早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达及其与内镜黏膜下剥离术预后的关系

李本杰， 周倩， 彭志红

近些年，内镜下手术治疗早期胃癌在我国得到推广[1]，内镜下黏膜切除术(EMR)和内镜黏膜下剥离术(ESD)是常用的两种内镜下手术方式，与EMR比较，ESD的优势在于更高的整块切除率、组织学治愈性切除率以及更低的术后复发率[2-5]。国内两项研究证实早期胃癌ESD后的复发率约3%[4-5]。因此，发现早期预测复发的分子标志物具有积极的临床价值，是临床学者目前关注的热点。

长链非编码RNA(lncRNA)是近些年受到越来越多关注的一类内源性竞争性RNA，能够起到内源性竞争性RNA的功能、削弱微小RNA(microRNA，miR)对靶基因的调控作用，最终实现基因表达的转录后调控。Zhang等[6]研究发现，胃癌组织及胃癌细胞株中lncRNA FTX的表达明显增加，且lncRNA FTX通过靶向结合miR-215促进胃癌细胞的增殖。但是，在早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达是否发生变化、lncRNA FTX靶向调控miR-215的效应是否与术后复发有关，这些问题均未阐明。因此，本研究将对接受ESD的早期胃癌患者进行分析，深入探究lncRNA FTX与miR-215表达的相关性及其与ESD预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

设置回顾性队列研究，选择2015年1月至2017年12月在陆军军医大学第一附属医院接受ESD的早期胃癌患者393例以及胃镜检查并经胃黏膜病理证实为正常胃黏膜的患者94例，分别作为研究的早期胃癌组和对照组。早期胃癌组中男性234例、女性159例，年龄44～70岁、平均(56.22±10.98)岁；对照组男性58例、女性36例，年龄43～68岁、平均(54.98±13.77)岁。两组间一般资料的比较无显著性差异(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准，取得入组患者的知情同意。

1.2 纳入及排除标准

早期胃癌患者的纳入标准：①经病理学诊断为早期胃癌；②接受ESD治疗；③有完整的临床病理资料包括性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、浸润深度；④有完整的随访资料。排除标准：①手术前接受过放化疗或其他抗肿瘤治疗；②有其他恶性肿瘤病史；③失访患者。

1.3 试剂与仪器

lncRNA FTX及miR-215表达检测所用试剂盒均购自北京天根公司，荧光定量PCR仪为美国Bio-rad公司。

1.4 方法

1.4.1 LncRNA FTX表达水平的检测

采用试剂盒提取早期胃癌组织及正常胃黏膜组织中的RNA，配置反转录反应体系、将RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板的荧光定量PCR反应体系，分别使用lcnRNA HCP5及β-actin的引物，在荧光定量PCR仪上完成PCR反应后得到lncRNA FTX及β-actin的循环曲线及循环阈值，以β-actin为内参计算lncRNA FTX的表达量。

1.4.2 miR-215表达水平的检测

采用试剂盒提取早期胃癌组织及正常胃黏膜组织中的miR，以miR为模板反转录合成cDNA，配置以cDNA为模板的荧光定量PCR反应体系，分别使用miR-215及U6的引物，在荧光定量PCR仪上完成PCR反应后得到miR-215及U6的循环曲线及循环阈值，以U6为内参计算miR-215的表达量。

1.4.3 术后复发的随访

采用门诊复查的方式进行随访，随访起始日期为ESD手术当日、随访截止日期为2020年5月31日，ESD术后3、6、12个月时进行门诊复查，而后每年进行1次门诊复查，复查内容包括血常规、肝肾功能、肿瘤标志物、腹部CT、消化内镜。根据随访情况判断无复发生存情况。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 早期胃癌组与对照组lncRNA FTX、miR-215表达的比较

与对照组正常胃黏膜组织比较，早期胃癌组织中lncRNA FTX的表达水平上调，miR-215的表达水平下调，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 早期胃癌组与对照组lncRNA FTX、miR-215表达的比较

2.2 早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达的相关性及生物信息学分析

经Pearson检验，早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达呈负相关，相关系数为-0.548、P<0.001，见图1A；经Starbase数据库的生物信息学分析，lncRNA FTX中含有miR-215的结合位点，见图1B。

图1 早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达的关系。A：Pearson检验分析早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215表达的相关性；B：生物信息学分析lncRNA FTX与miR-215的靶向结合

2.3 早期胃癌复发患者与未复发患者临床资料及lncRNA FTX、miR-215表达水平的比较

早期胃癌复发患者与未复发患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移的比较，无统计学差异(P均>0.05)；早期胃癌复发患者的黏膜下浸润比例、lncRNA FTX表达水平高于未复发患者，miR-215表达水平低于未复发患者，差异有统计学意义(P均<0.05)。

表2 早期胃癌复发患者与未复发患者临床资料及lncRNA FTX、miR-215表达水平的比较

2.4 早期胃癌复发的影响因素

以2.3中有统计学差异的因素浸润深度、lncRNA FTX及miR-215表达作为自变量，以复发情况作为应变量，进行多因素COX回归分析，结果显示：浸润深度、lncRNA FTX及miR-215表达是早期胃癌术后复发的独立影响因素(P<0.05)，见表3。

