傣药“小鱼眼草”化学成分的研究*

张 悦，魏 华，曹新杰，刘红玉

(1.北京市平谷区市场监督管理局检验检测中心，北京 101200；2.吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；3.吉首大学植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000)

菊科鱼眼草属(Dichrocephala)植物全球约5～6种，主要分布于亚洲、非洲及大洋洲的热带地区.我国有3种，分别是菊叶鱼眼草(D.chryaanthemifoliaDC)、鱼眼草(D.integrifolia(Linnaeus f.)Kuntze)和小鱼眼草(D.benthamiiC.B.Clarke)[1].鱼眼草属植物的全草多作为民间用药，其中小鱼眼草为傣族常用药物，称为“帕滚姆”，味苦，具有清热解毒、祛风明目功效，主要用于治疗小儿感冒发烧、肺炎、肝炎、小儿消化不良、痢疾、疟疾、牙痛、夜盲症等，外用可治疗疮疡湿疹、皮炎、子宫托垂和脱肛等病症[2-4].现代药理研究表明，小鱼眼草提取物具有较强的抑菌、镇痛、降糖和杀虫等药理作用[5].然而，目前有关小鱼眼草化学成分的研究报道较少，药效物质基础亟待阐明.基于此，本研究采用各种柱色谱技术对小鱼眼草的乙醇提取物进行分离纯化，采用波谱技术结合化学方法进行结构鉴定，以期探明小鱼眼草的化学成分组成，为后期深入研究小鱼眼草的药用价值，阐明其药用成分及机理提供参考.

1 仪器与材料

Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)，赛默飞世LTQ-Obitrap XL液质联用仪(美国Thermo Fisher公司)，BYLABUV-Ⅲ紫外灯(北京炳洋科技有限公司)，柱色谱用硅胶(青岛海洋化工有限公司)，薄层色谱用硅胶G、H、GF-254和柱色谱用硅胶(青岛海洋化工有限公司)，Sephadex LH-20凝胶(Pharmacia公司)，MCI(日本三菱化学公司)，常规试剂均为分析纯.

小鱼眼草全草采于云南省景洪市，经吉首大学植物资源保护与利用重点实验室陈功锡教授鉴定为菊科鱼眼草属小鱼眼草D.benthamiiC.B.Clarke.

2 提取与分离

小鱼眼草全草(8.0 kg)干燥后粉碎过80目筛，药材粉末加10倍量甲醇加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得总浸膏541 g.总浸膏用水分散后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇各萃取三次，萃取液减压浓缩至干.最终得到石油醚部位浸膏143.2 g，二氯甲烷部位浸膏86.9 g，乙酸乙酯部位浸膏46.7 g，正丁醇部位浸膏161.8 g.

取二氯甲烷部位浸膏86.9 g经硅胶柱色谱(100～200目)分离，石油醚-乙酸乙酯(1∶0～0∶1)梯度洗脱，得到12个馏分(Fr.DB1～Fr.DB12).其中馏分Fr.DB2经硅胶柱色谱(300～400目)分离，石油醚-二氯甲烷(1∶0，100∶1，80∶1，70∶1，60∶1)洗脱得到化合物6(5.1 mg)，8(5.8 mg)，9(7.4 mg)和11(13.6 mg)；馏分Fr.DB3经硅胶柱色谱(300～400目)分离，石油醚-二氯甲烷(90∶1，80∶1，70∶1，50∶1，40∶1)洗脱得到化合物10(2.9 mg)，1(7.1 mg)，2(3.6 mg)和4(5.6 mg)；Fr.DB4经硅胶柱色谱(300～400目)分离，石油醚-丙酮(100∶1，90∶1，70∶1，60∶1，50∶1)洗脱得到化合物3(4.8 mg)，5(7.5 mg)和13(8.0 mg)；Fr.DB5经硅胶柱色谱(300～400目)分离，石油醚-丙酮(90∶1，70∶1，60∶1，50∶1，40∶1)洗脱得到化合物7(2.0 mg)和15(6.2 mg)；Fr.DB6经硅胶柱色谱(300～400目)分离，二氯甲烷-丙酮(100∶1，90∶1，80∶1，70∶1，60∶1)洗脱后再经HPLC纯化得到化合物12(1.4 mg)，14(3.5 mg)和16(2.0 mg).

