厚朴树不同高度皮层药用成分含量变化分析

马冬雪, 刘剑锋，胡明娇，李炳忠，陈 娟，刘仁林

(1.河北政法职业学院 园林系，河北 石家庄 050061；2.萍乡市林业科学研究所，江西 萍乡 337000；3.赣南师范大学 生命科学学院，江西 赣州 341000)

厚朴Houpoeaofficinalis(Rehder & E.H.Wilson) N.H.Xia & C.Y.Wu为木兰科 Magnoliaceae厚朴属Houpoea植物，主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖南、广东及广西等地区[1-2].据文献[3]记载，中药材厚朴为厚朴和凹叶厚朴HoupoeaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，有燥湿消痰、下气除满的功效.厚朴中活性物质主要是厚朴酚及和厚朴酚，在抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、心脑血管、中枢神经、消化等方面具有明显的药理作用[4-10].研究文献表明，种源、树龄、坡位、药用部位等是影响厚朴树皮厚度及所含药理成分含量的关键因素，如杨占南等[11]研究表明，厚朴最佳药材采集树龄为10 a；张丹等[12]研究表明，根皮、干皮、枝皮和厚朴叶中厚朴酚与和厚朴酚的含量差异明显[13-16].植物同一部位药用成分含量与其生长高度联系紧密[17]，而关于厚朴树不同高度皮的药用成分含量变化情况至今未见报道.本文中，笔者对厚朴不同高度皮中厚朴酚、和厚朴酚含量进行测定分析，探索不同高度厚朴树干皮层中药用成分含量变化规律，为厚朴皮药材等级划分、栽培管理、树皮采集、中药方剂应用等提供科学依据.

1 材料与方法

1.1 取 样

3株取样厚朴树位于井冈山自然保护区狮子岩，海拔810 m，树龄9 a，胸径13.7～14.0 cm，树高11.9～12.5 m.从树干基部(地面)向顶梢依次量取，每50 cm为一个取样区间，将该区间的树皮全部剥取，阴干得到样品(见表1).除在树干上取样外，还在枝条上取样，即在3株取样的厚朴树中，选1根最粗的枝条(枝条基部最粗)，在其长度的一半处切断，分为2段，取下半段(最粗的)剥皮作为枝条皮测定的样品.

表1 厚朴药材具体取样方法Tab.1 Specific Sampling Methods of Houpoea officinalis m

1.2 方 法

1.2.1 仪器与试剂

岛津LC-10A高效液相色谱仪：DGU-14A 脱气机，LC-10AT 二元泵，SIL-10AD自动进样器，CTO-10AS 恒温箱，SPD-10AZ紫外检测器，LC solution 化学工作站.FW-177中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，KQ-250DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BS124S 电子天平(Sartorius，220 g/0.000 1 g)，ME5赛多利斯超微量电子分析天平(Sartorius，5 100 mg/0.001 mg)，WP-UP-IV-20沃特浦(双取水口)超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司).

甲醇(分析纯，上海振兴化工一厂)、超纯水、甲醇(色谱纯，霍尼韦尔贸易(上海)有限公司)、和厚朴酚对照品(批号为110720-201313)及厚朴酚对照品(批号为110729-200412)均购于中国药品生物制品检定研究院.

1.2.2 测定方法

1)色谱条件.Welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-水(V(甲醇)∶V(水)=78∶22)，流速为1 mL/min.检测波长为294 nm，柱温25 ℃.在此条件下，样品中和厚朴酚与厚朴酚能达到基线分离,结果见图1.

a.对照品；b.厚朴药材.图1 厚朴药材供试品和对照品的HPLC图谱Fig.1 HPLC Diagrams of the Tested and Control Substances of Houpoea officinalis

2)对照品溶液的配制.分别取和厚朴酚、厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇溶解配制成33.2,34.3 μg/mL溶液.

3)样品溶液的配制.分别将不同的厚朴药材粉碎，过3号筛，精密称定0.1 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，摇匀，密塞，浸渍24 h，过滤，精密量取续滤液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度线处，摇匀，过滤后即得.

4)标准曲线的测定.用甲醇分别配制成0.08 mg/mL厚朴酚、0.096 mg/mL和厚朴酚标准品溶液，然后分别测定得到回归方程.

5)精密度测定.取0.1 mg/mL的混标溶液10 μL，按同样的色谱条件进行HPLC分析，连续3次进样，测定3次厚朴酚、和厚朴酚的含量，衡量仪器的精密度.

6)稳定性和加样回收率.相同色谱条件下分别在0,2,4,6,8,24 h进样10 μL，计算厚朴酚、和厚朴酚的含量，衡量两者的稳定性.精密称取厚朴酚、和厚朴酚至已知含量的厚朴原药材中，按样品溶液配制方法操作，配制样品液，按同样的色谱条件测定厚朴酚、和厚朴酚的含量，计算加样回收率.

1.2.3 含量测定

每个高度取3份供试品溶液4 μL，注入液相色谱仪，按“1.2.2”色谱条件进行测定，记录结果，计算平均值，得到不同高度厚朴药材中和厚朴酚与厚朴酚的含量.