表3 早期胃癌术后复发影响因素的COX回归分析

2.5 lncRNA FTX、miR-215预测早期胃癌复发的ROC曲线分析

经ROC曲线分析，早期胃癌中lncRNA FTX、miR-215的表达对复发具有预测价值。lncRNA FTX预测复发的ROC曲线下面积为0.756，miR-215预测复发的ROC曲线下面积为0.737,见图2。

图2 早期胃癌中lncRNA FTX、miR-215表达预测复发的ROC曲线 A：早期胃癌中lncRNA FTX表达预测复发的ROC曲线；B：早期胃癌中miR-215表达预测复发的ROC曲线

3 讨论

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤，早期诊断是改善胃癌预后的有效手段，有研究表明，早期胃癌的5年生存率超过90%。近些年来，内镜治疗早期胃癌在我国得到推广且取得了良好的远期预后。EMR和ESD是常用的两种内镜下治疗手段，ESD在EMR基础上改良而来，用于早期胃癌治疗具有不受病变大小及溃疡的限制、能够整块切除病灶并提供准确的病理评估[7-8]。国内白顺滟等[4]研究比较了EMR和ESD治疗早期胃癌疗效的差异，结果发现ESD的术后复发率3.2%明显低于EMR的19.4%；在国内另一项关于ESD治疗早期胃癌的研究中，王伟等[5]随访发生术后复发率2.3%。因此，研究早期胃癌ESD术后复发的可能机制及早期预测标志物具有迫切的临床需求。

LncRNA是长度>200 nt一类具有广泛生物学作用的非编码RNA，多种lncRNAs与恶性肿瘤的发病有关[9-12]。LncRNA FTX是一种具有促癌作用的lncRNA，在胃癌组织及胃癌细胞中表达增加[6, 13]并通过靶向结合miR-215促进胃癌的增殖[6]。另有研究报道，lncRNA对结直肠癌、肝癌、肾癌的增殖、侵袭也具有促进作用[14-16]。本研究纳入了393例接受ESD治疗的早期胃癌患者，胃癌组织中lncRNA FTX的表达较正常胃黏膜组织增加、miR-215的表达较正常胃黏膜组织降低。结合lncRNA FTX靶向miR-215促进胃癌细胞增殖的生物学效应，本研究还分析发现早期胃癌中lncRNA FTX与miR-215具有负相关关系，表明在早期胃癌的发生过程中，lncRNA FTX表达上调能够靶向抑制miR-215、进而促进癌细胞增殖、引起肿瘤发生。

本研究对入组的393例早期胃癌患者进行了ESD术后随访，共15例出现复发，复发率3.82%，与国内外已有关于早期胃癌ESD术后复发率的报道接近。Liang等[17]在胶质瘤中的研究、Li 等[18]在骨肉瘤中的研究及Wang 等[19]在甲状腺癌中的研究均发现，lncRNA FTX高表达是患者预后的影响因素。本研究分析了早期胃癌患者ESD术后复发与lncRNA FTX及miR-215的关系。复发的早期胃癌患者具有更高的lncRNA FTX表达水平、更低的miR-215表达水平，提示早期胃癌中lncRNA FTX及miR-215表达的改变可能与ESD术后复发有关。进一步进行ROC曲线分析及Kaplan-Meier曲线分析，结果显示：lncRNA FTX、miR-215表达对早期胃癌术后复发具有预测价值且不同lncRNA FTX、miR-215的早期胃癌患者无复发生存率有差异。以上结果表明lncRNA FTX表达增加、miR-215表达降低对早期胃癌ESD术后复发具有促进作用。

国内外多项关于早期胃癌的临床研究对早期胃癌术后复发进行了分析，多项病理特征均是术后复发的影响因素[20-25]。刘黎等[23]、操龙洋等[24]、沙林玉等[25]的研究证实：浸润深度是与早期胃癌复发密切相关的病理特征。本研究同时将不同的早期胃癌病理特征及lncRNA FTX、miR-215表达纳入COX回归模型，分析了早期胃癌ESD术后复发的影响因素，结果显示：浸润深度、lncRNA FTX及miR-215表达是早期胃癌术后复发的影响因素。其中，浸润深度与复发相关的结果与国内刘黎等[23]、操龙洋等[24]、沙林玉等[25]的研究吻合；此外，lncRNA FTX、miR-215与复发相关的结果与lncRNA FTX靶向miR-215促进胃癌细胞增殖的生物学效应吻合。

综上所述，早期胃癌中lncRNA FTX表达上调、miR-215表达下调且两者间存在负相关关系，lncRNA FTX及miR-215表达的变化与术后复发有关，可能机制是lncRNA FTX靶向miR-215并促进胃癌细胞增殖，但lncRNA FTX/miR-215轴在早期胃癌发生发展中的作用仍有待今后更多的研究。