酸枣仁不同炮制品以及不同配伍方式有效成分的含量比较*

赵 婉，王艳艳，黄莉莉，赵 航，李廷利

（1.黑龙江中医药大学 药学院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江省医院 药学部，黑龙江 哈尔滨 150000）

酸枣仁汤为补养心肝、益血安神的经典名方[1]，具有镇静催眠、抗焦虑、抗抑郁、抗惊厥和改善心脑血管疾病等作用[2,3]，现代临床多用于治疗不同类型焦虑、抑郁、神经衰弱及各类疾病伴失眠患者[4]。酸枣仁汤原名酸枣汤，最早记载该方的典籍是张仲景《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治第六》，其述：“虚劳，虚烦不得眠，酸枣汤主之”[5]。后来清朝俞嘉言在《医门法律》将其更名为酸枣仁汤[6]。因此，原方中所用“酸枣”是否等同于现在所用的“酸枣仁”，酸枣仁中安神药理作用的主要药效成分总皂苷与总黄酮的含量是否优于酸枣，值得探索与研究。

《金匮要略》中记载的酸枣汤制备方法为“酸枣二升、甘草一两、知母二两、茯苓二两、川芎二两。上五味，以水八升煮酸枣仁得六升，纳诸药煮取三升，分温三服”。根据东汉时期量器得知“二升”酸枣仁的重量为250g 左右[7]。参考上述汤剂煎煮方法，在其他因素不改变的条件下，分别考察提取温度、粉碎程度、浸泡时间对汤剂总黄酮与总皂苷含量的影响，优化汤剂的提取工艺。本实验选择山西阳泉的道地酸枣，将其加工为酸枣仁和炒酸枣仁，同一批次产地药物间的含量比较更为准确可靠。

1 实验部分

1.1 仪器与药品

MS105 型分析天平（梅特勒-托利多国际贸易有限公司）；N-1300 型旋转蒸发仪（日本EYELA 公司）；SP-1920 型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。

HAc（天津市富宇精细化工有限公司）；HClO4（天津政成化学制品有限公司）；香草醛（天津博迪化工股份有限公司）；Al（NO3）3（天津市致远化学试剂有限公司）；NaNO2（天津市光复精细化工研究所）；NaOH（天津市凯通化学试剂有限公司），以上试剂均为分析纯。

酸枣，购自山西省阳泉市平定县；酸枣仁（由酸枣加工而得）；炒酸枣仁（取上述酸枣仁，按照2020年版《中国药典》清炒法（通则0213）炒至略微膨胀鼓起，颜色变深，微有香味）；酸枣仁汤（酸枣仁同上，茯苓、知母、川芎、甘草均购自同仁堂）；芦丁对照品（DST181101-017，纯度：HPLC≥98% 成都德思特生物有限公司）；酸枣仁皂苷A 对照品（DST190709-058，纯度：HPLC≥98% 成都德思特生物有限公司）。

1.2 方法学考察

1.2.1 酸枣汤剂制备方法 取酸枣适量，精密称定，加入适量水，在水沸腾后煎煮25min，过滤，浓缩至200mL，备用。

1.2.2 标准曲线的绘制

（1）总黄酮标准曲线 精密称定芦丁对照品适量，于25mL 容量瓶中，用无水乙醇超声溶解并定容。精密移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mL 于7 个10mL容量瓶中备用。依次加入5% NaNO2溶液0.6mL，摇匀，放置6min，加入10%Al（NO3）3溶液0.4mL，摇匀，放置6min，加入4% NaOH 溶液4mL，摇匀，用无水乙醇定容，摇匀，放置15min。以0mL 标准品溶液为空白试剂，以紫外可见分光光度计上510nm 处测定的吸光度值为y，以芦丁质量（mg）为x 进行线性回归，回归方程y=0.4843x+0.024，R2=0.9926。结果显示，总黄酮在0.200～1.000mg 范围内线性关系良好。

（2）总皂苷标准曲线 精密称定酸枣仁皂苷A标准品适量，加甲醇溶解，定容于10mL 容量瓶，摇匀，备用。分别精密移取120、220、280、360、440、500μL 于6 个10mL 试管中，53℃水浴挥干溶剂，各试管中加入5%香草醛-HAc 溶液200μL，HClO4800μL，摇匀，60℃水浴15min 后，立即取出置冰水浴2min，各加5mL HAc，以0mL 标准品溶液为空白试剂，以紫外可见分光光度计上472nm 处测定的吸光度值为y，以酸枣仁皂苷A 质量（mg）为x 进行线性回归，回归方程y=1799.5x+0.0679，R2=0.9988。结果显示，总皂苷在0.05472～0.23712ng 范围内线性关系良好。

1.2.3 精密度实验 按照1.2.1 项下制备样品溶液，按1.2.2 项下方法分别连续测定6 次吸光度，结果见表1。

表1 总黄酮和总皂苷精密度实验结果Tab.1 Results of precision test of total flavonoids and total saponins

由表1 可知，测得总黄酮、总皂苷的吸光度RSD 分别为0.63%、0.24%，结果表明，所用仪器精密度良好。

1.2.4 稳定性实验 分别在3、6、12、24、48h 测定总黄酮的吸光度，0，10，30，120，150，180min 测定总皂苷的吸光度，结果见表2。

表2 总黄酮和总皂苷稳定性实验结果（吸光度A）Tab.2 Results of the stability test of total flavonoids and total saponins

