7种杀菌剂对小粒材小蠹3种伴生镰刀菌的室内毒力测定

章宇 梁甜 巨云为 朱海军 吴天昊 周洁璐

摘要：为了筛选出能有效抑制小粒材小蠹伴生镰刀菌的杀菌剂，在实验室条件下，采用菌丝生长速率法，选用25%吡唑醚菌酯悬浮剂、450 g/L咪鲜胺水乳剂、40%百菌清悬浮液、25%氰烯菌酯悬浮剂、430 g/L戊唑醇悬浮剂、30%丙硫菌唑悬浮剂、42.4%唑醚·氟酰胺悬浮剂对小粒材小蠹3种伴生致病菌腐皮镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（F. proliferatum）和藤仓镰刀菌（F. fujikura）进行室内毒力测定。结果表明，7种杀菌剂对3种致病镰刀菌表现出不同程度的抑制作用，其中450 g/L咪鲜胺对腐皮镰刀菌和层出镰刀菌的毒力最强，EC50分别为10.75、11.47 μg/mL;450 g/L咪鲜胺和25%氰烯菌酯对藤仓镰刀菌的毒力较强，EC50分别为1.63、3.85 μg/mL。综上所述，450 g/L咪鲜胺的毒力最强，且在浓度为225～450 μg/mL时对3种镰刀菌的抑制率也最高，表现出较强的抑制作用。

关键词：小粒材小蠹;镰刀菌;杀菌剂;毒力测定;菌丝生长速率法

中图分类号： S763.38  文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2022）08-0128-05

小粒材小蠹（Xyleborus saxeseni）主要危害华山松（Pinus armandii Franch.）、杨树（Populus L.）、苹果（Malus pumila Mill.）、山核桃（Carya cathayensis Sarg.）等林木，是一种食菌小蠹。食菌小蠹在蛀入树干后，会将自身携带的真菌释放到坑道内。这些虫道真菌不仅能供小蠹虫及其后代取食，还能借助食菌小蠹的危害进行传播，破坏植物的抗性机制，削弱树势，对林木造成严重危害[1-3]。因此国内外越来越多的学者开始致力于研究食菌小蠹及其伴生致病真菌。本研究前期从小粒材小蠹上分离出多种伴生菌，其中有3种镰刀菌分离率高，致病性强，分别为腐皮镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（F. proliferatum）和藤仓镰刀菌（F. fujikura）。

镰刀菌主要通过侵染植株的维管束系统致使植株表现出萎蔫、腐烂、根腐等一系列病症，危害严重时甚至导致寄主植株整株死亡，对作物的产量和品质造成严重的威胁，而目前见效快、成本低、使用方便的化学防治法仍是降低镰刀菌危害的主要防治手段[4-5]。宁楠楠等利用5种杀菌剂对马铃薯干腐病菌三线镰刀菌（F. tricinctum）、尖孢镰刀菌（F. oxysporum）和木贼镰刀菌（F. equiseti）进行毒力测定，结果发现60 g/L戊唑醇的毒力较强，甚至在稀释500～1 000倍时对3種病原菌也能表现出较强的抑制作用[6]。张健采用菌丝生长抑制法和孢子萌发抑制法，分析了5种杀菌剂对受害苗上分离出的尖孢镰刀菌的毒力效果，发现异菌脲和咯菌腈这2种药剂均能很好地抑制尖孢镰刀菌的菌丝生长和孢子萌发[7]。

本研究通过前期多次预试验的药剂筛选，最后决定采用吡唑醚菌酯、咪鲜胺、百菌清、氰烯菌酯、戊唑醇、丙硫菌唑和唑醚·氟酰胺这7种药剂对小粒材小蠹的3种伴生镰刀菌进行室内毒力测定，旨在为高效防治小粒材小蠹及其伴生镰刀菌提供新思路。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

