血清miR-129-5p水平与STEMI病人PCI术后预后的关系

王留才，赵 鹏，孙红蕾

ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction，STEMI)是临床常见的心血管疾病，是导致我国乃至全球范围内致残和致死的重要疾病之一[1]。STEMI心电图表现为ST段抬高，常由于冠状动脉粥样斑块破裂导致心肌细胞供血降低或中断引起的，及早开通梗死冠状动脉、恢复血流灌注是挽救濒死心肌的有效措施。近年来，随着介入技术的迅速发展，经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention，PCI)为STEMI主要的治疗措施，可显著降低病人死亡率。多项研究显示，PCI术后仍有部分病人发生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events，MACE)，严重影响病人预后，因此，早期评估预后具有重要的临床意义[2-3]。相关研究表明，动脉粥样硬化是STEMI及术后MACE发生的基础病变，血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)自噬[4]和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)增殖[5]在动脉粥样硬化病理生理过程中发挥着重要作用。微小RNA(microRNA，miRNA)为一类非编码RNA分子，有研究显示，miR-129-5p通过抑制多种细胞增殖和调节自噬，避免疾病发生发展[6]，因此推测miR-129-5p可能参与动脉粥样硬化的病理生理过程。本研究分析血清miR-129-5p变化与STEMI病人PCI术后预后的关系，以期为STEMI病人PCI术后预后提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月—2017年12月焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院内科收治的164例STEMI病人。纳入标准：符合《急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》[7]中STEMI诊断标准；发病至入院时间<12 h；均接受PCI治疗；符合《中国经皮冠状动脉介入治疗指南(2016)》[8]中PCI治疗标准；病人或家属对本研究均知情同意；初次发病；入组前未接受抗血小板治疗。排除标准：近3个月进行过外科手术史；近6个月有输血史；严重肝、肾功能障碍；急性感染性疾病；自身免疫系统疾病；恶性肿瘤；临床资料不完整或不能接受随访。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 收集两组性别、年龄、体质指数(BMI)、吸烟、饮酒、病史、Killip分级[9]、病变位置、病变支数。采用贝克曼DXC600全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglycerides，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、血肌酐(serum creatinine，Scr)、糖化血红蛋白(hemoglobin a1c，HbA1c)、C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)水平。应用贝克曼LH750全自动血细胞分析仪测定白细胞计数(white blood cell count，WBC)，迈瑞DC-8EXP彩色多普勒超声诊断仪检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)。

1.2.2 血清miR-129-5p水平测定 抽取所有病人术前3 mL空腹静脉血，以3 000 r/min离心10 min，离心半径10 cm，取上层血清，置于-80 ℃环境保存。应用总RNA提取试剂盒(无锡百泰克生物技术有限公司生产)提取血清总RNA，取2 μg总RNA加入20 μL反应液中，TaKaRa逆转录试剂盒(北京宝日医生物技术有限公司)转录合成cDNA，加入0.5μL正向引物：5′-GGCTTTTTGCGGTCTGG-3′，0.5 μL反向引物：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′，进行实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)，扩增条件：95 ℃ 1 min，94 ℃ 10 s，52 ℃ 40 s，60 ℃ 40 s，循环35次，以U6作内参，正向引物：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向引物：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。采用2-ΔΔCt法计算血清miR-129-5p相对表达量。

2 结 果

2.1 两组临床资料比较 根据术后1年是否发生MACE分为MACE组(43例)和无MACE组(121例)。MACE组血清miR-129-5p水平和LVEF低于无MACE组，多支病变比例、血清CRP水平高于无MACE组(P<0.05或P<0.01)，两组Killip分级比较，差异有统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 两组临床资料比较

2.2 不同血清miR-129-5p水平病人MACE发生情况比较 根据血清miR-129-5p水平中位数(1.21)将STEMI病人分为两组，高miR-129-5p水平组(≥1.21，81例)出现1例心源性死亡，2例血运重建，2例不稳定心绞痛发作，1例再发心肌梗死，MACE发生率为7.41%(6/81)；低miR-129-5p水平组(<1.21，83例)出现3例心源性死亡，6例血运重建，7例不稳定心绞痛发作，4例再发心肌梗死，其中2例均有发生，MACE发生率为21.69%(18/83)。低miR-129-5p水平组MACE发生率高于高miR-129-5p水平组，差异有统计学意义(χ2=5.399，P=0.020)。

2.3 影响STEMI病人PCI术后预后的多因素Cox回归分析 以随访时间为时间变量，miR-129-5p、Killip分级、病变支数、LVEF、CRP为自变量，以是否出现MACE为因变量(是=1，否=0)，多因素Cox回归分析结果显示，miR-129-5p为STEMI病人PCI术后预后的保护因素，Killip分级、多支病变为危险因素(P<0.05)。详见表2。

表2 影响STEMI病人PCI术后预后的多因素Cox回归分析

2.4 血清miR-129-5p水平预测STEMI病人PCI术后预后的临床价值 ROC曲线显示，血清miR-129-5p水平预测STEMI病人PCI术后MACE发生的ROC曲线下面积(AUC)为0.871[95%CI(0.824，0.918)]，Youden指数为0.599，截断值为1.34，灵敏度为81.25%，特异度为78.63%。详见图1。