各高度剥取的厚朴干皮均符合文献[3]中厚朴药材含量测定规定，即产品按干燥品计算，厚朴酚、和厚朴酚的总含量不得少于2.0 %.

2 结果与分析

2.1 厚朴树干不同高度皮中药用成分含量变化

测定得到的井冈山产厚朴枝条及不同高度皮的药用成分含量见表2.不同高度厚朴皮中厚朴酚与和厚朴酚的总含量在树干高度0.5 m(离地面)处为最大值(46.6 mg/g)，高度10.5 m处的总含量最低(29.6 mg/g).不同高度树干皮中厚朴酚、和厚朴酚的总含量平均值为34.8 mg/g.厚朴酚含量最高值出现在高度0.5 m处(28.0 mg/g)，最低值出现在高度9.5 m处(20.3 mg/g),平均值为23.0 mg/g；和厚朴酚含量最高值也出现在高度0.5 m处(18.6 mg/g)，最低值出现在高度10.5 m处(9.0 mg/g)，平均值为11.7 mg/g.由此可知，厚朴酚、和厚朴酚含量随树干高度有相似的变化规律，但同一高度皮中的厚朴酚含量高于和厚朴酚含量.枝条皮中2种药用成分的总含量为28.3 mg/g，其中厚朴酚含量为19.5 mg/g，和厚朴酚含量为8.8 mg/g.总体上来说,枝条皮中的厚朴酚与和厚朴酚含量均低于树干皮，与高度10.5 m以上树干皮中的含量接近.

表2 3株厚朴树不同高度皮中厚朴酚、和厚朴酚含量平均值Tab.2 The Average of Magnolia and Honokiol Contents in Bark of 3 Trees of Houpoea officinalis at Different Heights

2.2 厚朴树不同高度皮中药用成分含量比较

厚朴树不同高度皮中药用成分含量变化如图2所示.2种药用成分的总含量与厚朴酚、和厚朴酚各自的含量变化趋势一致，总体上随高度的增高而下降;2种药用成分都在树干高度0.5 m处含量最高，且明显高于其他高度区间值;高度1.5 m是一个明显的“拐点”，超过此高度，2种药用成分具有增、减波动现象;高度超过7.5 m的树干皮中，厚朴酚与和厚朴酚总含量与厚朴酚含量、和厚朴酚含量均明显下降，说明7.5 m以下的厚朴皮具有较高的药用价值，因此，厚朴皮在划分等级时可以用高度表示，如0.5 m高度的干皮可列为1级品、0.5～1.5 m为2级品、1.5～7.5 m为3级品、7.5 m高度以上的干皮可列为等外品；不同高度树干皮中厚朴酚含量的极差最大，为0.77 %，表明厚朴酚的积累与树龄有关，高度较高的树干皮层的年龄较小，厚朴酚含量也很小，厚朴皮的采收树龄最佳为9～11 a.

图2 厚朴树不同高度皮中药用成分含量变化Fig.2 Changes in the Content of Medicinal Ingredients in Bark of Houpoea officinalis at Different Heights

3 结论与讨论

1) 不同高度厚朴皮中厚朴酚、和厚朴酚总含量在树干高度0.5 m(离地面)处为最大值(46.6 mg/g)，平均值为34.8 mg/g,其中厚朴酚含量最高为28.0 mg/g，平均含量为23.0 mg/g,和厚朴酚含量最高仅为18.6 mg/g，平均含量为11.7 mg/g.

2) 所有高度树干皮中厚朴酚、和厚朴酚含量均高于枝条皮中的含量.

3) 不同高度树干皮中药用成分含量差异明显，但整体上呈现随高度升高而递减的趋势.

4) 高度1.5 m是一个明显的“拐点”，超过此高度，厚朴酚与和厚朴酚含量具有增、减波动现象.

5) 枝条皮中厚朴酚与和厚朴酚的含量与高度10.5 m以上树干皮中药用成分的含量接近，具有一定的药用价值.

6) 高度超过7.5 m的树干皮中，厚朴酚与和厚朴酚总含量、厚朴酚含量、和厚朴酚含量均明显下降,说明低于7.5 m的树干皮具有较好的利用价值.因此，厚朴皮划分等级时，可以用高度表示，如0.5 m高度的皮可列为1级品，而7.5 m高度以上的皮可列为等外品.

7) 厚朴皮中厚朴酚、和厚朴酚含量呈现随树干高度升高而递减的趋势，但并非线性均匀减少，而是呈现增、减波动变化.王晓明等[17]研究也得到了相似的规律；秦彦杰[18]对黄檗不同高度树皮的药用成分进行了分析，结果表明药用成分含量也表现为随树干高度升高而降低，且在0～1.5 m随高度的增高变化最大，与笔者研究结果相似.由此可见，药材质量与树龄有关.

厚朴是重要传统药物，栽培和药用历史悠久.由于人类的干扰，野生厚朴资源急剧减少.因此，要做好种质资源收集及人工栽培研究，加强厚朴规范性生产与有效利用，创新提取工艺技术，提高药用成分含量及活性[19-20].