循环肿瘤DNA超深度测序在肺结节恶性评估的应用研究

黄冬云 许文景

【摘要】目的：针对当前循环肿瘤DNA超深度测序用于疑似肺结节恶性患者的效果开展深入分析，为疑似肺结节恶性患者的诊断以及后续治疗提升指明改进方向。方法：選择我院2020年6月到2021年12月疑似肺结节恶性患者为研究对象，对其进行循环肿瘤DNA超深度测序以及金标准诊断，分析判断研究循环肿瘤DNA超深度测序在肺结节恶性评估的应用价值。结果：循环肿瘤DNA超深度测序诊断的灵敏度为92.45%，特异度为50.00%，准确度为90.91%。结论：循环肿瘤DNA超深度测序可以为肺结节恶性患者的病情评估提供积极意义。

【关键词】循环肿瘤DNA超深度测序;诊断精准度;灵敏度;特异度;肺结节恶性

【中图分类号】R521 【文献标识码】A 【文章编号】2026-5328（2022）02--01

循环肿瘤DNA作为当前肿瘤标识物，在恶性疾病诊断、治疗过程中发挥着积极价值。疑似肺结节恶性患者可以通过循环肿瘤DNA超深度测序，识别该肿瘤标志物，进一步为提供诊断指导方向[1]。针对循环肿瘤DNA的靶向捕获、深度测序，未来会是一个很有前景的临床肿瘤基因检测方案，将会在未来临床上有着积极的使用2]。现列举55例疑似肺结节恶性患者进行回顾性讨论。具体报告如下：

1.资料及方法

1.1一般资料

所有患者均签署知情同意书，经医学伦理委员会批准，研究人员结合纳排标准后，选择我院2020年6月到2021年12月55例疑似肺结节恶性患者为研究对象。患者：男性30例，女性25例;年龄为28-64岁，平均年龄（45.45±3.66）岁。

1.2方法

首先采集疑似患者的静脉血液，然后抽提血浆游离DNA，并且用抽提好的DNA来构建文库。用捕获试剂盒来对文库进行杂交捕获。在这个 Panel 当中，包括按照 hg19 参考基因组序列，设计目标区域。这些区域可以用于检测点突变、和插入缺失突变。同时，对于 ALK 和 ROS1 这两个基因中常见的、易发生融合基因突变的位点，也设计了相应的捕获探针，来更好地检测到融合基因突变。捕获完毕的文库用高保真聚合酶进行扩增，然后对 PCR 扩增产物进行纯化。扩增好的文库，用 HiSeq 2000 测序仪，进行读长100碱基的双端测序，这里要特别说明一下，ctDNA 的测序是非常深的，一般情况下，会测到上万倍、甚至几万倍的测序深度。在Aaron 的文章当中，平均每个ctDNA 样本测2.1G的数据。也就是说，测序的数据量相当于捕获目标区域大小的17000倍。把测序得到的序列，进行生物信息学分析。在ctDNA的数据分析当中，有一些与传统的捕获测序分析过程不一样的参数设定。

1.3 指标判定

诊断准确率=循环肿瘤DNA超深度测序为肺结节恶性人数/真肺结节恶性人数x100%。敏感性=循环肿瘤DNA超深度测序为肺结节恶性人数/（真肺结节恶性人数+假阴性人数）x100%。特异性=循环肿瘤DNA超深度测序为阴性人数/（真阴性人数+假肺结节恶性人数）x100%。

2.结果

分析55例疑似肺结节恶性患者循环肿瘤DNA超深度测序诊断结果，发现其阳性诊断人数为50例，阴性人数为5例。实际金标准诊断中55例疑似肺结节恶性患者中，存在53例阳性，2例阴性。所以，循环肿瘤DNA超深度测序诊断的灵敏度为92.45%，特异度为50.00%，准确度为90.91%。具体情况见下表1：

3.讨论

正常细胞和肿瘤细胞都会破裂，细胞破裂之后，细胞中的DNA就会被释放到体液当中去。进入血液的这部分DNA，就称为血液游离DNA[3]。cfDNA片段的长度范围在100bp～240bp之间，大部分集中在170bp左右。测序时把cfDNA抽提出来，建成DNA测序的文库，再用探针杂交、或者PCR扩增等方法，把其中与肿瘤相关的DNA富集出来，进行高通量测序[4]。

分析循环肿瘤DNA超深度测序在肺结节恶性评估情况，可以发现，循环肿瘤DNA超深度测序诊断的灵敏度为92.45%，特异度为50.00%，准确度为90.91%。

综上所述，循环肿瘤DNA超深度测序在肺结节恶性评估过程中存在积极价值，其在未来的一段时间内将在临床上得到更大的价值与意义，进一步为临床恶性疾病的诊断提供价帮助。

参考文献：

[1]吕爽，李卉，巴雅力格，孙岩岩，呼群.高通量基因测序技术检测外周血循环肿瘤DNA基因突变在非小细胞肺癌中的应用[J].现代肿瘤医学，2019，27（13）：2291-2295.

[2]Gahee Park，Joo Kyung Park，Dae-Soon Son，Seung-Ho Shin，Yeon Jeong Kim，Hyo-Jeong Jeon，Jae Lee，Woong-Yang Park，Kwang Hyuck Lee，Donghyun Park. Utility of targeted deep sequencing for detecting circulating tumor DNA in pancreatic cancer patients[J]. Scientific Reports，2018，8（1）.

[3]周春莲，徐伟文.基于深度测序的循环肿瘤DNA检测在肿瘤诊治中的应用进展[J].中国新药杂志，2017，26（20）：2401-2405.

[4]梁会营. 基于靶向外显子深度测序的转移性乳腺癌患者循环肿瘤DNA定量检测及其临床应用研究[D].南方医科大学，2016.

课题编号：YZ20200071