乳腺癌组织中NM23 及上皮钙黏素的表达与新辅助化疗效果的关系

杨 磊 杨宏伟 陈茂山 牟德武 程晓明

1.四川省遂宁市中心医院乳腺甲状腺外科，四川遂宁 629000；2.遵义医科大学附属医院甲状腺乳腺外科，贵州遵义 563000

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性健康[1-2]。术前新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy，NCT）是乳腺癌治疗的重要手段之一[3-4]，NCT 能实现肿瘤降期及获得药物敏感性信息[5]。然而，NCT 过程中仍有部分患者出现疾病进展，进而失去手术机会甚至影响预后。因此，寻找与NCT 效果相关的指标对临床决策具有重要意义。NM23 是一种抑癌基因，主要参与抑制肿瘤细胞转移。研究发现，NM23 的缺乏可产生更利于乳腺癌细胞进展和转移的微环境[6]。上皮钙黏素是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与许多实体肿瘤的发展，与乳腺癌细胞系的侵袭和转移能力相关[7]。综上所述，NM23 和上皮钙黏素与乳腺癌进展密切相关，但二者在乳腺癌组织中的表达与NCT 效果之间的关系尚不十分清楚。本研究旨在通过分析乳腺癌组织中NM23 和上皮钙黏素的表达与NCT 效果的关系，为临床决策提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014 年10 月至2017 年10 月在遵义医科大学附属医院（以下简称“我院”）甲状腺乳腺外科接受NCT 的乳腺癌患者穿刺病理标本石蜡块。纳入标准：①NCT 前经穿刺病理确诊浸润性乳腺癌；②既往未接受过全身抗肿瘤治疗；③有可测量的乳腺原发病灶；④接受NCT。排除标准：①穿刺石蜡标本难以满足免疫组化检测；②NCT 疗程<4 周期。本研究共纳入87例女性患者，平均（46.9±7.5）岁；根据NCT 效果将其分为有效组（63例）和无效组（24例）。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 主要试验试剂 免疫组织化学SP 试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；DAB 显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；鼠抗人上皮钙黏素单克隆抗体（Santa Cruz 生物有限公司，AB6528）；鼠抗人NM23-H1 单克隆抗体（Santa Cruz 生物有限公司，SC-465）；PBS 磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液及抗体稀释液等（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1.2.2 乳腺癌组织中NM23 和上皮钙黏素蛋白表达检测及结果判读 本研究采用免疫组化SP 法检测。具体步骤：①石蜡切片脱蜡水化；②微波修复抗原；③封闭后滴加一抗；④复温后滴加二抗；⑤DAB 显色；⑥复染脱水封片。400 倍视野下随机选取5 个部位，根据着色强度和着色占比判定结果[8]。着色强度：未着色记0 分，轻度着色记1 分，中度着色记2 分，重度着色记3 分；着色占比：＜5%为0 分，5%～25%为1 分，＞25%～50%为2 分，＞50%～75%为3 分，＞75%为4 分。两种得分相加：0～1 分为（-），2 分为（+），3～4 分（++），≥5分为（+++）。其中（-）和（+）为阴性，（++）和（+++）为阳性。

1.2.3 化疗效果评估 所有患者行NCT 前后均由我院同一乳腺超声专业组2 名医师（1 名副主任医师，1 名工作5 年以上主治医师）采用超声测量肿瘤的长短径（出现意见分歧时咨询第三位医师）。评估标准：采用实体肿瘤效果评定标准（RECIST 1.0）进行评估。肿瘤完全消失为完全缓解；肿瘤最长径缩小≥30%为部分缓解；肿瘤最长径缩小＜30%或增长≤20%为疾病稳定；肿瘤最长径增加＞20%为疾病进展。其中，完全缓解和部分缓解为NCT 有效，疾病稳定和疾病进展为NCT 无效。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0 对所得数据进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，比较采用t 检验；计数资料采用例数和百分率表示，比较采用χ2检验。采用logistic 回归模型分析影响因素。以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料及NM23、上皮钙黏素表达情况比较

无效组的NM23 阳性、TNM 分期为Ⅲ期、人表皮生长因子受体-2 阳性占比均低于有效组，上皮钙黏素阳性占比高于有效组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组临床资料及NM23、上皮钙黏素表达情况比较[例（%）]