图1 血清miR-129-5p预测STEMI病人PCI术后预后的ROC曲线

3 讨 论

STEMI起病急、进展快，短期内出现心功能急剧恶化，尽管PCI可极大降低病人死亡率，但每年仍有5%的病人发生心源性死亡、血运重建、不稳定型心绞痛发作、再发心肌梗死等MACE，严重影响病人预后[10]。动脉粥样硬化是指动脉内膜血液和脂肪组成部分积累，引起动脉血管壁发生病理变化，目前研究认为与VEC和VSMC密切相关。自噬为细胞内重要的降解系统，通过溶解酶体降解细胞内受损蛋白质、细胞器等成分，促进细胞内能量和物质再生[11]。VEC功能失调主要是由于氧化型低密度脂蛋白胆固醇、活性氧、肿瘤坏死因子-α、循环炎性因子等引起。有研究显示，自噬为VEC关键细胞过程，可抵抗氧化应激、炎症反应对VEC的刺激，保护VEC功能，随着刺激增强，基础自噬水平升高，引起过度自噬，大量消耗细胞器和细胞质，损伤VEC功能，导致内膜完整性受损，大量脱落VEC，增加血小板、淋巴细胞、单核细胞、多核细胞对血管内皮的黏附性，促进动脉粥样硬化发生[12]。氧化应激、炎症反应不仅损伤VEC，还可激活外膜单核巨噬细胞释放细胞因子，增强外膜成纤维细胞还原型酶Ⅱ氧化酶活性，产生大量活性氧，刺激VSMC异常增殖、迁移、合成细胞外基质，导致动脉粥样硬化形成[13]。VSMC通过旁分泌和自分泌方式激活巨噬细胞，使其聚集于受损部位，进一步破坏受损部位，促进疾病发展，并通过自身细胞膜表面脂蛋白受体摄取血液脂质，促使泡沫细胞形成，大量聚集于硬化斑块，导致斑块破裂，加重病情[14]。

有研究显示，动脉粥样硬化是由于P53、H1F1、活化T细胞核因子、信号转导子及转录激活子1/3、核转录因子κB、激活蛋白-1等多个转录因子被激活，调控下游与细胞周期调节、氧化应激、炎症有关的多个基因[15]，为从基因角度深入了解动脉粥样硬化的病理生理机制提供了方向。miRNA是一组长约22个核苷酸的非编码RNA，通过序列特异性碱基互补配对结合靶miRNA的3′-UTR，抑制靶miRNA翻译，在转录后水平调控基因表达，参与调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、自噬等多种生物学功能[16]。既往研究显示，miRNA可改变血管发生、心肌梗死、心肌肥厚、冠心病等多种心血管疾病的重要生物学过程[17]。miR-129是由染色体7q22.1与11p11.2的miR-129-1与miR-129-2基因编码而成，其前体miRNA可在5′端剪切下形成miR-129-5，在多种癌症中处于低表达，具有抑制上皮间质转化和细胞增殖、凋亡、分化、自噬、耐药形成等作用[18]。Gu等[19]研究显示，胶质瘤组织miR-129-5表达降低，上调其表达后，通过靶向DNMT3A抑制细胞增殖，乳酸生成量和葡萄糖消耗量降低。Zhang等[20]研究显示，miR-129-5p可靶向ATG14抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路，通过过氧化氢诱导的H9c2细胞自噬和凋亡，缓解缺血性心脏病的临床症状。上述研究说明miR-129-5具有抑制细胞增殖进而调节自噬作用。本研究结果显示，MACE组血清miR-129-5p水平低于无MACE组，低miR-129-5p水平组MACE发生率高于高miR-129-5p水平组(P=0.020)，说明MACE病人血清miR-129-5p水平降低，高miR-129-5p水平可降低MACE发生率。多因素Cox回归分析结果显示，miR-129-5p为STEMI病人PCI术后预后保护因素(P<0.05)。说明随着血清miR-129-5p水平升高，STEMI病人PCI术后MACE风险降低，分析由于miR-129-5p通过降低Beclin-1蛋白表达，抑制动脉粥样硬化过程中VEC过度自噬，避免动脉粥样硬化形成[21]；通过靶向Wnt5a抑制VSMC增殖，避免巨噬细胞等聚集于受损血管，抑制动脉粥样硬化进展[22]。Killip分级、多支病变为STEMI病人PCI术后预后的危险因素(P<0.05)，分析是Killip分级越高，心力衰竭程度越严重，心功能较差，同时多支病变病人PCI术后易发生再狭窄，故易发MACE。ROC曲线显示，血清miR-129-5p预测STEMI病人PCI术后发生MACE的AUC为0.871，灵敏度、特异度分别为81.25%、78.63%，说明miR-129-5p可作为预测STEMI病人PCI术后预后的指标。

综上所述，血清miR-129-5p水平与STEMI病人PCI术后预后密切相关，测定血清miR-129-5p水平有助于识别MACE高危病人，促进预后改善。由于本研究为单中心研究，今后需开展多中心临床试验，并动态观察miR-129-5p变化，进一步明确miR-129-5p与MACE的关系。