AIDS患者抗病毒治疗中IP-10水平的变化及临床意义

范伟光， 苏苗苗， 孟 娟， 石鹏辉， 张 珍

（1.保定市人民医院检验科，河北 保定 071000；2.保定市人民医院感染科，河北 保定 071000）

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是导致人类免疫功能缺陷的主要病毒，可主动整合入宿主细胞的DNA，难以彻底清除[1]。HIV感染可导致机体出现严重的免疫功能抑制和缺陷，进而导致多种机会性感染、恶性肿瘤等并发症，最终导致死亡[2]。近年来，随着高效抗逆转录病毒治疗（highly active antiroviral therapy，HAART）的广泛应用，由HIV感染导致的获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的传染率及病死率明显下降。但AIDS患者体内的HIV仍可以以潜伏形式，即前病毒DNA的形式持续存在，持续存在的HIV储存库是无法根治HIV感染的根本原因[3]。干扰素诱生蛋白10（interferon-inducible protein-10，IP-10）属于趋化因子CXC亚家族，由白细胞、上皮细胞、内皮细胞、基质细胞和角化细胞等细胞分泌[4]。IP-10可通过与CXC趋化因子受体3（CXC chemokine receptor 3，CXCR3）结合，发挥趋化作用，募集多种CXCR3+细胞进入炎症部位[5]，介导辅助性T细胞（T helper cell，Th）1型炎症反应。IP-10与病毒性感染中的炎症反应也有密切关系，在机体抗病毒感染的免疫应答过程中，通过与其受体CXCR3的相互作用参与机体的免疫应答反应[6]。目前，关于AIDS患者治疗前后IP-10的变化及IP-10与HAART疗效的关系的研究较少。为此，本研究拟探讨IP-10在HIV感染中的临床价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年1月—2019年6月保定市人民医院接受HAART的AIDS患者200例（AIDS组），其中男155例、女45例，年龄（34.57±7.62）岁。以HAART后血浆HIV-1 RNA＜50 拷贝/mL定义为病毒抑制，根据治疗后的HIV-1 RNA水平将AIDS患者分为HIV-1抑制组和HIV-1未抑制组。纳入标准：（1）酶联免疫吸附试验和免疫印迹法均确认HIV-1抗体阳性；（2）初次确诊为HIV感染，处于感染无症状期，未接受过HAART；（3）最近1个月内未出现外伤、急慢性感染或炎症性疾病；（4）最近1个月内未服用过抗菌药物、免疫调节药物等；（5）无免疫系统疾病史；（6）无严重心、脑、血管、肝脏、肾脏等重要脏器疾病；（7）符合HIV-1抗病毒治疗条件；（8）患者治疗依从性和随访依从性良好，且签署知情同意书。排除标准：（1）并发乙型肝炎、丙型肝炎、全身感染等其他感染性疾病；（2）并发恶性肿瘤及严重的心、脑、血管、肝脏、肾脏等重要脏器疾病；（3）处于妊娠期及哺乳期；（4）有吸毒史；（5）治疗依从性差，不能完成治疗及配合随访。另选取保定市人民医院健康体检者100名作为正常对照组，其中男75名、女25名，年龄（35.49±8.15）岁。纳入标准：（1）经酶联免疫吸附试验和免疫印迹法确认为HIV-1抗体阴性；（2）体格检查正常，各项实验室检测指标均处于参考区间内，或超出参考区间但判断无临床意义；（3）无严重心、脑、血管、肝脏、肾脏等重要脏器疾病史或住院史；（4）无手术、外伤、输血和药物过敏史；（5）签署知情同意书。AIDS组与正常对照组性别、年龄差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究经保定市人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法

HIV-1感染患者确诊后立即接受HAART，采用我国一线免费抗病毒治疗方案[7]：富马酸替诺福韦二吡呋酯片，0.3 g/次，每天1次；拉米夫定0.3 g/次，每天1次；依非韦伦0.6 g/次，每天1次。所有患者均持续治疗18个月。

1.3 方法

分别于治疗前及治疗2周、1个月、2个月、3个月、6个月、12个月和18个月时采集AIDS患者空腹肘静脉血8～10 mL。样本采集后采集正常对照者体检当日空腹肘静脉血8～10 mL，分别置于普通真空采血管和乙二胺四乙酸二钠抗凝采血管中，混匀，分离血清或血浆。

在抗凝血样本中加入单克隆荧光抗体标记，采用BD FACSCalibur 流式细胞仪（美国BD公司）及配套试剂检测CD4+和CD8+T细胞水平。采用cobas TaqMan全自动病毒载量分析系统（瑞士罗氏公司）检测血浆HIV-1 RNA，检测下限和定量下限均为20 拷贝/mL。采用Quantikine酶联免疫试剂盒（美国R&D Systems公司）测定血清IP-10水平，严格按试剂说明书操作，试剂盒最低检测限为1.67 pg/mL，线性范围1.67～5 000 pg/mL，批内和批间变异系数分别为3.6%、6.7%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以x±s表示，2个组之间比较采用独立样本t检验，治疗前后比较采用配对t检验。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用Spearman相关分析评估IP-10与其他指标之间的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AIDS组HIV-1 RNA水平

