miR-150在肾透明细胞癌中的表达水平及临床意义

王 哲 韩前河 程传宇 郑州人民医院泌尿外科，河南省郑州市 450000

肾细胞癌(Renal cell carcinoma, RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，而肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)是其最常见的病理类型，占肾癌的70%～80%[1]。目前早期RCC的首选治疗方式为外科手术治疗，而晚期则以化疗或分子靶向治疗为主，但疗效均不够理想，总体生存率较低[2]。因此，筛选特异性高的RCC生物学肿瘤标记物，可为临床治疗提供有力帮助，同时对于提高患者预后生存也具有重要意义。近年来，miR-150的表达失调已被证实与多种恶性肿瘤密切相关[3]。目前，关于miR-150在RCC中的临床意义还有待进一步确认。本研究拟通过实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)检测ccRCC组织中miR-150的表达水平，探讨其在ccRCC中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2016年8月—2018年8月在我院泌尿外科行肾脏切除术的68例ccRCC患者的ccRCC组织及其配对的癌旁组织(距离RCC组织边缘≥1cm)。纳入标准：(1)病理诊断为原发性ccRCC；(2)均行手术治疗，术前未接受过放化疗及靶向治疗等；(3)临床资料完整。排除标准：(1)有其他恶性肿瘤史；(2)有自身免疫性疾病史。68例ccRCC患者中，男53例，女15例；年龄42～76岁，平均年龄(61.38±8.18)岁；肿瘤位于左肾35例，右肾33例；TNM分期Ⅰ期36例，Ⅱ期18例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例；Fuhrman分级Ⅰ级16例，Ⅱ级22例，Ⅲ级20例，Ⅳ级10例。所有患者对本研究知情同意，本研究经我院医学伦理会审批通过。所有患者随访截至2021年8月。

1.2 RT-qPCR 术中组织标本离体后，迅速置于液氮中冻存。检测时取适量液氮中冻存的组织标本研磨成粉末，而后加入1ml Trizol试剂进行匀浆。采用酚—氯仿法提取组织总RNA。采用分光光度计测定总RNA的浓度和纯度，总RNA的纯度在1.8～2.0之间可用于后续实验。参照TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit试剂盒说明书步骤进行操作，将总RNA反转录为cDNA，置于-20℃条件下备用。以cDNA为模板，参照TaqMan MicroRNA Assay试剂盒(ABI，美国)说明书进行操作，在ABI Prism 7500型荧光定量PCR仪上进行RT-qPCR，检测miR-150的表达水平。以U6 snRNA为内参，采用2-ΔΔCt方法计算miR-150的相对表达水平。

2 结果

2.1 miR-150在ccRCC组织中的表达 RT-qPCR检测ccRCC组织中miR-150的相对表达量为2.07±0.34，明显高于癌旁组织中的1.05±0.13，差异具有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 miR-150在ccRCC组织中的相对表达水平

2.2 ccRCC组织中miR-150的表达与临床病理特征的相关性 以ccRCC组织中miR-150相对表达量的均值(2.10)为界限，将ccRCC患者分为高表达组(n=38)和低表达组(n=30)。比较两组患者临床病理特征的差异，结果发现两组间的性别、年龄及肿瘤部位无统计学差异，但高表达组中肿瘤大小≥7cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、Fuhrman分级为Ⅲ～Ⅳ级、淋巴结转移及复发的患者比例显著高于低表达组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同miR-150表达组中患者临床病理特征比较[n(%)]

2.3 ccRCC组织中miR-150表达与患者预后关系 Kaplam-Meier生存分析结果如图2所示。高表达组患者的无进展生存期和总生存期均明显低于低表达组，经Log-rank检验发现，差异具有统计学意义(χ2=7.057，P=0.008；χ2=11.539，P=0.001)。

图2 ccRCC患者的Kaplan-Meier生存曲线

2.4 影响ccRCC患者预后的Cox回归分析 采用单因素及多因素Cox回归分析影响患者无进展生存和总生存的预后因素，结果显示肿瘤大小、TNM分期、Fuhrman分期、淋巴结转移及miR-150的表达均为ccRCC患者无进展生存和总生存期的影响因素；多因素Cox回归分析进一步发现，TNM分期是影响ccRCC患者无进展生存期的独立预后因素，TNM分期及miR-150是影响ccRCC患者总生存期的独立预后因素。见表2和表3。

表2 影响患者无进展生存期的单因素和多因素Cox回归分析

表3 影响患者总生存期的单因素和多因素Cox回归分析

3 讨论

目前，关于miR-150在多种肿瘤中的表达及临床意义已得到广泛研究，但关于其功能的结论尚未达成一致。如miR-150在非小细胞肺癌中高表达，作为促癌基因参与非小细胞肺癌的发生发展及预后[4]。在宫颈癌中，miR-150也呈现高表达并作为促癌基因调控宫颈癌的发生及发展[5]。但miR-150在结直肠癌中表达下调，与患者临床病理特征有一定相关性，在结直肠癌的发生发展过程中起抑癌作用[6]。同时，miR-150在甲状腺乳头状癌组织中也呈低表达，作为抑癌基因在甲状腺乳沟癌的发生发展中发挥作用[7]。因此，miR-150在不同肿瘤中的临床意义及其促癌或抑癌作用不同，还有待进一步阐明。

目前，国内尚未发现关于miR-150在RCC中的表达意义的相关研究。在国外研究中，Chanudet E等[8]进行了大规模的全基因组筛查发现miR-150在ccRCC患者血浆中高表达，与RCC患者的预后有关；Lokeshwar SD等[9]采用qPCR分析同样发现miR-150和miR-155等6个miRNA的表达在RCC组织中显著上调，并可能与RCC亚型和临床结局有关。在本文中，采用RT-qPCR检测发现miR-150在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织，且可能与ccRCC的肿瘤大小、TNM分期、Fuhrman分级、淋巴结转移及复发有关。同时Kaplan-Meier生存分析结果显示，miR-150高表达组患者的无进展生存期和总生存期较低表达组更差。为进一步分析miR-150在ccRCC患者预后中的作用，采用单因素和多因素Cox回归分析对患者的无进展生存和总生存预后进行分析，结果发现，肿瘤大小、TNM分期、Fuhrman分期、淋巴结转移及miR-150是影响ccRCC患者无进展生存和总生存的预后因素，同时TNM分期是影响ccRCC患者无进展生存和总生存的独立预后因素。而miR-150可作为独立预后因子预测ccRCC患者的术后总生存期，但不能够用于独立预测ccRCC患者的术后无进展生存情况，这可能是因为miR-150的作用机制尚未完全明确、其作用受其他因素的影响，也可能与本研究样本量较小有关。

综上所述，本研究认为miR-150在ccRCC中呈高表达，与患者的临床病理特征及预后密切相关，在ccRCC的发生发展中发挥促癌基因的作，有望成为ccRCC患者诊断及预后评估的新型标志物及分子治疗的靶点。