ECLIA与ELISA行乙肝病毒血清检验的效果比较

常楠

乙型肝炎是一种常见的临床病症，发病后可引发全身性反应，常见如黄疸、消化道反应、肝区明显疼痛、肝脾肿大以及肝外纤维化等，少数患者会伴随发热，此种疾病的病程通常都比较长，且迁延难愈，如果得不到及时、有效的治疗，将逐步进展为慢性肝硬化，严重者甚至转为重型肝炎、肝细胞癌等严重疾病，严重危害到患者的身体健康及生命安全[1]。目前，临床尚未研发出可以根治此疾病的特效药物，疾病死亡率较高，且疾病确诊时间越晚，临床预后越差，因此，早诊断、早治疗是改善患者临床预后的关键，但是乙肝病毒的变异性比较强，早期难以发现，加上早期发病时无典型临床症状，极容易被忽视，导致治疗延误，对疾病预后造成不良影响，因此，寻找一种科学、准确的早期疾病诊断方法，及时检出病毒感染，确诊疾病，对患者疾病预后改善有积极作用[2]。血清学检验是当前临床用于乙肝炎病毒检测的常用方法，常见如用电化学发光免疫分析技术（electrical chemiluminescent immunoassay，ECLIA）、酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）等，且多数研究认为ECLIA检验的临床应用效果更优于ELISA[3]。基于此，文章对比了乙肝病毒血清学检验中ECLIA和ELISA的应用效果，现道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

摘选110例2020年3月—2021年3月于医院就诊疑似为乙肝病毒感染的患者，现以随机抽取的方式进行对等分组，A组（n=55）男30例，女25例；年龄33～74岁，平均年龄（48.35±3.42）岁；B组（n=55）男28例，女27例；年龄32～75岁，平均年龄（48.29±3.38）岁；此研究在取得医院伦理委员会授权后开展，组间基线数据比较后差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

入组标准：入组患者均存在肝脏肿大、腹水、恶心及肝区疼痛等临床表现；无其他肝病；所有患者均表示自愿加入研究，并签署知情协议。

排除标准：并发心、肺、肾等重要器官严重病变者；精神或者认知异常，沟通交流有明显障碍者；处于妊娠或是哺乳期女性。

1.2 方法

A组采用ELISA，具体方法为：于晨起空腹状态下，采集受检者肘静脉血液样本，剂量为5 mL，采集完成后，以3 000 r/min的速度进行离心处理，离心时间为10 min，然后提取出分离血清开展血清学检验；取酶联免疫吸附试验试剂，将其置于室温环境当中，30 min后，提取血液样本，将其加入到微孔反应条当中进行封锁处理，之后置入到恒温水浴箱当中，置放1 h，取出反应条，去除条上存留液体之后，重复进行冲洗5次，再次置入到水浴箱当中，保存30 min后，将其取出，滴入终止液，进行阳性结果检测。

B组采用ECLIA，具体方法为：于晨起空腹状态下，采集受检者肘静脉血液样本，剂量为5 mL，采集完成后，以3 000 r/min的速度进行离心处理，离心时间为10 min，之后提取出分离血清进行血清学检验，将分离血清置入到聚苯乙烯试管当中，以100μL的辣根过氧化酶实施抗体标记，再将其置入到恒温环境内，保存2 h之后，采用磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffer saline，PBS）作为缓冲液（厂家：北京生物制品研究磷酸盐平衡生理盐水所，国药准字：S10850002，规格：250 mL）实施重复冲洗3次，然后提取0.1 mol/L的氢氧化钠（厂家：深圳市博林达科技有限公司，生产批次：20130425A，规格：0.1 mol/L）与30 mol/L的鲁米诺（供应商：上海源叶生物科技有限公司，货号：S19197-100g，规格：30 mol/L）加入，放置10 min左右，采用发光仪对血清学相关指标的阳性结果进行测定。

1.3 观察指标

经计两组受检者的乙型肝炎病毒核心抗体（hepatitis B virus core antibody，HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗体（hepatitis B virus surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗体（hepatitis B virus e antibody，HBeAb）以及乙型肝炎病毒e抗原（hepatitis B virus e antigen，HBeAg）等血清指标阳性检出率进行统计，各项指标的阳性结果判定标准[4]为：（1）ECLIA：将临界值指数（cut off index，COI）比值作为检测结果，检验后，如果HBsAg、HBeAg两项指标COI值≥1.0时，则将最终的结果判定为阳性；若乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）两项指标的COI＜1.0，可将结果判定为阳性检出，而抗-HBs指标值≥10 IU/L时，即可将结果判定为阳性检出。（2）ELISA：检测结果采用S/CO代表，当HBsAg、HBeAg及抗-HBs三项指标的S/CO值≥1.0时，则最终结果判定为阳性检出；当抗-HBe、抗-HBc两项指标的S/CO值＜1.0时，则最终结果判定为阳性检出。

以实时荧光定量PCR检验（real-time quantitative polymerase chain reaction，RQ-PCR）结果作为参照，对比两组的乙型肝炎诊断准确率 [（真阳性数+真阴性数）/总病例数×100%]、灵敏度 [真阳性数/（真阳性数+假阴性数）×100%] 及特异度 [特异度=真阴性数/（真阴性数+假阳性数）×100%]。