AIDS组中同性传播149例（74.50%），异性传播51例（25.50%），HIV-1 RNA为（4.62±0.73）lg拷贝/mL。

2.2 AIDS组与正常对照组各项指标比较

AIDS组CD4+T细胞百分比显著低于正常对照组（P＜0.01），IP-10水平和CD8+T细胞百分比显著高于正常对照组（P＜0.01）。见表1。

表1 AIDS组与正常对照组各项指标比较

2.3 AIDS患者治疗前、后各项指标比较

与治疗前比较，AIDS患者随着治疗时间的延长，CD4+T细胞百分比逐渐升高（P＜0.01），CD8+T细胞百分比及IP-10、HIV-1 RNA水平逐渐降低（P＜0.01），HIV-1复制受抑制的患者比例逐渐升高（P＜0.01）；治疗18个月时HIV-1抑制的患者所占比例达到95.50%。见表2。

表2 AIDS患者治疗前及治疗后各时间点各项指标的比较

2.4 治疗后各时间点HIV-1抑制患者与HIV-1未抑制患者各项指标的比较

治疗3、6、12和18个月时，HIV-1抑制组CD4+T细胞百分比显著高于HIV-1未抑制组（P＜0.01），CD8+T细胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制组（P＜0.01）。见表3。

表3 治疗后各时间点HIV-1抑制组与HIV-1未抑制组各项指标的比较

2.5 AIDS患者治疗前IP-10水平与CD4+T细胞百分比、CD8+T细胞百分比、HIV-1 RNA水平的相关性

Spearman相关分析显示，治疗前AIDS患者IP-10水平与CD4+T细胞百分比呈负相关（r=-0.763，P＜0.05），与CD8+T细胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相关（r值分别为0.801、0.823，P＜0.05）。

3 讨论

HIV感染人体后主要攻击辅助性T淋巴细胞，侵入细胞后会通过同源重组机制将自身的病毒基因整合入宿主T淋巴细胞，使其终生难以消除。IP-10是一种重要的CXC家族趋化因子，主要诱导因子是γ干扰素（interferon-gamma，IFN-γ），IP-10可通过与其受体的作用来趋化并激活Th至病灶位置，从而激活机体的免疫系统，抵抗感染，并抑制病毒复制过程[8]。在生理状态下，IP-10的表达量较低；在病理条件下，各种抗原刺激可诱导外周血单个核细胞产生大量IP-10[9]。有Meta分析结果显示，IP-10可作为诊断肺结核的生物标志物，具有较高的敏感性和特异性[10]。有研究结果显示，IP-10是感染HIV后水平最早上升的细胞因子之一[11]。IP-10可作为筛查急性期发热的血清HIV抗体阴性者是否感染HIV的关键指标，当血浆IP-10水平为161.6 pg/mL时，其诊断HIV急性感染的敏感性、特异性分别为95.5%、76.5%[12]。本研究结果显示，AIDS组IP-10水平显著高于正常对照组（P＜0.01）。HIV-1感染可分别通过Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）7/9信号通路或黑色素瘤分化相关基因5（melanoma differentiationassociated gene 5，MDA5）/视黄酸诱导基因蛋白Ⅰ（retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ）信号通路依赖性诱导IP-10表达上调[13]。在HIV急性感染期，聚集的浆细胞样树突状细胞可通过产生干扰素诱导包括单核细胞和嗜中性粒细胞在内的多种白细胞表达IP-10[14]。在HIV慢性感染期，HIV感染持续诱导产生的IFN-γ也可直接诱导IP-10表达上调[15]。此外，本研究结果还显示，AIDS组CD4+T细胞百分比显著低于正常对照组（P＜0.01），CD8+T细胞百分比显著高于正常对照组（P＜0.01）。这与HIV感染人体后主要攻击Th细胞有关。

ROE等[16]的研究结果显示，丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）与HIV合并感染患者血清IP-10水平显著高于HIV单独感染患者（P=0.012）；在HCV单独感染患者中，肝纤维化与血清IP-10水平呈正相关（r=0.605，P=0.013）。本研究结果显示，AIDS患者接受HAART后，CD4+T细胞百分比升高，HIV-1 RNA水平、CD8+T细胞百分比和IP-10水平降低；治疗3、6、12和18个月，HIV-1抑制患者CD4+T细胞百分比显著高于HIV-1未抑制患者（P＜0.01），CD8+T细胞百分比和IP-10水平均低于HIV-1未抑制患者（P＜0.01）；Spearman相关分析结果显示，AIDS患者IP-10水平与CD4+T细胞百分比呈负相关（r=-0.984，P＜0.05），与CD8+T细胞百分比和HIV-1 RNA水平呈正相关（r值分别为0.958、0.991，P＜0.05）。LIOVAT等[17]研究发现，在原发HIV感染的初期，血浆IP-10≥869 pg/mL预示HIV感染进展迅速，IP-10水平升高预示着CD4+T细胞的迅速减少，同时能预测急性感染6个月后CD4+T细胞计数的变化。NOEL等[18]的研究结果显示，HIV精英控制者入组时IP-10水平与12个月后的CD4+T细胞计数呈负相关（r=-0.41，P=0.000 9）。RAMIREZ等[19]的研究结果表明，IP-10相关的T细胞功能下降可能是钙信号传导途径异常的结果，同时也是p38磷酸化蛋白表达下降的结果。IP-10水平不仅与CD4+T细胞快速减少有关[20]，同时还可影响CD4+T细胞和CD8+T细胞的功能[21]。因此，IP-10可作为判断HIV感染严重程度的关键指标，还可作为判断HAART临床疗效的指标。

总之，AIDS患者IP-10水平变化明显，且与CD4+T细胞、CD8+T细胞及HIV-1 RNA水平有关，是潜在的AIDS病情和疗效评估的指标。