3 结构鉴定

化合物1，无色粉末，ESI-MSm/z：308[M+Na]+；1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH：6.42(1H，d，J=14.4 Hz，H-2)，7.41(1H，m，H-3)，6.72(1H，m，H-4)，6.74(1H，d，J=15.6 Hz，H-5)，6.96(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.75(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.87(1H，dd，J=8.0，1.8 Hz，H-6′)，5.96(2H，s，OCH2O)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC:165.4(C-1)，119.9(C-2)，142.5(C-3)，125.3(C-4)，138.2(C-5)，131.0(C-1′)，105.8(C-2′)，148.1(C-3′)，148.2(C-4′)，108.5(C-5′)，122.6(C-6′)，101.3(—O—CH2—O—)，43.5(C-1″)，26.3(C-2″)，24.7(C-3″)，26.2(C-4″)，46.8(C-5″).以上数据与文献[6]报道的胡椒碱基本一致.

化合物2，黄色油状物，ESI-MSm/z:330[M+Na]+；1H—NMR(600 MHz，CD3COCD3)δH：0.87(6H，d，J=6.6 Hz，H-9，10)，3.80(3H，s，3′-OCH3)，4.26(2H，d，J=6.0 Hz，H-7′)，6.70(1H，d，J=7.8 Hz，H-5′)，6.72(1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)；13C—NMR(150 MHz，CD3COCD3)δ：172.8(C-1)，36.7(C-2)，26.3(C-3)，30.6(C-4)，28.1(C-5)，28.0(C-6)，39.9(C-7)，28.6(C-8)，22.9(C-9，10)，132.3(C-1′)，112.5(C-2′)，148.4(C-3′)，146.4(C-4′)，115.7(C-5′)，121.0(C-6′)，43.5(C-7′)，56.3(OCH3).以上数据与文献[7]报道的辣椒碱基本一致.

化合物3，黄色油状物，ESI-MSm/z：328[M+Na]+；1H—NMR(600 MHz，CD3COCD3)δH：0.95(6H，d，J=7.2 Hz，H-9，10)，3.79(3H，s，3′-OCH3)，4.26(2H，d，J=6.0 Hz，H-7′)，5.31(1H，m，H-6)，5.33(1H，m，H-7)，6.73(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.75(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6′)，6.87(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)；13C—NMR(150 MHz，CD3COCD3)δ：172.7(C-1)，36.9(C-2)，26.3(C-3)，30.6(C-4)，33.0(C-5)，127.9(C-6)，138.3(C-7)，31.6(C-8)，23.1(C-9，10)，132.1(C-1′)，112.5(C-2′)，148.4(C-3′)，146.8(C-4′)，115.7(C-5′)，121.0(C-6′)，43.5(C-7′)，56.4(OCH3).以上数据与文献[8]报道的二氢辣椒碱基本一致.

化合物4，无色粉末，ESI-MSm/z：212[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH：1.43(3H，t，J=7.2 Hz，—OCH2CH3)，4.42(2H，m，J=7.2 Hz，—OCH2CH3)，7.31(1H，dd，J=7.2，6.6 Hz，H-6)，7.42(1H，dd，J=7.8，7.2 Hz，H-7)，7.95(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，8.02(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，8.22(1H，d，J=6.6 Hz，H-5);13C—NMR(150 MHz，CDCl3)δC：100.4(C-3)，114.1(C-7)，121.8(C-2)，122.2(C-6)，123.5(C-5)，129.1(C-9)，151.5(C-8)，132.2(C-4)，167.4(C-10)，59.8(10—OCH2CH3)，29.7(10—OCH2CH3).以上数据与文献[9]报道的3-吲哚甲酸乙酯基本一致.

化合物5，无色粉末，ESI-MSm/z：198[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH：3.75(3H，s，OCH3)，7.39(1H，dd，J=7.2，6.6 Hz，H-6)，7.44(1H，dd，J=7.8，7.2 Hz，H-7)，7.92(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，8.01(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，8.18(1H，d，J=6.6 Hz，H-5)；13C—NMR(150 MHz，CDCl3)δC：100.4(C-3)，114.3(C-7)，121.6(C-2)，122.4(C-6)，123.7(C-5)，129.0(C-9)，151.7(C-8)，132.1(C-4)，167.9(C-10)，52.4(10—OCH3).以上数据与文献[10]报道的3-吲哚甲酸甲酯基本一致.

化合物6，无色粉末，ESI-MSm/z：168[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CD3OD)δH：7.21(1H，dd，J=9.0，8.4 Hz，H-5)，7.24(1H，dd，J=9.6，8.4 Hz，H-6)，7.48(1H，d，J=9.6 Hz，H-7)，8.07(1H，s，H-2)，8.13(1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，9.86(1H，s，CHO);13C—NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.2(C-2)，122.6(C-3)，120.1(C-4)，125.0(C-5)，123.8(C-6)，113.3(C-7)，139.9(C-8)，125.6(C-9)，187.7(CHO).以上数据与文献[11]报道的3-甲酰基吲哚基本一致.