1.4 统计学处理

此研究所有数据均以SPSS 22.0进行分析与处理，计数资料以（n，%）表示，行χ2检验；计量资料均以（±s）表示，行t检验，当P＜0.05时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对比两种方法的乙型肝炎诊断准确率、灵敏度以及特异性

经RQ-PCR检验，B组55例患者中，共检出乙型肝炎47例，A组55例患者中检出45例，由此结果得出，B组乙型肝炎检出准确率、灵敏度以及特异度与A组对比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 对比两种方法的乙型肝炎诊断准确率、灵敏度以及特异性（%）

2.2 对比两组乙肝病毒血清学检验结果

检验结果显示，B组HBsAg、HBeAg以及HBeAb此三项的阳性检验结果与对比A组明显更高，差异有统计学意义（P＜0.05）；但对HBsAb、HBcAb两项的阳性结果，则B组与A组对比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 对比两组乙肝病毒血清学检验结果 [例（%）]

3 讨论

乙型肝炎是一种以肝脏为病变位置的临床疾病，主要由乙肝病毒感染引发，是一种具备较强传染性的疾病类型，近年来，随着我国国民经济水平的提升，人们的生活方式、饮食结构等均发生了巨大的变化，乙型肝炎的发生率也呈现为逐年上升趋势，给我国国民的健康带了巨大危害[5]。乙型肝炎的发病主要是由于患者机体感染了乙肝病毒，而对于感染患者来说，对其血清标志物进行全面检验，是判定其感染情况及病情严重程度的主要依据，比如其血清当中的HBsAg指标显示为阳性时，则可以认为此例患者已经进入感染阶段中，而发生HBsAg感染之后，其机体内部会随之产生一定量的抗-HBs抗体，这种抗-HBs可以发挥良好的保护作用，所以如果此项指标检测出阳性，则可以判定患者的机体已经开始产生免疫力；另外患者受到乙型肝炎感染时，其肝细胞会产生一定量的HBeAg，因此，如果此项标检验结果显示为阳性，则表示患者已经进入了病毒的活跃复制期，这个时间的病毒具备极强的传染性，当其受到HBeAg的刺激，则机体就会产生抗-HBe，所以，如查抗-HBe检验结果显示为阳性，则表明乙型肝炎的传染性开始逐步减弱，也说明患者的病情已经有所缓解[6-7]。

就目前来说，临床用于乙肝病毒血清学检验的方法比较，而这其中又以酶联免疫吸附法、电化学发光免疫分析技术最为常用，在乙肝病毒学清学检验当中均发挥出了良好的果，从而在临床中得到广泛应用，但普遍研究显示[8]，与酶联免疫吸附试验法对比，电化学发光免疫分技术在乙肝病毒学清学检验方面更有优势，不仅在检验的适用范围更广大，操作上也更加简单，同时还具备了较好的重复性；另外，电化学发光分析技术需要的反应时间更短，可以更加快速的获取检验结果，因此，临床认可度相对来说更高。在乙肝病毒的早期感染时期，患者血液样本中可检出HBsAg，且这种异常能够维持的有效时间比较长，可以直接采用电化学发光分析技术对此项标志物的实际水平进行准确检测，从而提升病毒感染的早期检出率[9-10]。酶联免疫吸附法在乙肝病毒血清学检验中的应用，主要是利用抗体与抗原所具备的特异性，其待检测物能够连接酶，并出现特异性的反应，最后实现检测目标，就原理主而言包括两方面：（1）酶与患者机体当中存在的抗原或者是抗体可以发生连接，同时形成酶标抗原与抗体，这种抗体有着良好的免疫活性，也保留了酶活性。（2）患者机体产生抗原或抗体后，能与某种固相载体表面发生结合，从而确保其活性得以维持，不易受到损伤，检验速度相对较快，且检验的成本较低，这也是此种检验方法得以在临床检验得到广泛应用的主要原因，而且此方法不会对环境或者是人体造成危害，但是在检验的灵敏度方面略低于电化学发光免疫分析技术，检验中容易出现漏诊或者假阳性现象[11]。

电化学发光免疫分析技术是一种比较新型的临床检验方式，此种检验方法，对电化学发光和免疫检验两种方式的优点进行了有效结合，能够借助于电化学发光剂对受检者机体当中的抗体进行标记，再通过分离技术，对抗原、抗体进行准确分离，用于乙肝病毒血清学检测的敏感度非常高，从而大大提升了乙型肝炎的疾病检出率。电化学发光免疫分析技术有着独特的重复性，其对电磁铁进行了有效利用，实现了检验操作的自动化，从而避免了人为操作可能出现的失误，大大提升了检验操作的精确度，也避免了标本处理不当可能引发的溶血、污染等情况而导致的假阳性检出，进一步提升了血清学相关指标的检出准确率[12-13]。在本次研究中发现，B组乙型肝炎检测准确率、灵敏度以及特异度相较于A组差异无统计学意义（P＞0.05）；B组的HBcAb、HBsAb阳性检出率与A组差异无统计学意义（P＞0.05），但B组的HBsAg、HBeAb以及HBeAg阳性检出率相较于A组则明显更高，差异有统计学意义（P＜0.05），表明ECLIA用于乙肝病毒血清标志物检验准确性相较于ELISA确实更高。

综上所述，在乙型肝炎病毒血清学检验中，电化学发光免疫分析技术检验的准确率、灵敏度以及特异度与酶联免疫吸附试验相当，但前者的乙肝病毒血清学标志物检验准确率更高，值得推广。