于2021年3月4—28日在南京林业大学昆虫分子毒理实验室开展本试验。

1.2 试验材料

1.2.1 供试菌株 实验室前期从小粒材小蠹虫体上分离出的伴生致病菌腐皮镰刀菌、层出镰刀菌和藤仓镰刀菌。

1.2.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基。

1.2.3 供试药剂 本试验所用的药剂种类、生产厂家、农药浓度见表1。

1.3 试验方法

1.3.1 制备含药培养基 将上述7种药剂母液依次稀释至一定浓度（表1），在无菌操作台内分别把500 μL不同浓度的药剂加入50 mL培养基中，混匀后制成含药培养基，以加无菌水的PDA平板作对照（CK），每个处理重复3次，并在培养基内加入少量的卡那霉素和氨苄西林以避免细菌污染[8]。

1.3.2 毒力测定 采用菌丝生长抑制率法进行毒力测定[9-10]。用内径为0.582 cm的打孔器沿试验菌株边缘打孔获得菌饼，将菌饼接种在不同种类的含药培养基中间。菌丝面朝下置于25 ℃恒温培养箱内培养。当对照组菌落菌丝长到4/5时，即可测量所有培养基的菌落直径（十字交叉法，用游标卡尺进行测量），计算菌丝生长抑制率，抑菌率计算公式如下：

抑菌率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）×100%。

将7种药剂5个浓度梯度下菌落生长的抑菌率换算成抑制概率值，作为因变量（y），药剂浓度的自然对数值作为自变量（x），利用最小二乘法建立“浓度对数-概率值”直线方程[11]。用Excel 2019和DPS 7.05软件求出相关系数（r）、抑制中浓度（EC50）及毒力回归方程（y=ax+b），以比较不同药剂对病原菌的毒力效果。

2 结果与分析

2.1 7种杀菌剂对腐皮镰刀菌的抑菌效果

由表2可知，对腐皮镰刀菌来说，450 g/L咪鲜胺浓度为4.5～450 μg/mL时，抑菌率为45.43%～100%;30%丙硫菌唑浓度为30～30 000 μg/mL时，抑菌率为39.39%～80.82%;430 g/L戊唑醇浓度为43～430 μg/mL时，抑菌率为32.03%～68.44%;25%氰烯菌酯浓度为250～25 000 μg/mL时，抑菌率为2.43%～61.61%;40%百菌清浓度为400～40 000 μg/mL时，抑菌率为27.48%～50.50%;25%吡唑醚菌酯浓度为25 000～250 000 μg/mL时，抑菌率为20.14%～41.65%;42.4%唑醚·氟酰胺浓度为42 400～424 000 μg/mL时，抑菌率为28.19%～49.07%。

2.2 7种杀菌剂对层出镰刀菌的抑菌效果

由表3可知，对层出镰刀菌来说，450 g/L咪鲜胺浓度为4.5～450 μg/mL时，抑菌率为30.29%～97.60%;30%丙硫菌唑浓度为300～300 000 μg/mL时，抑菌率为51.44%～75.56%;430 g/L戊唑醇浓度为43～430 μg/mL时，抑菌率为27.26%～70.42%;40%百菌清浓度为400～40 000 μg/mL时，抑菌率为19.96%～61.56%;25%氰烯菌酯浓度为25～25 000 μg/mL时，抑菌率为1.54%～52.62%;25%吡唑醚菌酯浓度为25 000～250 000 μg/mL 时，抑菌率为5.76%～24.20%;42.4%唑醚·氟酰胺浓度为42 400～424 000 μg/mL时，抑菌率为16.54%～34.09%。

2.3 7种杀菌剂对藤仓镰刀菌的抑菌效果

由表4可知，对藤仓镰刀菌来说，450 g/L咪鲜胺浓度为4.5～450 μg/mL时，抑菌率为91.62%～100%;25%氰烯菌酯浓度为2.5～250 μg/mL时，抑菌率为50.36%～84.95%;430 g/L戊唑醇浓度为4.3～430 μg/mL时，抑菌率为25.15%～80.03%;30%丙硫菌唑浓度为3～3 000 μg/mL时，抑菌率为16.16%～85.52%;40%百菌清浓度为400～40 000 μg/mL时，抑菌率为56.24%～76.59%;25%吡唑醚菌酯浓度为2 500～250 000 μg/mL时，抑菌率为53.84%～65.51%;42.4%唑醚·氟酰胺浓度为424～42 400 μg/mL时，抑菌率为45.55%～60.08%。