化合物7，白色粉末，分子式C30H48O4.ESI-MSm/z：495[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，pyridine-d5)δH：0.91(3H，s，25—CH3)，1.02(3H，s，24—CH3)，1.11(3H，s，26—CH3)1.12(3H，d，J=6.6 Hz，30—CH3)1.23(3H，s，23—CH3)，1.45(3H，s，29—CH3)，1.73(3H，s，27—CH3)，3.43(1H，dd，J=15.6 Hz，4.8 Hz，H-3)，5.61(1H，t，J=3.6 Hz，H-12);13C—NMR(pyridine-d5，150 MHz)δC：39.5(C-1)，28.6(C-2)，78.7(C-3)，39.9(C-4)，56.4(C-5)，19.4(C-6)，34.1(C-7)，40.8(C-8)，48.3(C-9)，37.8(C-10)，24.5(C-11)，128.3(C-12)，140.4(C-13)，42.6(C-14)，29.8(C-15)，26.9(C-16)，48.8(C-17)，55.1(C-18)，73.2(C-19)，42.8(C-20)，27.4(C-21)，39.0(C-22)，17.0(C-23)，29.3(C-24)，16.0(C-25)，17.2(C-26)，25.2(C-27)，181.2(C-28)，27.6(C-29)，17.7(C-30).以上数据与文献[12]报道的pomolic acid基本一致.

化合物8，白色粉末，ESI-MSm/z：355[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH：0.78(3H，s，H-19)，0.85(3H，d，J=6.6 Hz，H-17)，1.25(3H，s，H-20)，4.77(2H，d，J=6.6 Hz，H-15)，6.86(1H，t，J=1.8 Hz，H-3)，7.09(1H，s，H-14);13C—NMR(150 MHz，CDCl3)δ：36.2(C-1)，35.9(C-2)，140.5(C-3)，141.4(C-4)，39.0(C-5)，17.8(C-6)，19.7(C-7)，36.4(C-8)，37.9(C-9)，47.1(C-10)，27.6(C-11)，27.6(C-12)，135.3(C-13)，143.8(C-14)，70.4(C-15)，174.6(C-16)，16.3(C-17)，171.7(C-18)，18.5(C-19)，20.8(C-20).以上数据与文献[13]报道的floridiolide A基本一致.

化合物9，无色粉末，ESI-MSm/z：385[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH：0.81(3H，s，H-19)，0.86(3H，d，J=6.0 Hz，H-17)，1.29(3H，s，H-20)，3.38(3H，s，OCH3)，5.88(1H，d，J=4.8 Hz，H-15)，6.67(1H，t，J=1.8 Hz，H-3)，7.07(1H，d，J=4.8 Hz，H-14);13C—NMR(150 MHz，CDCl3)δ：28.3(C-1)，27.9(C-2)，137.6(C-3，13)，139.1(C-4)，40.1(C-5)，18.3(C-6)，19.8(C-7)，37.5(C-8)，38.6(C-9)，47.9(C-10)，36.5(C-11)，37.2(C-12)，143.7(C-14)，103.7(C-15)，171.4(C-16)，171.2(C-16)，16.5(C-17)，18.(C-19)，21.2(C-20)，56.8(OCH3).以上数据与文献[13]报道的16-methoxycleroda-3，13-dien-15，16-olide-18-oic acid基本一致.

化合物10，无色粉末，ESI-MSm/z：399[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CD3OD)δH：0.79(3H，s，H-19)，0.87(3H，d，J=6.6 Hz，H-17)，1.26(3H，t，J=6.6 Hz，—OCH2CH3)，1.28(3H，s，H-20)，3.73(1H，m，—OCH2CH3)，3.84(1H，m，—OCH2CH3)，5.91(1H，d，J=4.2 Hz，H-15)，6.63(1H，t，J=3.6 Hz，H-3)，6.97(1H，d，J=4.2 Hz，H-14);13C—NMR(150 MHz，CD3OD)δ：28.6(C-1)，28.0(C-2)，139.3(C-3，13)，139.1(C-13)，144.2(C-4)，40.4(C-5)，18.7(C-6)，19.7(C-7)，37.6(C-8)，38.5(C-9)，48.5(C-10)，37.4(C-11)，37.5(C-12)，144.7(C-14)，103.5(C-15)，173.4(C-16)，173.6(C-18)，16.5(C-17)，18.9(C-19)，21.3(C-20)，66.7(—OCH2CH3)，15.7(OCH2CH3).以上数据与文献[13]报道的16-ethoxycleroda-3，13-dien-15，16-olide-18-oic acid基本一致.

