当引起公共卫生安全的重视，加强检疫和监督。