由表2 可知，其吸光度RSD 分别为1.92%、1.16%，结果表明，样品在考察时间范围内稳定性良好。

1.2.5 重复性实验 取同一批酸枣，制备6 份样品溶液，分别测定总黄酮和总皂苷吸光度RSD 结果见表3。

表3 总黄酮和总皂苷重复性实验结果Tab.3 Results of reproducible experiment of total flavonoids and total saponins

由表3 可知，总黄酮和总皂苷吸光度为1.66%、1.65%，结果表明，此方法重复性良好。

1.2.6 加样回收率实验 精密称取已知含量的6 份样品，分别加芦丁、酸枣仁皂苷A 对照品适量，按1.1.2 项下方法操作，表4 为总黄酮、总皂苷加样回收实验结果。

由表4 可知，平均回收率分别为98.19%、98.97%，RSD 分别为4.38%、3.01%。

表4 总黄酮、总皂苷加样回收实验结果Tab.4 Results of total flavonoids and total saponin recovery test

2 结果与讨论

2.1 单因素影响实验

2.1.1 提取温度的影响 称取225g 酸枣，加入1600mL 水，分别在60、70、80、90、100℃温度下提取，煎煮25min 至水煎液为1200mL 时，过滤，浓缩至200mL。总黄酮与总皂苷含量结果见图1。

由图1 可以看出，在一定范围内，随着提取温度的增加，总黄酮和总皂苷的含量逐渐增加，当提取温度为100℃时，总黄酮和总皂苷的含量最高。

图1 提取温度对酸枣总黄酮和总皂苷含量的影响Fig.1 Effect of extraction temperature on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

2.1.2 粉碎程度的影响 将酸枣粉碎为最粗粉（全部通过1#筛，但混有能通过3#筛不超过20% 的粉末），粗粉（全部通过2#筛，但混有能通过4#筛不超过40%的粉末），中粉（全部通过4#筛，但混有能通过5#筛不超过60%的粉末）。称取225g 酸枣粉末，加入1600mL 水，在100℃温度下提取，煎煮25min至水煎液为1200mL 时，过滤，浓缩至200mL。总黄酮与总皂苷含量结果见图2。

由图2 可以看出，在一定范围内，随着粉碎程度的增大，总黄酮和总皂苷的含量越来越高，当粉粹程度超过粗粉后，总黄酮和总皂苷的含量减少，当粉粹程度为粗粉时，总黄酮和总皂苷的含量最高。

图2 粉碎程度对酸枣总黄酮和总皂苷含量的影响Fig.2 Effect of comminution degree on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

2.1.3 浸泡时间的影响 称取225g 酸枣，加入1600mL 水分别浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0h，在100℃下提取，煎煮25min 至水煎液为1200mL 时，过滤，浓缩至200mL。总黄酮与总皂苷含量结果见图3。

图3 浸泡时间对酸枣总黄酮和总皂苷含量的影响Fig.3 Effect of soaking time on the content of total flavonoids and total saponins of suanzao

由图3 可以看出，浸泡时间过短，总黄酮和总皂苷提取不完全，浸泡时间超过1.5h 后，总黄酮和总皂苷含量的变化不是很大，当浸泡时间为1.0h 时，总黄酮和总皂苷的含量最高。

综上所述，制备工艺为称定225g 酸枣粗粉，加入1600mL 水浸泡1h 后，在100℃温度下煎煮25min至水煎液为1200mL 时，过滤，即得。

2.2 酸枣仁系列药物汤剂总黄酮与总皂苷含量比较

2.2.1 样品制备方法 按照制备工艺研究确定的粉碎程度，浸泡时间和提取温度，选择优化的方法制备酸枣仁系列药物汤剂。

2.2.2 总黄酮与总皂苷含量测定 分别应用1.2.1和1.2.2 的方法，移取适量样品溶液测定各汤剂中总黄酮与总皂苷的含量，分析比较含量的变化趋势。酸枣仁系列药物总黄酮与总皂苷含量见表5。

表5 酸枣仁系列药物总黄酮与总皂苷含量（%）Tab.5 Total flavonoids and total saponins content of a series of medicines of suanzaoren

由表5 可知，总黄酮含量：酸枣仁汤（酸枣仁）<炒酸枣仁<酸枣仁汤（酸枣）<生酸枣仁<生-炒酸枣仁配伍<酸枣；总皂苷含量：炒酸枣仁<酸枣仁汤（酸枣仁）<酸枣仁汤（酸枣）<生酸枣仁<生-炒酸枣仁配伍<酸枣。

3 结论

从本实验结果可以看出，相较于酸枣仁，酸枣安神的有效成分总黄酮和总皂苷含量更高。将酸枣仁汤中的酸枣仁替换为酸枣后其总黄酮与总皂苷的含量依旧高于酸枣仁汤。以上结果可以为酸枣仁汤转变为酸枣汤提供理论支持。酸枣仁加工成本高，售价不菲，如若替换为酸枣将会大幅度简化制备工艺，充分利用药用资源，为酸枣的新药研发开辟新思路。目前，学者们认为总皂苷和总黄酮成分是酸枣仁汤安神的主要药效基础，其他成分是否影响酸枣仁汤的临床疗效还需要进一步的研究，酸枣仁汤中的酸枣仁能否更换为酸枣还需要药效学实验结果的支持。