化合物11，白色晶体，mp 212～214 °C，ESI-MSm/z：449[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CDCl3)δH:0.72(3H，s，CH3)，0.88(3H，d，J=6.6 Hz，H-23)，0.94(3H，s，CH3)，1.00(3H，s，CH3)，1.06(3H，s，CH3)，1.19(3H，s，CH3);13C—NMR(150 MHz，CDCl3)δC：213.4(C-3)，59.6(C-10)，58.5(C-4)，53.2(C-8)，42.8(C-18)，42.3(C-5)，41.6(C-2)，41.4(C-6)，39.6(C-13)，39.5(C-22)，38.4(C-14)，37.8(C-9)，36.1(C-16)，35.5(C-11)，35.6(C-19)，35.3(C-29)，32.9(C-21)，32.5(C-15)，32.2(C-28)，31.8(C-30)，30.6(C-12)，30.1(C-17)，28.4(C-20)，22.4(C-1)，20.5(C-26)，18.8(C-27)，18.5(C-7)，18.2(C-25)，14.8(C-24)，7.0(C-23).以上数据与文献[14]报道的木栓酮基本一致.

化合物12，黄色粉末，ESI-MSm/z：309[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：12.46(1H，s，5—OH)，8.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.91(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.40(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.16(1H，d，J=2.4 Hz，H-6).以上数据与文献报道[15]的山奈酚基本一致.

化合物13，黄色粉末，ESI-MSm/z：325[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CD3OD)δH：7.72(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.63(1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′)，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.38(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=1.8 Hz，H-6);13C—NMR(150 MHz，CD3OD)δC：176.1(C-4)，164.0(C-7)，160.9(C-5)，156.2(C-9)，147.9(C-4′)，147.0(C-2)，145.1(C-3′)，135.8(C-3)，122.1(C-1′)，120.2(C-6′)，116.4(C-5′)，115.8(C-2′)，103.1(C-10)，98.3(C-6)，93.6(C-8).以上数据与文献[16]报道的槲皮素基本一致.

化合物14，无色油状物，ESI-MSm/z:317[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CD3OD)δH：1.09(6H，d，J=6.6 Hz，H-4′，5′)，3.81(6H，s，3，5—OCH3)，4.24(2H，dd，J=6.6，1.8 Hz，H-9)，6.35(1H，dt，J=15.6，6.6 Hz，H-8)，6.57(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，6.76(2H，s，H-2，6);13C—NMR(150 MHz，CD3OD)δC：137.5(C-1)，104.1(C-2，6)，153.8(C-3，5)，129.6(C-4)，131.2(C-7)，130.5(C-8)，172.6(C-1′)，43.7(C-2′)，27.5(C-3′)，22.6(C-4′，5′).以上数据与文献[17]报道的syringenin isovalerate基本一致.

化合物15，白色晶体，mp 246～248 °C，ESI-MSm/z：211[M+Na]+;1H—NMR(600 MHz，CD3COCD3)δH：7.15(2H，s，H-2，6);13C—NMR(150 MHz，CD3COCD3)δC：121.8(C-1)，110.0(C-2，6)，145.7(C-3，5)，138.3(C-4)，167.9(C-7).以上数据与文献[18]报道的没食子酸基本一致.

4 结论

将小鱼眼草用甲醇加热回流提取后，依次使用不同试剂进行萃取，得到二氯甲烷部位浸膏，经柱色谱分离纯化，最终得到15个化合物，包括6个生物碱类，5个萜类，2个黄酮类和3个酚酸类.采用波谱技术结合化学方法进行结构鉴定，15个化合物分别为：胡椒碱(1)、辣椒碱(2)、二氢辣椒碱(3)、3-吲哚甲酸乙酯(4)、3-吲哚甲酸甲酯(5)、3-甲酰基吲哚(6)、pomolic acid(7)、floridiolide A(8)、16-methoxycleroda-3，13-dien-15，16-olide-18-oic acid(9)、16-ethoxycleroda-3，13-dien-15，16-olide-18-oic acid(10)、木栓酮(11)、山奈酚(12)、槲皮素(13)、syringenin isovalerate(14)、没食子酸(15).其中，化合物1～12、14为首次从该植物中分离得到.