2.4 7种杀菌剂对腐皮镰刀菌的毒力测定

由表5可知，7种杀菌剂对腐皮镰刀菌的EC50值由小到大依次为450g/L咪鲜胺（10.75μg/mL）、30%丙硫菌唑（85.12 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（113.27 μg/mL）、25%氰烯菌酯（10 636.57 μg/mL）、40%百菌清（24 543.86 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（454 757.34 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（578 930.14 μg/mL）。因此，450 g/L咪鲜胺对腐皮镰刀菌室内毒力最强，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.5 7种杀菌剂对层出镰刀菌的毒力测定

由表6可知，7种杀菌剂对层出镰刀菌的EC50值由小到大依次为450 g/L咪鲜胺（11.47 μg/mL）、30%丙硫菌唑（64.58 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（179.32 μg/mL）、40%百菌清（5 410.75 μg/mL）、25%氰烯菌酯（67 112.66 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（1 827 947.33 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（3 678 352.65 μg/mL）。因此，450 g/L咪鲜胺对层出镰刀菌室内毒力最强，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.6 7种杀菌剂对藤仓镰刀菌的毒力测定

由表7可知，7种杀菌剂对藤仓镰刀菌的EC50值由小到大依次为450 g/L咪鲜胺（1.63 μg/mL）、25%氰烯菌酯（3.85 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（37.00 μg/mL）、30%丙硫菌唑（93.53 μg/mL）、40%百菌清（198.36 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（858.30 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（1 567.21 μg/mL）。因此，对于藤仓镰刀菌来说，450 g/L咪鲜胺、25%氰烯菌酯对其室内毒力最强，430 g/L戊唑醇、30%丙硫菌唑次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

3 讨论与结论

本研究选取7种广谱杀菌剂分别对小粒材小蠹3种伴生镰刀菌做抑菌试验和室内毒力测定。研究表明，450 g/L咪鲜胺对3种镰刀菌的抑菌效果和毒力作用都远好于其他药剂，30%丙硫菌唑、40%百菌清、25%氰烯菌酯和430 g/L戊唑醇对3种镰刀菌的抑菌效果和毒力作用次之，而25%吡唑醚菌酯、42.4%唑醚·氟酰胺对3种镰刀菌的毒力作用弱，抑菌效果也较差。

本研究中450 g/L咪鲜胺表现最好，咪鲜胺作为一种高效低毒的广谱杀菌剂，作用机制是抑制麦角甾醇生物合成，同时具有保护、铲除的双重作用，这类药剂还具有内吸、传导性的特点，常被应用于防治由子囊菌和半知菌引起的多种作物病害[12]。周鑫钰等选用7种杀菌剂对从蓝莓根腐病病样上分离鉴定出的尖孢镰刀菌进行室内毒力测定，结果表明，咪鲜胺对其抑制效果显著，EC50為0.071 59 mg/L[13]。孟珂等在测定咪鲜胺、戊唑醇、咯菌腈等8种杀菌剂对9种薄壳山核桃炭疽菌的室内毒力试验中，发现咪鲜胺对9种病原菌菌丝抑制作用最强，平均EC50为0.14 mg/L[14]。此外，咪鲜胺和其他化学药剂混配在病害防治中也表现出一定的增效作用，马雪莉等在对咪鲜胺与嘧菌酯及其混剂对禾谷镰孢菌的毒力测定中发现，咪鲜胺与嘧菌酯配比为4 ∶2时增效作用最强，EC50仅为0.044 mg/L[15]。

本研究中的室内毒力测定内容仅针对7种单一药剂进行，关于化学药剂与其他化学药剂的复配剂、化学药剂与植物源药剂复配剂是否能够起到增效的作用还需进一步研究。此外，本试验仅对病原菌在室内离体条件下进行了毒力测定，还需在林间被害株上进一步验证。

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