2.2 乳腺癌NCT 效果的影响因素分析

以NCT 效果作为因变量，赋值：无效=1，有效=0，将单因素分析中差异有统计学意义（P ＜0.05）的因素为自变量进行赋值，NM23：阳性=1，阴性=0；上皮钙黏素：阳性=1，阴性=0；人表皮生长因子受体-2：阳性=1，阴性=0；TNM 分期：Ⅲ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0。多因素分析结果显示，上皮钙黏素表达阳性是乳腺癌NCT 无效的独立危险因素（OR ＞1，P ＜0.05），NM23 表达阳性及TNM 分期为Ⅲ期是其保护因素 （OR ＜1，P ＜0.05）。见表2。

表2 乳腺癌NCT 效果的影响因素分析

3 讨论

NCT 是乳腺癌的重要治疗手段之一，能将肿瘤降期，获得手术或保乳机会，同时能提供药物敏感性信息，可用于评估预后及指导后续化疗。但部分患者NCT 效果欠佳，因此，能早期评估NCT 效果具有重要临床意义[9-11]。本研究通过免疫组化检测NCT 前乳腺癌组织中NM23 和上皮钙黏素蛋白的表达情况，分析其在组间的表达差异并进行多因素分析，结果提示NM23 及上皮钙黏素的表达是NCT 效果的影响因素。

NM23 是一种抑癌基因，由5 个外显子和4 个内含子组成，位于17 号染色体着丝点附近p11～q11 间，全长8.5 kb，由533 个核苷酸组成，合成含有152 个氨基酸的蛋白质，主要参与抑制肿瘤细胞转移能力[12-13]。既往研究发现，在黑色素瘤、食管癌和三阴性乳腺癌中NM23 表达阳性组的化疗效果较表达阴性组显著提升[14-17]。本研究发现有效组NM23 表达阳性显著高于无效组，提示NM23 表达与乳腺癌NCT 效果具有一定相关性，可能的原因是，化疗所致DNA 损伤时NM23 会蓄积增加，最终导致了S 期延长，细胞死亡，而当NM23 低表达时，可下调细胞周期蛋白E 和A，导致S 期缩短，而减少细胞死亡[15,18-19]。此外，另一项研究通过细胞计数分析指出，在食管鳞状细胞癌细胞系中加入铂类时，可检测到NM23 水平的增高，最终导致S 期分数显着增加，这意味着NM23 较高的水平可能参与了S 期检查点的激活。因此，NM23 响应DNA 损伤时的上调，可能同时改变细胞周期蛋白的表达，并导致细胞周期停滞，从而发挥其肿瘤抑制基因的作用[20]。

上皮钙黏素是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，分子量约120 kD，位于人染色体16q22.1，由15 个内含子和16 个外显子组成，主要介导细胞之间的黏附连接，参与许多实体肿瘤的发展[7]。有研究发现，上皮钙黏素在MDAMB-435 细胞的表达中，通过上调Bcl-2 的表达从而降低了人乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性[21]。本研究发现，NCT 有效组上皮钙黏素表达阳性占比显著低于无效组，提示上皮钙黏素表达可能对化疗药物敏感性有一定影响，其机制可能为上皮钙黏素作为一种经典的细胞间连接蛋白，被认为是上皮-间质转化的标志，而在上皮-间质转化介导的化疗耐药相关机制中涉及的Notch 信号传导途径可能在癌细胞的化疗耐药中起重要作用[22-24]。目前Notch-1 已被证实在肿瘤组织中的活性与乳腺癌患者对他莫昔芬的耐药性有关[25]。此外，也有学者发现在前列腺癌细胞系中降低上皮钙黏素的表达时细胞迁移能力增加，增强了对紫杉醇的耐药性，而提高上皮钙黏素的表达则降低了癌细胞对紫杉醇的耐药性[26]，提示上皮钙黏素的表达与化疗效果密切相关。目前，上皮钙黏素对癌细胞耐药机制的影响尚不明确，仍有待进一步深入的研究。此外，上皮钙黏素的表达是否与特定药物的敏感性存在关系也有待研究。

综上所述，本研究发现NCT 前乳腺癌组织中NM23和上皮钙黏素的表达与NCT 效果存在显著相关性，未来将需要进一步探讨其具体的作用机制及对各类药物的敏感性关系，将有助于指导临床决策的制订。